2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡(jiǎn)介

1、研究背景:
  多發(fā)性硬化(multiple sclerosis,MS)是一種免疫介導(dǎo)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nervous system,CNS)白質(zhì)慢性炎性脫髓鞘疾病,由遺傳易感性、環(huán)境因素、病毒感染等多種因素共同作用誘發(fā)。其癥狀復(fù)雜,臨床表現(xiàn)為時(shí)間和空間的多發(fā)性,大部分患者具有緩解-復(fù)發(fā)的病程,表現(xiàn)為運(yùn)動(dòng)、感覺、精神和認(rèn)知障礙,呈進(jìn)行性加重。大量研究表明,MS的發(fā)病與外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood

2、 mononuclear cell,PBMC)中Th1/Th2之間的功能失衡有密切關(guān)系,Th1型細(xì)胞分泌IL-12、INF-γ等致炎細(xì)胞因子促進(jìn)MS發(fā)展,Th2型細(xì)胞分泌IL-4、IL-10等抗炎細(xì)胞因子緩解MS病情。循證醫(yī)學(xué)A級(jí)推薦使用皮質(zhì)類固醇激素作為急性發(fā)作和復(fù)發(fā)MS的治療,大劑量糖皮質(zhì)激素沖擊治療可縮短急性發(fā)作期病程,但不能阻止其復(fù)發(fā),且具有骨質(zhì)疏松、股骨頭壞死、上消化道出血等嚴(yán)重不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)。國內(nèi)外研究表明,雌激素對(duì)MS和實(shí)

3、驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)具有保護(hù)作用,但存在誘發(fā)生殖系統(tǒng)腫瘤、血栓性疾病等風(fēng)險(xiǎn),而淫羊藿苷(icariin,ICA)——一種植物雌激素,有明確雌激素樣作用并能調(diào)控體內(nèi)雌激素水平的藥物,在骨質(zhì)疏松、心血管疾病方面具有肯定療效。在我們前期相關(guān)研究中,已證實(shí)ICA通過調(diào)節(jié)內(nèi)源性雌激素水平、雌激素受體( estrogen receoter,ER)介導(dǎo)、增

4、加腦組織糖皮質(zhì)激素受體(glucocorticoid receptor,GR)表達(dá)水平及減少與Th1有關(guān)的細(xì)胞因子、升高與Th2有關(guān)的細(xì)胞因子水平途徑對(duì)EAE起神經(jīng)保護(hù)作用。本研究基于前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究,進(jìn)一步探索ICA對(duì)MS患者體外炎癥因子影響。
  研究目的:
  制備ICA含藥血清,從MS患者外周血中分離提取PBMC,PBMC在植物血球凝集素( phytohemagglutinin,PHA)刺激作用下,加入不同劑量ICA

5、含藥血清,通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-time quantitative PCR,RQ-PCR)檢測(cè)ICA含藥血清作用后PBMC中GR、ERα、ERβmRNA表達(dá)水平變化,采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay, ELISA)對(duì)培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子IL-4、IL-17進(jìn)行檢測(cè)。探討ICA對(duì)MS患者體外炎癥因子水平影響及劑量與療效關(guān)系。
  研究對(duì)象和方法:
  1.研

6、究對(duì)象
  納入研究的10例患者均為急性期MS,診斷符合2010年McDonald診斷標(biāo)準(zhǔn),并排除其他自身免疫性疾病、顱內(nèi)外感染性疾病、腫瘤、近3個(gè)月接受過免疫抑制治療者;健康人組選擇年齡、性別基本匹配的健康志愿者,共10例。
  2.研究方法
  2.1.制備ICA含藥血清和空白血清
  取成年雄性SD大鼠,按每克體重0.25mg ICA計(jì)算給藥量,采用3次給藥法,每次給藥量相等,首次給藥和第二次給藥相隔時(shí)間為

7、20h,第二次和第三次給藥時(shí)間相隔4h,末次給藥后一個(gè)小時(shí)腹主動(dòng)脈采血,靜置30min后離心,取上清過濾除菌,-20℃保存?zhèn)溆?。以相同體積的羧甲基纖維素鈉制得空白血清。
  2.2.PBMC的分離、提取
 ?、俨杉疢S患者及健康人空腹靜脈血20ml,肝素抗凝備用。
 ?、趥浜玫目鼓昧馨图?xì)胞分離液行Ficoll-Paque密度梯度離心分離、提取PBMC。
 ?、奂?xì)胞計(jì)數(shù),稀釋細(xì)胞使其濃度為106/ ml。

8、r>  ④檢測(cè)細(xì)胞活力。
  2.3.PBMC分組及培養(yǎng)
  ①PBMC懸液中加PHA5ug/ml。把細(xì)胞懸液混勻,平均分成8組移至培養(yǎng)板,分別予以相應(yīng)處理。健康人組及MS患者組均分為A0、B0、C0、D0、A1、B1、C1、D18組,A0組為2.5%空白血清對(duì)照組、B0組為5%空白血清對(duì)照組、C0組為10%空白血清對(duì)照組、D0組空白對(duì)照組,A1為2.5%含ICA血清小劑量組、B1組5%含ICA血清中劑量組、C1組10%含I

