柚皮苷對骨質(zhì)疏松及骨質(zhì)疏松骨折的影響及其作用機制的研究.pdf

1、目的：
　　1.觀察柚皮苷（Naringin, NG）對破骨細胞的影響。
　　2.觀察柚皮苷對去勢大鼠骨質(zhì)疏松的影響。
　　3.觀察柚皮苷對去勢大鼠骨質(zhì)疏松骨折的影響。
　　方法：
　　1.利用來自小鼠的破骨前體 RAW264.7細胞株，采用含有濃度為100ng/mL的小鼠重組可溶性核因子кB受體活化因子配基(receptor activator of NF-кB ligand，RANKL)的高糖DMEM(

2、High glucoseDulbecco minimum essential medium)培養(yǎng)基，誘導培養(yǎng)實驗用的成熟破骨細胞。利用TRAP染色與掃描電子顯微鏡觀察破骨細胞形成的骨吸收陷窩的方法鑒定破骨細胞。流式細胞術(shù)檢測破骨細胞的凋亡率，RT-PCR檢測破骨細胞凋亡相關(guān)基因Bcl-2、BAX、caspase-3以及基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP-9），組織蛋白酶 K（Cath-K），抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP） mRNA表達情況。

3、>　　2．3月齡雌性S-D大鼠隨機分為去勢組（OVX），假手術(shù)組（SHAM），柚皮苷（40mg/kg、100mg/kg、200mg/kg）組與雌激素組（22.5μg/kg）陽性對照組，去勢組手術(shù)切除大鼠雙側(cè)卵巢，假手術(shù)組只切開皮膚，不做卵巢切除。切除卵巢后3月開始灌胃給藥，給藥周期為60天。觀察各組大鼠股骨骨密度，Micro-CT參數(shù)，血清生化指標，股骨力學性能與骨形態(tài)計量學，并進行組間比較。
　　3．采用3月齡雌性SD大鼠行雙側(cè)

4、卵巢切除，飼養(yǎng)3個月后手術(shù)造成大鼠右側(cè)脛骨橫行骨折，術(shù)后按照隨機數(shù)字表法分為對照組（20只）、柚皮苷組（20只）、雌激素組（20只）。柚皮苷組每天灌服柚皮苷100mg/kg/d；雌激素組灌服17-β雌二醇22.5μg/kg/d；對照組給予等體積的等滲鹽水皮下注射。術(shù)后分別于2，8周處死動物后，取出手術(shù)側(cè)脛骨，行X線拍片進行評分；然后行雙能X線吸收測定法骨折部位骨密度（BMD）；檢測BMD后，采用Micro-CT對骨折部位進行定量分析，檢

5、測指標：骨體積（BV）、相對骨體積比（BV/TV）、平均骨小梁厚度(Tb.Th)；酶聯(lián)免疫吸附實驗（Elisa）測定血清骨鈣素與大鼠Ⅰ型膠原C端肽（CTX-1）；三點彎曲力學實驗測定骨折最大載荷，并進行統(tǒng)計學分析。
　　結(jié)果：
　　1.單用RANKL（100ng/ml）誘導即可獲得破骨細胞。柚皮苷可以降低TRAP陽性細胞數(shù)，減少骨吸收陷窩數(shù)目；促進破骨細胞的凋亡；柚皮苷干預組B cl-2、MMP-9、Cath-K、TRAPm

6、RNA的表達降低，BAX與caspase-3 mRNA表達升高。
　　2.用藥60天，與去勢組比較，中、高劑量柚皮苷組體重降低；雌激素與柚皮苷組骨密度，骨小梁數(shù)目增多；血鈣降低，雌激素與骨鈣素升高；大鼠Ⅰ型膠原 C端肽（CTX-1）降低，對總膽固醇有調(diào)節(jié)作用，增加礦化率、提升股骨力學性能。
　　3.術(shù)后第2周柚皮苷組X線評分、BMD、 Tb.Th、骨鈣素、最大載荷較對照組明顯升高（P＜0.05）；BV、BV/TV較對照組明顯

7、升高（P＜0.01）；血CTX-1較對照組明顯降低（P＜0.01）；BV、最大載荷較雌激素組也升高（P＜0.05）；骨鈣素較雌激素組明顯升高（P＜0.01）；雌激素組X線評分、BMD、BV、BV/TV、Tb.Th、最大載荷較對照組亦升高（P＜0.05）；雌激素組骨鈣素、CTX-1較對照組降低（P＜0.05）；柚皮苷組 X線評分、BMD、BV/TV、Tb.Th、CTX-1與雌激素組比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。8周時柚皮苷組 X線

8、評分、BMD、BV、BV/TV、Tb.Th較對照組升高（P＜0.05）；而柚皮苷組與雌激素組差異無統(tǒng)計學意義；柚皮苷組骨鈣素、最大載荷高于對照組與雌激素組（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　柚皮苷可減少破骨細胞數(shù)量、降低骨吸收功能，促進破骨細胞凋亡；其機制可能是通過降低BCL-2 mRNA表達，升高BAXmRNA表達，激活caspase-3從而使破骨細胞凋亡來實現(xiàn)的。柚皮苷可以提高去勢大鼠BMD，增加骨小梁數(shù)量，改善骨代謝，