蛋白圖案化陣列結(jié)構(gòu)的制備.pdf

1、本課題利用反相乳液體系與水滴模板法相結(jié)合，通過(guò)一步法制備蛋白圖案化陣列結(jié)構(gòu)。水滴模板法是一種已經(jīng)被研究多年的自組裝方法，能簡(jiǎn)單快捷有效實(shí)現(xiàn)圖案化陣列結(jié)構(gòu)的制備；而反相乳液體系的建立使得原本以有機(jī)溶劑為溶劑相的成膜液引入了可攜帶水溶性生物大分子組分（蛋白質(zhì)等）的水相乳液液滴；待做為模板的水滴揮發(fā)后形成了陣列孔洞結(jié)構(gòu)，蛋白組分便可以借助水相的自組裝過(guò)程最終富集在規(guī)則排布的孔洞內(nèi)部，形成三維的蛋白圖案化陣列結(jié)構(gòu)。在項(xiàng)目前期，我們對(duì)經(jīng)典水滴模板

2、法的優(yōu)化成膜條件（聚合物基體材料、成膜液濃度、溫度、濕度等）進(jìn)行了摸索，確定了最優(yōu)成膜條件。隨后，一方面探究不同成乳方式以獲得穩(wěn)定的反相乳液，另一方面則嘗試不同的水油比例、不同的乳化劑用量以及成膜環(huán)境等多項(xiàng)影響因素進(jìn)行系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)，以尋求可制備出穩(wěn)定的反相乳液體系的最優(yōu)參數(shù)。經(jīng)過(guò)系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)探究，我們將制備反相乳液體系的方法確定在高剪切成乳和超聲成乳兩種方式，在相同的條件下，這兩種成乳方式相對(duì)更為理想，制備出來(lái)的反相乳液穩(wěn)定時(shí)間更長(zhǎng)。在能夠

3、制備穩(wěn)定的反相乳液體系的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步在乳液中加載牛血清白蛋白、纖連蛋白等蛋白組分，在聚酯片、玻璃片和硅片不同的基底進(jìn)行成膜。利用普通光學(xué)顯微鏡、熒光顯微鏡（FM）和掃描電鏡（SEM）對(duì)所得膜片進(jìn)行表征，獲得大量的表面和截面形貌結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)。最后能在穩(wěn)定實(shí)現(xiàn)反相乳液體系加載蛋白組分的條件下，利用異硫氰酸熒光素（FITC）對(duì)蛋白組分進(jìn)行熒光標(biāo)記，在熒光顯微鏡和激光掃描共聚焦顯微鏡（CLSM）的表征下跟蹤蛋白組分的選擇性分布。項(xiàng)目的實(shí)施證實(shí)了反