9、CA血清大劑量組,D1組35ug/L雌激素組。
 ?、谥糜?7℃、5%CO2孵箱中,分別于48、72小時(shí)后于倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)、活化情況。
 ?、叟囵B(yǎng)72h后將PBMC的培養(yǎng)液取出,離心,收集上清及細(xì)胞沉淀,于-80℃保存
  2.4.各組免疫因子檢測(cè)
  各組培養(yǎng)上清IL-4、IL-17的檢測(cè):嚴(yán)格按照IL-4、IL-17 ELISA試劑盒說明書的步驟進(jìn)行操作、檢測(cè)。
  2.5.各組PBMC中GR

10、、ERα、ERβmRNA表達(dá)水平檢測(cè)
  以RQ-PCR方法檢測(cè)PBMC中GR、ERα、ERβmRNA的表達(dá)。
  2.6.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
  采用統(tǒng)計(jì)軟件Graphpad Prism5進(jìn)行分析數(shù)據(jù)。RQ-PCR結(jié)果采用ΔCt法分析,基因相對(duì)表達(dá)量RQ=2-ΔΔCt。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P<0.01差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
  研究結(jié)果:
  1.各組上清液中IL-4的含量
 ?、倥c各自對(duì)照組

11、比較,MS患者各組IL-4水平均有升高,其中中、大劑量ICA組及雌激素組升高有顯著意義(P<0.05),而小劑量 ICA組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
  ②健康人各組IL-4水平下降,其中大劑量ICA組(P<0.05),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;其余各組(P>0.05),無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
 ?、跧L-4濃度差值比較:MS患者中、大劑量ICA組、雌激素組與各自對(duì)照組IL-4濃度差,三組兩兩比較(P>0.05),無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,各組 IL-

12、4升高的幅度相當(dāng)。
 ?、躆S患者與健康人的ICA組與各自對(duì)照組IL-4濃度差值比較:小劑量ICA組(P=0.0147,P<0.05),MS患者小ICA組IL-4升高水平較健康人明顯,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;中、大劑量ICA組(P=0.0025、P=0.0004,P<0.01),MS患者中大ICA組IL-4升高水平較健康人明顯,有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;隨著ICA劑量增大,MS患者IL-4升高幅度較健康人的越明顯。
  2.各組上清液中IL-

13、17的含量
 ?、倥c各自對(duì)照組比較,MS患者各組IL-17水平均有下降,其中中劑量ICA組IL-17下降(P<0.05),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,大劑量ICA組及雌激素組下降(P=0.001、P=0.009,P<0.01),有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,小劑量ICA下降(P>0.05),無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
 ?、谂c各自對(duì)照組比較,健康人各組IL-17水平無明顯變化,各組(P>0.05),均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
 ?、跧L-17濃度差值比較:MS患者中

14、、大劑量ICA組、雌激素組與各自對(duì)照組IL-17濃度差,三組兩兩比較(P>0.05),無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但大劑量組 IL-17下降幅度較中劑量組明顯,與雌激素組相同。
 ?、躆S患者與健康人的ICA組與各自對(duì)照組IL-17濃度差值比較:MS患者小、中、大劑量ICA組IL-17下降幅度差異較健康人,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;但I(xiàn)CA劑量越大,降低MS患者外周血IL-17的濃度作用較健康人越明顯,呈劑量依賴性。
  3.各組PBMC GR mR

15、NA表達(dá)水平
  健康人和MS患者中各組GR mRNA表達(dá)量與對(duì)照組比較無明顯差異,P>0.05,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,ICA對(duì)PBMC GR mRNA表達(dá)無影響作用。
  4.各組PBMC ERαmRNA表達(dá)水平
  ①與各自對(duì)照組比較,MS患者中、大劑量ICA及雌激素組ERα mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯升高,P<0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而小劑量組無明顯差異;中、大劑量ICA組和雌激素組,三組間兩兩比較,P>0.05,無

16、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
 ?、谂c各自對(duì)照組比較,健康人各組ERα mRNA相對(duì)表達(dá)量無明顯差異,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
  5.各組PBMC ERβmRNA表達(dá)水平
  ①與各自對(duì)照組比較,MS患者大劑量ICA及雌激素組ERβmRNA相對(duì)表達(dá)量明顯升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),而中、小劑量組無明顯差異,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
 ?、谂c各自對(duì)照組比較,健康人各組ERβmRNA相對(duì)表達(dá)量無明顯差異,差

17、異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
  結(jié)論:
  1.ICA可以提高M(jìn)S患者PBMC的ERα、ERβmRNA的表達(dá),具有擬雌激素樣作用。
  2.ICA對(duì)MS患者PBMC的GR mRNA的表達(dá)無明顯干預(yù)作用。
  3.ICA通過擬雌激素樣作用,降低MS患者PBMC培養(yǎng)上清液 IL-17水平,減輕炎癥反應(yīng),且呈ICA劑量依賴性。
  4.ICA通過擬雌激素樣作用,提高M(jìn)S患者PBMC培養(yǎng)上清 IL-4水平,減

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