甲潑尼龍對多發(fā)性硬化TH17細胞相關(guān)細胞因子的影響.pdf

1、多發(fā)性硬化(Multiple Sclerosis，MS)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)常見的一種自身免疫性疾病，復(fù)發(fā)緩解型多發(fā)性硬化（RRMS）是MS最常見的類型。該病好發(fā)于青壯年勞動力，常反復(fù)發(fā)病，治療成本高，易致殘。近年研究發(fā)現(xiàn)，多發(fā)性硬化在國內(nèi)患病率呈上升趨勢。目前，該病的病因和發(fā)病機制至今尚未完全明確。隨著免疫學(xué)研究的進展，新的輔助性T細胞亞群的發(fā)現(xiàn)，其與MS發(fā)病關(guān)系的研究也正成為未來研究的重要方向之一，有望在其中發(fā)現(xiàn)新的診斷指標(biāo)或治療靶點。<

2、br>　　新近研究證實，IL-23的致病作用是由于IL-23誘導(dǎo)CD4+T細胞產(chǎn)生IL-17，IL-17才是MS最為關(guān)鍵的致炎細胞因子。但是這些研究均是在實驗性自身免疫性腦脊髓炎開展，對于MS的研究較少,且對與其密切相關(guān)的IL-17A、IL-23、IL-21、IL-22、IL-6、TGF-β等細胞因子的研究更少。
　　目前國內(nèi)外對IL-17A、IL-23、IL-6等部分細胞因子在MS患者血清中的含量測定，無對比分析腦脊液和血清中細

3、胞因子的變化，也無MS急性復(fù)發(fā)期與緩解期細胞因子水平變化的比較，研究的細胞因子較少，設(shè)計也不完善。我們同時研究急性期RRMS患者大劑量甲潑尼龍沖擊治療1周后和治療1月后血清和或腦脊液中細胞因子含量的變化、細胞因子之間的相關(guān)性、細胞因子與EDSS相關(guān)性、恢復(fù)期與急性復(fù)發(fā)期血清中細胞因子水平的對比研究，研究內(nèi)容全面，設(shè)計合理，為探索MS的發(fā)病機制具有重要意義。
　　炎性細胞因子不僅能誘導(dǎo)MS脫髓鞘病變，與MS非脫髓鞘病灶也密切相關(guān)。當(dāng)

4、MS患者軸索、神經(jīng)元發(fā)生損害后，細胞骨架和軸膜上的Tau蛋白、S100蛋白、14-3-3蛋白，神經(jīng)絲蛋白被釋放到腦脊液中，引起繼發(fā)性免疫反應(yīng)。這在一定程度能反映損害的程度，提示預(yù)后及免疫治療療效。
　　目前國內(nèi)外對MS患者腦脊液和血清中Tau蛋白、S100蛋白、14-3-3蛋白或神經(jīng)絲蛋白的部分研究，但研究的結(jié)論并不一致，且未對緩解期MS患者血清中Tau蛋白、S100蛋白、14-3-3蛋白或神經(jīng)絲蛋白的動態(tài)觀察，也未探尋其與炎性細

5、胞因子之間的關(guān)系。本研究通過檢測急性復(fù)發(fā)期及緩解期RRMS患者血清中Tau蛋白、S100蛋白、14-3-3蛋白、神經(jīng)絲蛋白水平，探討甲潑尼龍對其影響Tau蛋白、S100蛋白、14-3-3蛋白、神經(jīng)絲蛋白與EDSS相關(guān)性，探尋炎性細胞因子與MS非脫髓鞘損害相關(guān)的依據(jù)。
　　在治療方面，甲潑尼龍仍是目前我國治療MS急性發(fā)作期的常用藥物。盡管臨床證明甲潑尼龍治療急性復(fù)發(fā)期MS有效，但并不能阻止疾病的復(fù)發(fā)，且治療機理不明確。本課題中檢測R

6、RMS患者甲潑尼龍治療1周前后、1月后兩個時間段血清和或腦脊液中IL-23、IL-17A、IL-21、IL-22、TGF-β、IL-6等Th17細胞相關(guān)細胞因子水平的變化，以及治療1月后IL-23、IL-17A、IL-21、IL-22、TGF-β、IL-6等Th17細胞相關(guān)細胞因子水平與EDSS的相關(guān)性，進一步探討甲潑尼龍治療MS的治療機理，為探尋MS發(fā)病機制、明確治療靶點以及探索新的治療靶點有著重要的意義。
　　目的：
　

7、　1、探討RRMS患者甲潑尼龍治療1周前后IL-23、IL-17A水平的變化及其與EDSS的相關(guān)性；
　　2、探索RRMS患者甲潑尼龍治療1月前后血清和腦脊液中IL-23、IL-17A、IL-21、IL-22、TGF-β、IL-6等Th17細胞相關(guān)細胞因子的變化及這些細胞因子之間的相關(guān)性；
　　3、探索RRMS患者急性復(fù)發(fā)期與緩解期血清中IL-23、IL-17A、IL-21、IL-22、TGF-β、IL-6等Th17細胞相關(guān)

