柚皮苷對(duì)骨質(zhì)疏松及骨質(zhì)疏松骨折的影響及其作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　1.觀察柚皮苷（Naringin, NG）對(duì)破骨細(xì)胞的影響。
　　2.觀察柚皮苷對(duì)去勢(shì)大鼠骨質(zhì)疏松的影響。
　　3.觀察柚皮苷對(duì)去勢(shì)大鼠骨質(zhì)疏松骨折的影響。
　　方法：
　　1.利用來(lái)自小鼠的破骨前體 RAW264.7細(xì)胞株，采用含有濃度為100ng/mL的小鼠重組可溶性核因子кB受體活化因子配基(receptor activator of NF-кB ligand，RANKL)的高糖DMEM(

2、High glucoseDulbecco minimum essential medium)培養(yǎng)基，誘導(dǎo)培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)用的成熟破骨細(xì)胞。利用TRAP染色與掃描電子顯微鏡觀察破骨細(xì)胞形成的骨吸收陷窩的方法鑒定破骨細(xì)胞。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)破骨細(xì)胞的凋亡率，RT-PCR檢測(cè)破骨細(xì)胞凋亡相關(guān)基因Bcl-2、BAX、caspase-3以及基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP-9），組織蛋白酶 K（Cath-K），抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP） mRNA表達(dá)情況。

3、>　　2．3月齡雌性S-D大鼠隨機(jī)分為去勢(shì)組（OVX），假手術(shù)組（SHAM），柚皮苷（40mg/kg、100mg/kg、200mg/kg）組與雌激素組（22.5μg/kg）陽(yáng)性對(duì)照組，去勢(shì)組手術(shù)切除大鼠雙側(cè)卵巢，假手術(shù)組只切開皮膚，不做卵巢切除。切除卵巢后3月開始灌胃給藥，給藥周期為60天。觀察各組大鼠股骨骨密度，Micro-CT參數(shù)，血清生化指標(biāo)，股骨力學(xué)性能與骨形態(tài)計(jì)量學(xué)，并進(jìn)行組間比較。
　　3．采用3月齡雌性SD大鼠行雙側(cè)

4、卵巢切除，飼養(yǎng)3個(gè)月后手術(shù)造成大鼠右側(cè)脛骨橫行骨折，術(shù)后按照隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組（20只）、柚皮苷組（20只）、雌激素組（20只）。柚皮苷組每天灌服柚皮苷100mg/kg/d；雌激素組灌服17-β雌二醇22.5μg/kg/d；對(duì)照組給予等體積的等滲鹽水皮下注射。術(shù)后分別于2，8周處死動(dòng)物后，取出手術(shù)側(cè)脛骨，行X線拍片進(jìn)行評(píng)分；然后行雙能X線吸收測(cè)定法骨折部位骨密度（BMD）；檢測(cè)BMD后，采用Micro-CT對(duì)骨折部位進(jìn)行定量分析，檢

5、測(cè)指標(biāo)：骨體積（BV）、相對(duì)骨體積比（BV/TV）、平均骨小梁厚度(Tb.Th)；酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（Elisa）測(cè)定血清骨鈣素與大鼠Ⅰ型膠原C端肽（CTX-1）；三點(diǎn)彎曲力學(xué)實(shí)驗(yàn)測(cè)定骨折最大載荷，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　1.單用RANKL（100ng/ml）誘導(dǎo)即可獲得破骨細(xì)胞。柚皮苷可以降低TRAP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，減少骨吸收陷窩數(shù)目；促進(jìn)破骨細(xì)胞的凋亡；柚皮苷干預(yù)組B cl-2、MMP-9、Cath-K、TRAPm

6、RNA的表達(dá)降低，BAX與caspase-3 mRNA表達(dá)升高。
　　2.用藥60天，與去勢(shì)組比較，中、高劑量柚皮苷組體重降低；雌激素與柚皮苷組骨密度，骨小梁數(shù)目增多；血鈣降低，雌激素與骨鈣素升高；大鼠Ⅰ型膠原 C端肽（CTX-1）降低，對(duì)總膽固醇有調(diào)節(jié)作用，增加礦化率、提升股骨力學(xué)性能。
　　3.術(shù)后第2周柚皮苷組X線評(píng)分、BMD、 Tb.Th、骨鈣素、最大載荷較對(duì)照組明顯升高（P＜0.05）；BV、BV/TV較對(duì)照組明顯

7、升高（P＜0.01）；血CTX-1較對(duì)照組明顯降低（P＜0.01）；BV、最大載荷較雌激素組也升高（P＜0.05）；骨鈣素較雌激素組明顯升高（P＜0.01）；雌激素組X線評(píng)分、BMD、BV、BV/TV、Tb.Th、最大載荷較對(duì)照組亦升高（P＜0.05）；雌激素組骨鈣素、CTX-1較對(duì)照組降低（P＜0.05）；柚皮苷組 X線評(píng)分、BMD、BV/TV、Tb.Th、CTX-1與雌激素組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。8周時(shí)柚皮苷組 X線

8、評(píng)分、BMD、BV、BV/TV、Tb.Th較對(duì)照組升高（P＜0.05）；而柚皮苷組與雌激素組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；柚皮苷組骨鈣素、最大載荷高于對(duì)照組與雌激素組（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　柚皮苷可減少破骨細(xì)胞數(shù)量、降低骨吸收功能，促進(jìn)破骨細(xì)胞凋亡；其機(jī)制可能是通過(guò)降低BCL-2 mRNA表達(dá)，升高BAXmRNA表達(dá)，激活caspase-3從而使破骨細(xì)胞凋亡來(lái)實(shí)現(xiàn)的。柚皮苷可以提高去勢(shì)大鼠BMD，增加骨小梁數(shù)量，改善骨代謝，