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1、蛋白質(zhì)中特定位點氨基酸的磷?;腿チ柞;谏矬w系中扮演著十分重要的角色。通常,蛋白質(zhì)磷酰化和去磷?;^程類似于一個分子開關(guān),調(diào)節(jié)著生命活動的整個過程,包括細(xì)胞的增殖、發(fā)育和分化,神經(jīng)活動,信號轉(zhuǎn)導(dǎo),肌肉收縮,新陳代謝,腫瘤發(fā)生等。真核生物細(xì)胞蛋白質(zhì)中最常見的磷?;愋褪墙z氨酸、蘇氨酸和酪氨酸的磷酸酯化,也是目前的研究熱點之一。同時,在氨基酸的存在下檢測磷?;被釋τ诹私夂芏嗟鞍椎慕巧鹬种匾淖饔谩1菊撐膶b3+-TR絡(luò)合物熒
2、光探針運用于研究磷?;被岷土柞;鞍?。 第一章綜述了磷?;被岷土柞;鞍籽芯康闹饕M(jìn)展,包括磷酰化氨基酸和磷?;鞍椎臋z測、識別、定量研究等。同時對稀土絡(luò)合物熒光探針的原理及其應(yīng)用進(jìn)行了評述。并在相關(guān)研究進(jìn)展和本實驗室前期研究成果的基礎(chǔ)上提出了本論文的研究設(shè)想。 第二章在本實驗室前期運用Tb3-TR絡(luò)合物熒光探針研究含磷酸基團的核苷酸、聚核苷酸、核酸、卵磷脂、輔酶、結(jié)合蛋白酶等化合物的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步探討將該探針用
3、于研究磷酰化氨基酸的可能性,并初步探討了相關(guān)含磷酸基團化合物與Tb3-TR絡(luò)合物熒光探針的作用機理,同時初步嘗試將該探針技術(shù)運用于指示磷?;被崴夂腿チ柞;^程的可能性. 第三章在第二章的研究基礎(chǔ)上利用Tb3-TR絡(luò)合物熒光探針監(jiān)測了磷?;z氨酸(P-Ser)、磷酰化蘇氨酸(P-Thr)和磷?;野彼?P-Tyr)在一定條件下的完全水解,并根據(jù)磷?;被崴猱a(chǎn)生的無機磷酸鹽猝滅Tb3-TR絡(luò)合物熒光探針的熒光這一現(xiàn)象,建立
4、了三種磷?;被岬母哽`敏分析測定方法.測定磷酰化絲氨酸、磷?;K氨酸和磷?;野彼岬木€性范圍分別為:5.0×10-8~5.0×10-7mol/L,5.0×10-8~6.0x10-7mol/L.和5.0×10-5~6.0×l0-7mol/L,檢測限分別為:2.1×10-8mol/L,1.1×10-8mol/L和1.7×10-9mol/L。最后嘗試用酶促反應(yīng)水解磷?;野彼岵⒗肨b3+-TR絡(luò)合物熒光探針進(jìn)行測定,測定的線性范圍為:5.
5、0×10-8~8.0×10-7mol/L,檢測限為3.8×10-8 mol/L。 第四章在前一章測定磷?;被岬幕A(chǔ)上,繼續(xù)開展磷酰化蛋白中磷?;康臏y定研究。選取卵黃高磷蛋白為考察對象,對其進(jìn)行磷?;康臏y定研究。得卵黃高磷蛋白中的含磷量為8.94%(w/w),而卵黃高磷蛋白的標(biāo)識磷含量為8~10%(w/w),結(jié)果一致。并進(jìn)一步計算得出其123個絲氨酸殘基中有98個為磷?;z氨酸,該結(jié)果為進(jìn)一步深入研究磷?;鞍滋峁┝擞?/p>
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