8、細胞因子的變化及其與RRMS再復(fù)發(fā)的關(guān)系；
　　4、探討甲潑尼龍對RRMS患者急性期及恢復(fù)期血清中Tau蛋白、S100蛋白、14-3-3蛋白、神經(jīng)絲蛋白水平的影響，及其與EDSS相關(guān)性，與RRMS再復(fù)發(fā)的關(guān)系；
　　5、探尋RRMS患者血清中IL-23、IL-17A、IL-21、IL-22、TGF-β、IL-6等Th17細胞相關(guān)細胞因子導(dǎo)致MS非脫髓鞘損害的依據(jù)。
　　方法：
　　本研究分三部分：2011年9月到

9、2014年9月鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院住院確診的RRMS患者；發(fā)病48 h入院，符合2010年McDonald診斷標(biāo)準(zhǔn)及中華神經(jīng)科雜志《多發(fā)性硬化診斷和治療中國專家共識(2011版)》診斷標(biāo)準(zhǔn)。共納入RRMS患者104例，其中男35例，女69例，平均年齡31.2±11.5歲；病程2個月到9.5年，平均38.2個月；復(fù)發(fā)次數(shù)2-8次，平均3.9次；腦脊液寡克隆區(qū)帶陽性55例（陽性率52.88％），104例患者均有新發(fā)陽性體征/癥狀，頭顱MRI

10、均有新發(fā)病灶。
　　第一部分1、設(shè)計路線：根據(jù)擴展殘疾狀況量表（EDSS）把MS分成三組：MS（A）組（EDSS：<4分），MS（B）組（EDSS：≥4-<6分），MS（C）組（EDSS：≥6-9分），20例神經(jīng)系統(tǒng)非炎性疾?。∟IND）患者為對照組，ELISA方法檢測NIND組和大劑量甲潑尼龍沖擊治療RRMS患者1周前后血清中IL-23和IL-17A水平變化，治療1月后血清和腦脊液中IL-23和IL-17A水平變化、兩者相關(guān)性以

11、及其與EDSS的相關(guān)性。2、納入患者情況：確診的RRMS患者66例根據(jù)EDSS分成三組：MS（A）組27例，其中男8例，女19例，平均年齡（35.20±11.71）歲；MS（B）組28例，其中男11例，女17例，平均年齡（33.40±9.18）歲；MS（C）組11例，其中男3例，女8例，平均年齡（36.60±14.50）歲。3、方法及標(biāo)本采集：所有納入患者治療前采肘靜脈血5ml，腰穿抽取腦脊液3ml，立即離心后取上清液分裝于分離管內(nèi)，標(biāo)

12、記、凍存待測。RRMS組患者給予甲潑尼龍針（1.0g ivggt qd-3，后0.5g ivgtt qd-4），治療1周時再次采肘靜脈血5ml，同樣方法保存待測。甲潑尼龍沖擊治療1周后口服強的松片60mg/d，漸遞減后1月內(nèi)停服，同時口服保護胃黏膜保護藥，以及補鈣、補鉀藥物治療，口服強的松治療3周（共使用激素治療1月），再次采肘靜脈血5ml，腰穿抽取腦脊液3ml，同樣方法保存待測。神經(jīng)系統(tǒng)非炎癥疾?。∟IND）患者20例為對照組。

13、>　　第二部分1、設(shè)計路線：檢測RRMS患者甲潑尼龍沖擊治療前后血清和腦脊液中IL-23、IL-17A、IL-21、IL-22、TGF-β、IL-6等Th17細胞相關(guān)細胞因子的變化，以及細胞因子之間的相關(guān)性。2、納入患者情況：共納入RRMS組患者38例，其中男性13例，女性25例，年齡（31.4±9.5）歲。3、方法及標(biāo)本采集：所有納入患者治療前采肘靜脈血5ml，腰穿抽取腦脊液3ml，立即離心5后取上清液分裝于分離管內(nèi)，標(biāo)記、凍存待測。

14、RRMS組患者給予甲潑尼龍針（1.0g ivggt qd-3，后0.5g ivgtt qd-4，后口服強的松片60mg/d，漸遞減后1月內(nèi)停服），同時加用保護胃藥物，補鈣補鉀治療，口服強的松片治療3周后（共使用激素治療1月）再次采肘靜脈血5ml，腰穿抽取腦脊液3ml，同樣方法保存待測。神經(jīng)系統(tǒng)非炎癥疾?。∟IND）患者20例作為對照組。
　　第三部分：1、設(shè)計方案：參與第一或第二部分研究中的處于緩解期門診隨訪的治療后半年的RRMS

