二甲基甲酰胺致H9c2心肌細(xì)胞膜損傷研究.pdf

1、目的：探討二甲基甲酰胺（DMF）對(duì)H9c2心肌細(xì)胞膜損傷的影響及其可能的機(jī)制。
　　方法：取體外培養(yǎng)H9c2心肌細(xì)胞，以濃度為0、25、50、75、100、125、150、175、200 mmol/L DMF處理24 h后，采用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞存活率。根據(jù)CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果，以細(xì)胞存活率大于70%為原則，為觀察劑量-效應(yīng)關(guān)系，設(shè)立對(duì)照組和80、110、140 mmol/L組，分別給予濃度為0、80、110、140 mmol/L

2、 DMF染毒處理24 h；為觀察時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系，設(shè)立對(duì)照組和2、6、12、24 h組，給予濃度為110 mmol/L DMF分別染毒處理0、2、6、12、24 h。比色法檢測(cè)培養(yǎng)上清LDH活性反映細(xì)胞膜完整性，熒光偏振法檢測(cè)細(xì)胞膜熒光偏振度反映細(xì)胞膜流動(dòng)性，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞 FDA+/PI+率反映細(xì)胞膜通透性，熒光法檢測(cè)細(xì)胞膜膽固醇濃度，鈣離子成像技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度。
　　結(jié)果：與對(duì)照組比較，100、125、150、17

3、5、200 mmol/L組細(xì)胞存活率均降低（P<0.01），存在劑量-效應(yīng)關(guān)系（P<0.01）。與對(duì)照組比較，80、110、140 mmol/L組LDH活性均升高（P<0.01），2、6、12 h組LDH活性均升高（P<0.05），存在劑量-效應(yīng)關(guān)系（P<0.01）和時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系（P<0.01）。與對(duì)照組比較，80、110、140 mmol/L組熒光偏振度均升高（P<0.01），6、12、24 h組熒光偏振度均升高（P<0.01），存

4、在劑量-效應(yīng)關(guān)系（P<0.01）和時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系（P<0.01）。與對(duì)照組比較，80、110 mmol/L組FDA+/PI+率均升高（P<0.01），6、12、24 h組FDA+/PI+率均升高（P<0.05），存在時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系（P<0.01）；與對(duì)照組比較，110、140 mmol/L組PI+率均升高（P<0.01），12、24 h組PI+率均升高（P<0.05），存在劑量-效應(yīng)關(guān)系（P<0.01）和時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系（P<0.01）。

5、與對(duì)照組比較，80、110、140 mmol/L組膽固醇濃度均升高（P<0.01），6、24 h組膽固醇濃度均升高（P<0.05），存在劑量-效應(yīng)關(guān)系（P<0.01）和時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系（P<0.01）。與對(duì)照組比較，80、110、140 mmol/L組Ca2+濃度均升高（P<0.01），2、6、12、24 h組Ca2+均升高（P<0.05），存在劑量-效應(yīng)關(guān)系（P<0.01）和時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系（P<0.01）。在DMF染毒濃度為0~200

6、mmol/L時(shí)，LDH活性與熒光偏振度呈正相關(guān)（r=0.97，P＜0.01），與膽固醇濃度呈正相關(guān)（r=0.94，P＜0.01），與Ca2+濃度呈正相關(guān)（r=0.68，P＜0.05）；在DMF染毒時(shí)間為0~24 h時(shí)，LDH活性與熒光偏振度呈正相關(guān)（r=0.89，P＜0.01），與FDA+/PI+率呈正相關(guān)（r=0.95，P＜0.01），與膽固醇濃度呈正相關(guān)（r=0.88，P＜0.01），與Ca2+濃度呈正相關(guān)（r=0.66，P＜0.0