微囊藻毒素測(cè)定方法優(yōu)化與實(shí)例分析——以貴州省阿哈水庫(kù)為例.pdf

1、水體富營(yíng)養(yǎng)化是一個(gè)全球性環(huán)境問(wèn)題，隨著水體富營(yíng)養(yǎng)化程度日漸嚴(yán)重，水體發(fā)生藍(lán)藻水華屢見不鮮，由藍(lán)藻水華引起的水體受藍(lán)藻毒素污染而引起生物中毒問(wèn)題備受關(guān)注，因此對(duì)水體中藍(lán)藻毒素的監(jiān)控尤其對(duì)飲用水源地水體及其重要。微囊藻毒素（microcystins，MCs）是一類由藍(lán)藻門微囊藻屬下微囊藻代謝產(chǎn)生的毒素，主要對(duì)肝臟、腎臟造成功能性損害。研究發(fā)現(xiàn)能產(chǎn)生微囊藻毒素的藍(lán)藻有銅綠微囊藻、可疑微囊藻、少數(shù)魚腥藻、顫藻等，尤其以銅綠微囊藻最為常見。

2、>　　本文以實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的FACHB-905型銅綠微囊藻為對(duì)象，建立新鮮FACHB-905型銅綠微囊藻胞內(nèi)毒素 RP-HPLC測(cè)定方法；針對(duì)含低濃度MCs水體，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)裝置并利用單因素響應(yīng)面法進(jìn)行優(yōu)化，完善水體中MCs測(cè)定的前處理環(huán)節(jié)；以貴州省阿哈水庫(kù)為例，進(jìn)行為期5個(gè)月（165次）的周期性微囊藻毒素監(jiān)測(cè)，結(jié)合生態(tài)學(xué)和環(huán)境科學(xué)數(shù)據(jù)，統(tǒng)計(jì)分析得到阿哈水庫(kù)微囊藻毒素周期性分布變化特征與環(huán)境因子之間的相關(guān)性，明確貴州省高原水庫(kù)阿哈水庫(kù)微囊藻毒素

3、的時(shí)空分布特征與影響因素，為水庫(kù)管理提供數(shù)據(jù)支持。
　　研究結(jié)果表明：
　　（1）在探討RP-HPLC法測(cè)定FACHB-905型銅綠微囊藻胞內(nèi)微囊藻毒素時(shí)，通過(guò)單因素試驗(yàn)結(jié)合正交試驗(yàn) L9（34）設(shè)計(jì)，確定出甲醇濃度60％，超聲功率200 W，提取時(shí)間50 min，固液比1:15 g/mL，提取溫度50℃為供試液制備的最佳條件；通過(guò)方法學(xué)考察，流動(dòng)相組成為：乙腈-0.02%TFA溶液梯度洗脫分離效果最佳，此時(shí)兩者分離度為9.

4、21，最佳吸收波長(zhǎng)為238 nm，精密度良好（MC-RR，RSD%=0.79%；MC-LR， RSD%=1.08%；n=6）；供試液室溫放置48 h內(nèi)穩(wěn)定（AreaMC-LR：RSD%=1.92%）；制備供試液方法重復(fù)性良好（濃度MC-LR：RSD%=3.3%）；在0.019~0.154μg/mL線性范圍內(nèi)含量與峰面積線性關(guān)系良好（YMC-RR=38094 X+421.21，R2=0.9997，YMC-LR=23223 X+2921.1

5、，R2=0.9999），采用無(wú)限稀釋方法，確定出MC-RR和MC-LR絕對(duì)檢出限達(dá)到9.5 ng（ppt），定量限達(dá)到0.019μg（100 ppm）；回收率試驗(yàn)結(jié)果顯示：MC-RR加樣平均回收率為98.86%，（RSD%=0.86%），所得MC-LR加樣平均回收率為98.78%，（RSD%=0.97%），驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)顯示MC-LR含量平均值0.5190μg/mL（RSD%=0.80%）， MC-RR未檢出；建立RP-HPLC法測(cè)定FACH

6、B-905型銅綠微囊藻胞內(nèi)微囊藻毒素方法操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確。
　?。?）針對(duì)水體中MCs的測(cè)定，采用SPE-C18固相萃取小柱，自主設(shè)計(jì)樣品前處理裝置，采用響應(yīng)面One Factor法優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行方差分析(P＜0.01)，得到前處理?xiàng)l件：依次用純水25 mL淋洗除去極性較大雜質(zhì)；30%甲醇25 mL淋洗除雜，棄去；80%酸化甲醇（0.02%TFA）25 mL洗脫，收集洗脫液，40℃旋干，100%甲醇定容至1 mL得供試液；選擇培

7、養(yǎng)基溶液和野外水樣進(jìn)行分析，結(jié)果顯示培養(yǎng)基MC-LR平均值為0.7048μg/L；野外水樣MC-RR平均值為0.4177μg/L，MC-LR平均值為0.5547μg/L。
　　（3）基于RP-HPLC測(cè)定方法與SPE前處理方法，對(duì)阿哈水庫(kù)水體中 MC-RR、MC-LR周期跟蹤性監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示，微囊藻毒素含量與藍(lán)藻豐度的時(shí)空變化呈現(xiàn)滯后性，微囊藻毒素含量的峰值出現(xiàn)晚于藍(lán)藻豐度；經(jīng)過(guò)主成分分析和相關(guān)性分析，氮磷含量對(duì)MC-LR的分布有較