15、患者。ELISA方法檢測NIND組和RRMS患者治療前后及緩解期血清中Th17細胞相關(guān)細胞因子和Tau蛋白，S100蛋白，14-3-3蛋白，神經(jīng)絲蛋白的水平及其與EDSS相關(guān)性。2、納入患者情況：共納入RRMS隨訪患者41例，其中男性14例，女性27例，平均年齡（33.6±10.1）歲，41例患者均無新發(fā)癥狀及體征，復(fù)查頭顱MRI均有無發(fā)病灶。納入患者根據(jù)EDSS分成三組：MS（A）組（EDSS：<4分），MS（B）組（EDSS：≥4-

16、<7分），MS（C）組（EDSS：≥6-9分），其中MS（A）組17例，其中男5例，女12例，平均年齡（33.12±10.28）歲；MS（B）組18例，其中男7例，女11例，平均年齡（36.27±11.29）歲；MS（C）組6例，其中男2例，女4例，平均年齡（35.44±15.70）歲。3、方法及標(biāo)本采集：所有納入患者治療前采肘靜脈血5ml，立即經(jīng)離心后取上清液分裝于分離管內(nèi)，標(biāo)記、凍存待測。
　　結(jié)果：
　　1、甲潑尼龍治

17、療RRMS1周及1月后血清中IL-23、IL-17A的水平進行性下降，腦脊液中IL-23、17A水平較治療前亦下降，但兩者仍高于NIND組，RRMS患者腦脊液中IL-17A水平高于血清；
　　2、甲潑尼龍沖擊治療RRMS后，患者EDSS在MS（A）組和MS（B）組均下降，MS（C）組下降不明顯；
　　3、MS組腦脊液中IL-17A水平與EDSS正相關(guān)；
　　4、甲潑尼龍治療RRMS后血清和腦脊液中IL-17A、IL-2

18、3、IL-21、IL-22水平較治療前下降，仍較NIND組高，TGF-β水平較治療前增高；
　　5、RRMS患者治療前血清和腦脊液中TGF-β水平較NIND組低，治療后腦脊液中TGF-β水平顯著高于NIND組；
　　6、相關(guān)性分析：RRMS治療前血清中IL-23與IL-17A正相關(guān)；腦脊液中IL-23、IL-17A、IL-21兩兩正相關(guān)；
　　7、RRMS恢復(fù)期，血清和腦脊液中IL-23、IL-17A、IL-21、IL

19、-22水平仍高于NIND組，TGF-β水平低于NIND組，提示恢復(fù)期的MS仍存在炎癥反應(yīng)；
　　8、RRMS患者血清和腦脊液中IL-17A與IL-23正相關(guān)，腦脊液中IL-17A、IL-23與IL-22正相關(guān)，提示這3個炎性細胞因子在RRMS發(fā)病中存在同向協(xié)調(diào)關(guān)系；
　　9、緩解期RRMS患者血清中IL-23、IL-17A、IL-21、IL-22水平較急性復(fù)發(fā)期及治療后下降，但仍高于NIND組；
　　10、RRMS患者

20、甲潑尼龍沖擊治療后血清中S100蛋白水平下降，但恢復(fù)期仍高于NIND組；血清中Tau蛋白、14-3-3蛋白、神經(jīng)絲蛋白水平無明顯變化；
　　11、RRMS患者血清中IL-17A、IL-23、IL-21、IL-22、TGF-β與S100蛋白正相關(guān)，S100蛋白水平與EDSS正相關(guān)。
　　結(jié)論：
　　1、甲潑尼龍治療RRMS1周和1月后IL-23、IL-17A水平及EDSS評分下降，提示IL-23、17A與RRMS發(fā)病相關(guān)

21、；
　　2、甲潑尼龍可以通過降低RRMS患者IL-23、IL-17A水平，發(fā)揮抗炎作用；
　　3、RRMS患者IL-17A水平與該疾病嚴(yán)重程度相關(guān)；
　　4、RRMS患者IL-23、IL-17A、IL-21、IL-22、TGF-β與RRMS發(fā)病相關(guān)；
　　5、甲潑尼龍可能通過抑制炎性細胞因子IL-23、IL-17A、IL-21、IL-22，上調(diào)TGF-β發(fā)揮抗炎作用；
　　6、恢復(fù)期RRMS仍存在高水平的炎

22、性細胞因子，這可能與MS的復(fù)發(fā)相關(guān)；
　　7、RRMS患者IL-17A、IL-23與IL-22在RRMS發(fā)病中存在同向協(xié)調(diào)關(guān)系，提示阻斷IL-17A、IL-23或IL-22的炎性通路，有可能阻斷疾病進展；
　　8、緩解期RRMS患者血清中高水平的IL-23、IL-17A、IL-21、IL-22，可能與RRMS再復(fù)發(fā)相關(guān)；
　　9、RRMS患者血清中S100蛋白水平恢復(fù)期仍增高，提示RRMS患者持續(xù)存在神經(jīng)膠質(zhì)細胞增殖反