水解酶催化的不對稱Aldol加成反應(yīng)研究.pdf

1、Aldol加成反應(yīng)是有機(jī)合成化學(xué)中一類重要的反應(yīng)，它能夠構(gòu)建新型的C-C鍵。生物催化Aldol加成反應(yīng)研究是備受關(guān)注的課題之一，醛縮酶是常見的一種催化不對稱Aldol加成反應(yīng)的催化劑，而水解酶催化不對稱Aldol加成的研究較少。論文試圖探索水解酶及其突變株的催化特性及其在不對稱合成化學(xué)中的應(yīng)用，研究結(jié)果具有較高科學(xué)意義和潛在應(yīng)用價(jià)值。
　　論文對脂肪酶CAL-B活性中心的位點(diǎn)進(jìn)行隨機(jī)突變，通過易錯(cuò)PCR表達(dá)得到了24種突變株CAL

2、-B突變株，經(jīng)純化和質(zhì)粒測序等表征分析，確認(rèn)得到純度比較高的CAL-B突變株;研究將脂肪酶CAL-B突變株催化環(huán)己酮和芳香醛的不對稱Aldol加成反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)CAL-B突變株具有催化不對稱Aldol加成反應(yīng)活性;實(shí)驗(yàn)考察了不同突變株催化不對稱Aldol加成反應(yīng)的影響，同時(shí)還考察了水含量、溫度、時(shí)間等因素對酶催化不對稱Aldol加成反應(yīng)的變化規(guī)律。研究結(jié)果表明，脂肪酶CAL-B活性中心的位點(diǎn)位置不同突變株的催化活性不同，其中B12活性最高;

3、突變株B12在以環(huán)己酮作為溶劑的反應(yīng)體系中添加水可調(diào)控CAL-B突變株催化芳香醛和環(huán)己酮Aldol加成反應(yīng)的活性，實(shí)驗(yàn)合成了不對稱Aldol加成反應(yīng)產(chǎn)物，最高產(chǎn)率為99％，ee值最高為99％。
　　論文研究了蛋白酶/酰胺催化芳香醛和環(huán)己酮Aldol加成反應(yīng)活性，主要研究酸性蛋白酶/甲酰胺和堿性蛋白酶/甲酰胺兩個(gè)體系催化不對稱Aldol加成反應(yīng)。研究以芳香醛和環(huán)己酮作為研究底物，系統(tǒng)考察了酶源、酰胺種類、溫度、酶量和底物結(jié)構(gòu)等條件對