幾種不同基質硼酸親和整體柱的制備及其在糖蛋白分離富集中的應用.pdf

1、本工作的主要內容是幾種有機聚合物基質及有機-無機雜化基質硼酸親和整體柱的制備，及其在糖蛋白的分離和富集中的應用。論文內容包括如下五部分:
　　第一部分:緒論。綜述了硼酸親和技術以及整體柱技術的發(fā)展情況及其面臨的挑戰(zhàn);對結合兩者優(yōu)勢的硼酸親和整體柱的發(fā)展現(xiàn)狀和制備技術進行了綜述。此外，還對本論文的研究意義、研究內容以及課題的創(chuàng)新性進行了簡要的介紹。
　　第二部分:以金屬有機凝膠為致孔模板的大孔型硼酸親和整體柱的制備及其應用。以

2、金屬有機凝膠(MOGs)作為新穎的致孔模板，3-丙烯酰胺基苯硼酸（AAPBA）作為硼酸配基，乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)作為交聯(lián)劑，在不銹鋼柱內原位聚合制備了大孔型有機基質的poly(AAPBA-co-EDMA)親和整體柱。以MOGs致大孔的新穎方法比傳統(tǒng)的致孔方法更加簡易方便。通過系統(tǒng)地優(yōu)化反應條件，包括單體比例、反應溫度、MOGs用量，制備得到具有通透大孔結構的整體柱骨架，并結合掃描電鏡、傅立葉紅外光譜、壓汞儀等表征手段對整體柱

3、的形貌、孔徑和性能進行評價。將poly(AAPBA-co-EDMA)親和整體柱應用于對糖蛋白的分離和富集，考察糖蛋白辣根過氧化物酶（HRP）和轉鐵蛋白(TF)在整體柱上的色譜保留行為，結果表明該大孔型有機硼酸親和整體柱對糖蛋白表現(xiàn)出良好的親和性能和動態(tài)吸附容量。并將其成功地應用于加標牛血清樣品中糖蛋白TF的分離和富集。
　　第三部分:采用“One-Pot”法合成有機-無機雜化硼酸親和整體柱并將其用于中性條件下分離富集糖蛋白。本工作

4、四甲氧基硅烷(TMOS)和乙烯基三甲氧基硅烷(VTMS)作為硅烷前驅體，3-丙烯酰胺基苯硼酸(AAPBA)作為有機單體，采用“One-Pot”法制備一種新型的有機-無機雜化基質的硼酸親和整體柱，制備過程簡單。對AAPBA-硅膠雜化硼酸親和整體柱的制備條件進行系統(tǒng)的優(yōu)化，可以得到大孔均勻分布、通透性能良好的整體柱骨架結構。實驗中對該硼酸親和整體柱的骨架形貌、滲透性、動態(tài)吸附容量和親和色譜保留行為等進行表征和評價。由于硅膠基質的引入，AAP

5、BA-硅膠雜化硼酸親和整體柱表現(xiàn)出良好的親水性能，無需在流動相中加入有機溶劑，這樣的色譜分析條件有利于生物分子的分析。另外硼酸配基AAPBA中羰基氧原子與硼原子之間的配位作用使其在中性條件下即可與順式二醇作用，因此該硼酸親和整體柱在中性條件下即對含有順式二醇的生物小分子和糖蛋白表現(xiàn)出良好的特異性親和作用，并被成功的應用于實際樣品的分析中。
　　第四部分:基于Click Chemistry修飾的新型有機-無機雜化硼酸親和整體柱的制備

6、及其在糖蛋白分離中的應用。本工作發(fā)展了一種新穎的制備有機-無機雜化硼酸親和整體柱的方法。首先通過“Single-Step”法合成帶有疊氮活性基團的雜化整體柱骨架，隨后利用疊氮雜化整體柱與炔基硼酸配基之間的銅(Ⅰ)催化疊氮-炔環(huán)加成反應(CuAAC)制備“Clicked”有機-無機雜化硼酸親和整體柱。結合元素分析、紅外光譜、掃描電鏡等多種常規(guī)手段對制備的雜化硼酸親和整體柱進行系統(tǒng)的表征和評價?！癈licked”有機-無機雜化硼酸親和整體柱

7、在中性條件下對核苷和糖蛋白表現(xiàn)出良好的親和性能，pH7.0時糖蛋白卵清白蛋白的動態(tài)吸附容量為2.36 mg·g-1。該整體柱被成功地應用于從實際樣品蛋清中分離富集卵清白蛋白和卵轉鐵蛋白，具有實用性。
　　第五部分:基于thiol-ene點擊化學修飾的有機-無機雜化硼酸親和整體柱的制備及應用。本工作首先采用溶膠-凝膠法，以四甲氧基硅烷硅烷(TMOS)和巰丙基三甲氧基硅烷(MPTMS)作為反應前驅體制備巰基硅膠整體柱。然后利用巰基-烯

8、之間的點擊反應在整體柱上修飾硼酸配基3-丙烯酰胺基苯硼酸（AAPBA），制成AAPBA-硅膠雜化親和整體柱。制備過程簡單、安全。優(yōu)化了硼酸親和整體柱的制備條件，并以掃描電鏡、紅外光譜等多種手段對整體柱形貌和機械性能進行表征。AAPBA-硅膠雜化親和整體柱在中性條件下對含有順式二醇的生物小分子表現(xiàn)出良好的特異性親和能力，并被成功地應用于對糖蛋白的分離分析。點擊化學的修飾方法新穎、可靠，可以用于制備多種不同類型的硼酸親和整體柱，具有較大的應