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1、蛋白質(zhì)中特定位點(diǎn)氨基酸的磷?;腿チ柞;谏矬w系中扮演著十分重要的角色。通常,蛋白質(zhì)磷?;腿チ柞;^(guò)程類似于一個(gè)分子開(kāi)關(guān),調(diào)節(jié)著生命活動(dòng)的整個(gè)過(guò)程,包括細(xì)胞的增殖、發(fā)育和分化,神經(jīng)活動(dòng),信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),肌肉收縮,新陳代謝,腫瘤發(fā)生等。真核生物細(xì)胞蛋白質(zhì)中最常見(jiàn)的磷酰化類型是絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸的磷酸酯化,也是目前的研究熱點(diǎn)之一。同時(shí),在氨基酸的存在下檢測(cè)磷?;被釋?duì)于了解很多蛋白的角色起著十分重要的作用。本論文將Tb3+-TR絡(luò)合物熒
2、光探針運(yùn)用于研究磷?;被岷土柞;鞍?。 第一章綜述了磷?;被岷土柞;鞍籽芯康闹饕M(jìn)展,包括磷酰化氨基酸和磷?;鞍椎臋z測(cè)、識(shí)別、定量研究等。同時(shí)對(duì)稀土絡(luò)合物熒光探針的原理及其應(yīng)用進(jìn)行了評(píng)述。并在相關(guān)研究進(jìn)展和本實(shí)驗(yàn)室前期研究成果的基礎(chǔ)上提出了本論文的研究設(shè)想。 第二章在本實(shí)驗(yàn)室前期運(yùn)用Tb3-TR絡(luò)合物熒光探針研究含磷酸基團(tuán)的核苷酸、聚核苷酸、核酸、卵磷脂、輔酶、結(jié)合蛋白酶等化合物的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步探討將該探針用
3、于研究磷?;被岬目赡苄?,并初步探討了相關(guān)含磷酸基團(tuán)化合物與Tb3-TR絡(luò)合物熒光探針的作用機(jī)理,同時(shí)初步嘗試將該探針技術(shù)運(yùn)用于指示磷酰化氨基酸水解和去磷?;^(guò)程的可能性. 第三章在第二章的研究基礎(chǔ)上利用Tb3-TR絡(luò)合物熒光探針監(jiān)測(cè)了磷?;z氨酸(P-Ser)、磷酰化蘇氨酸(P-Thr)和磷?;野彼?P-Tyr)在一定條件下的完全水解,并根據(jù)磷?;被崴猱a(chǎn)生的無(wú)機(jī)磷酸鹽猝滅Tb3-TR絡(luò)合物熒光探針的熒光這一現(xiàn)象,建立
4、了三種磷?;被岬母哽`敏分析測(cè)定方法.測(cè)定磷?;z氨酸、磷?;K氨酸和磷?;野彼岬木€性范圍分別為:5.0×10-8~5.0×10-7mol/L,5.0×10-8~6.0x10-7mol/L.和5.0×10-5~6.0×l0-7mol/L,檢測(cè)限分別為:2.1×10-8mol/L,1.1×10-8mol/L和1.7×10-9mol/L。最后嘗試用酶促反應(yīng)水解磷?;野彼岵⒗肨b3+-TR絡(luò)合物熒光探針進(jìn)行測(cè)定,測(cè)定的線性范圍為:5.
5、0×10-8~8.0×10-7mol/L,檢測(cè)限為3.8×10-8 mol/L。 第四章在前一章測(cè)定磷酰化氨基酸的基礎(chǔ)上,繼續(xù)開(kāi)展磷?;鞍字辛柞;康臏y(cè)定研究。選取卵黃高磷蛋白為考察對(duì)象,對(duì)其進(jìn)行磷?;康臏y(cè)定研究。得卵黃高磷蛋白中的含磷量為8.94%(w/w),而卵黃高磷蛋白的標(biāo)識(shí)磷含量為8~10%(w/w),結(jié)果一致。并進(jìn)一步計(jì)算得出其123個(gè)絲氨酸殘基中有98個(gè)為磷酰化絲氨酸,該結(jié)果為進(jìn)一步深入研究磷?;鞍滋峁┝擞?/p>
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