金盞菊提取物化學(xué)轉(zhuǎn)化和生物轉(zhuǎn)化法制備葉黃素的研究.pdf

1、本論文以水解金盞菊提取物中葉黃素酯從而得到游離態(tài)葉黃素為研究對象，主要包括以下六個方面。 (1)國內(nèi)外關(guān)于葉黃素方面的研究進(jìn)展。 查閱國內(nèi)外近二十年來關(guān)于葉黃素和葉黃素酯的相關(guān)文獻(xiàn)，對其分析、提取、分離、轉(zhuǎn)化工作進(jìn)行了歸納和總結(jié)。 (2)建立了同時測定葉黃素和葉黃素酯的HPLC法。 建立了一種高效液相色譜法同時測定金盞菊中葉黃素和葉黃素含量的方法。采用KNAUER Eurospher-100 C18(

2、3.9×300rion，4.6μm)色譜柱，以乙腈-甲醇-乙酸乙酯混合液為流動相(v／v／V 55:1:44)，流速1.0mL／min；檢測波長460nm；柱溫：25℃。 (3)建了化學(xué)法轉(zhuǎn)化葉黃素酯為游離態(tài)葉黃素的工藝。 考察了皂化工藝中溶劑類型、KOH濃度、反應(yīng)時間、反應(yīng)溫度和反應(yīng)底物比例對皂化結(jié)果的影響，最佳皂化工藝為：將10.0克葉黃素酯加入50mL飽和KOH甲醇溶液，在室溫下(25℃)下反應(yīng)4h。

3、(4)建立了葉黃素分離純化工藝 葉黃素最佳純化工藝為：將皂化液的濾渣水洗的最佳條件為5℃，冷水洗滌至流出液呈中性，過濾，干燥即可獲得純度大于22.0％的葉黃素產(chǎn)品；將水洗后濾渣，用40mL5℃正已烷分兩次洗滌，再在常溫下溶于二氯甲烷中制得飽和溶液，向飽和溶液中滴加正己烷至出現(xiàn)渾濁，放入冰箱于5℃靜置過夜，再滴加二氯甲烷0.4倍正己烷靜置過夜，過濾后即得到純度大于90.0％的葉黃素產(chǎn)品。 (5)葉黃素酯生物轉(zhuǎn)化法的

4、菌種篩選。 用平板誘導(dǎo)培養(yǎng)基考察了糙皮側(cè)耳、黑曲酶、青霉對葉黃素酯的降解作用，發(fā)現(xiàn)接種青霉和黑曲酶孢子均能將培養(yǎng)基中葉黃素酯轉(zhuǎn)化為游離態(tài)葉黃素，青霉的轉(zhuǎn)化效果優(yōu)于黑曲霉；糙皮側(cè)耳孢子在培養(yǎng)基上不能生長，但接種菌種后亦能將培養(yǎng)基中葉黃素酯轉(zhuǎn)化為游離態(tài)葉黃素。 (6)青霉搖瓶發(fā)酵法轉(zhuǎn)化初步研究 用青霉搖瓶發(fā)酵轉(zhuǎn)化葉黃素酯法制備葉黃素，考察了pH值、接種量和發(fā)酵時間對轉(zhuǎn)化效果的影響。結(jié)果表明在酸條件有利于轉(zhuǎn)化的進(jìn)行；