調(diào)控凝血活性對老年大鼠炎癥反應影響的機制研究.pdf

1、背景；凝血異常和纖維蛋白沉積見于人類許多類型的炎癥反應，并且與炎癥損害密切相關，基礎研究表明，凝血系統(tǒng)參與炎癥調(diào)節(jié)。臨床資料和我們的前期研究發(fā)現(xiàn)，老年機體存在高凝狀態(tài)，同時老年個體較青年個體對各種炎癥刺激和病理損傷更加易感，因此我們推測老年個體的高凝狀態(tài)促進了炎癥反應。但老年個體高凝狀態(tài)的原因及其對老年個體炎癥反應影響的機制目前尚不十分清楚。 目的；為驗證我們的假說，本研究首先觀察生理與炎癥狀態(tài)下老年大鼠肺組織和腎臟局部凝血活性

2、的改變，探討老年機體高凝狀態(tài)形成的機制；其次，觀察調(diào)控凝血活性對炎癥的影響，從整體水平探討高凝狀態(tài)促進老年大鼠炎癥反應的機制；最后從細胞水平闡明凝血系統(tǒng)調(diào)節(jié)炎癥反應的分子機制。 方法；雌性Wistar3月齡(青年鼠)和27月齡(老年鼠)大鼠均隨機分為正常對照組(NC組)、脂多糖組(L組)、脂多糖+氨甲環(huán)酸組(LT組)、脂多糖+氨甲環(huán)酸+肝素組(LTH組)、脂多糖+氨甲環(huán)酸+尿激酶組(LTU組)以及氨甲環(huán)酸組(T組)。以LPS腹腔

3、注射誘導大鼠急性炎癥，并用氨甲環(huán)酸(TA)和肝素/或尿激酶(UK)調(diào)控凝血活性。分別采用免疫組化、WesternBlot與NorthernBlot檢測各指標蛋白質(zhì)與基因表達。比較同一鼠齡組內(nèi)各處理組間以及相同處理的兩鼠齡組間纖溶酶原活化抑制物1(PAI-1)、血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)、凝血酶受體(TR)蛋白質(zhì)與mRNA表達水平和纖維蛋白沉積水平；以及浸潤的炎細胞數(shù)目、單核細胞趨化蛋白1(MCP-1)、細胞間粘附分子1(ICAM-1)蛋白質(zhì)和

4、mRNA的表達。并在體外實驗比較纖維蛋白和TR途徑對內(nèi)皮細胞ICAM-1表達和黏附單核細胞能力的影響。 結(jié)果；(1)青年鼠和老年鼠NC組的肺組織和腎組織均無PAI-1表達，而TM表達豐富；L組青年鼠和老年鼠肺組織和腎組織PAI-1的蛋白質(zhì)與mRNA表達水平均上調(diào)，老年鼠上調(diào)幅度明顯高于青年鼠(P＜0.05)，而青年鼠和老年鼠幾乎無TM表達。(2)青年鼠和老年鼠NC組的肺組織和腎組織均無纖維蛋白沉積，有少量TR表達；兩鼠齡的L組纖

5、維蛋白沉積和TR表達均較NC組增多(P＜0.05)，肺組織和腎組織出現(xiàn)少量的炎細胞浸潤，MCP-1、ICAM-1的mRNA及蛋白質(zhì)表達顯著上調(diào)(P＜0.05)；與L組比較，LT組肺組織和腎小球纖維蛋白沉積和TR表達進一步增加，同時浸潤的炎細胞數(shù)目、MCP-1、ICAM-1的mRNA及蛋白質(zhì)表達水平較L組顯著上調(diào)(P＜0.05)；與LT組比較，LTH組肺組織和腎小球纖維蛋白沉積減少，TR表達下調(diào)，同時浸潤的炎細胞數(shù)目、MCP-1、ICAM

6、-1的mRNA及蛋白質(zhì)表達顯著減少(P＜0.05)；LTU組與LT組比較，肺組織和腎小球纖維蛋白沉積減少，TR表達無明顯變化，但浸潤的炎細胞數(shù)目、MCP-1、ICAM-1的mRNA及蛋白質(zhì)表達同樣顯著減少(P＜0.05)。LTH組與LTU組在纖維蛋白沉積、浸潤的炎細胞數(shù)目、MCP-1、ICAM-1表達方面無顯著性差異(P＞0.05)。(3)與相同處理的青年鼠比較，老年鼠肺組織和腎小球纖維蛋白沉積、TR表達顯著增多(P＜0.05)，浸潤的

7、炎細胞數(shù)目、MCP-1、ICAM-1的mRNA及蛋白質(zhì)表達水平明亦顯著增加(P＜0.05)。(4)在體外，纖維蛋白和凝血酶/凝血酶受體途徑均能誘導內(nèi)皮細胞表達ICAM-1，但纖維蛋白的作用顯著強于凝血酶/凝血酶受體途徑的作用(P＜0.01)。并且纖維蛋白可顯著增強內(nèi)皮細胞黏附單核細胞的能力。 結(jié)論；(1)老年鼠肺組織和腎組織內(nèi)皮細胞損傷，PAI-1表達上調(diào)可能是增齡導致高凝狀態(tài)的主要機制之一；(2)凝血系統(tǒng)激活導致的纖維蛋白沉積