枯草芽孢桿菌368核黃素高產(chǎn)原因的遺傳分析以及工程菌株的初步構(gòu)建.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文枯草芽孢桿菌368核黃素高產(chǎn)原因的遺傳分析以及工程菌株的初步構(gòu)建姓名：張會(huì)圖申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：姚斌20050601AbstractTheresearchmainlyfocusedonBacillussub矗lis368whichcanoverproduceriboflavinInordertofmaiizethereasonwhichcausedtheriboflavinov

2、erproducing，thinekindsofgeneswerecloned，whichdirectiyrelatetiboflavinproductionTheresultsshowedthatthereasonliedinapomtmutationwhichresidesintheribCgeneRibCisthekinaseinvolvedinconversionofriboflavintotheactivecofactorFM

3、NandFADThemutationresultedinreducedactivityofRibCandthendecreasedtheramofconvemionofriboflavintotheflavincoenzymes，whichincreasedtheaccumulationofriboflavinInaddition，themutationalseducestherepressiveeffectsofFMNandFADon

4、r／boperonandypaA(ariboflavintransporter)，whichalsocontributetotheriboflavinoverproduchouOntheotherhandtheriboperonoftheBacillussubal掃Wasalsomodified：eliminatingthe咖box，replacingtheribpromoterbyconstructivebacteriophagepr

5、omoterspolandtakingthetetracyclineresistancegeneasaselectablemarkeretcThenwetransferredthesemodifiedr／boperonintovariouskindsofEscherichiacoliandcomparedtheriboflavinproductionofthesestrainsTheresultsshowedthattheexpress

6、ionofther／bgenesWasdrasticallyincreasedbyreplacingthefirstribinomoterandrfnboxbystrongconstructivepromoterspol，andwhentheampicitlin(100／tg／m1)wasusedasaselectivepressure，theriboflavinproductionofthehoststrainJMl09couldre

7、ached86pg／ml，butwhenthetetracyclineresistancegenewasligatedintothevectorandthetctracycline(20I_tg／m1)Wesusedastheselectivepressure，mevenhigherriboflavinproductionwasreached(approximately108pg／mlabouttantimeshigherthantha

8、tofunmodifiedr／boperon)FinallywealsodevelopedaprotocolfortransformationofBacillussubal括，whichcouldgreatlyincreasethetransformationefficiencyWhentheBacillussubfil括ISWl214WaSusedasthehoststrainthetransformationefficiencyco

9、uldreach15104，evidentlyhi曲erthanotherprotocols。Inaddition，wealsoconstructed口integrationvectorlwhichhavetheoptimizedriboperonandmadeitintegrateintothegenomeofthe1SWl214Thentheintegrationpointwasexaminedandtheexpressionoft

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