卵黃高磷蛋白的磁性分離及其與白藜蘆醇相互作用研究.pdf

1、卵黃高磷蛋白是蛋黃中主要的磷蛋白，具有許多優(yōu)良的物化和生物學特性。常用的提取分離方法需要經(jīng)過鹽析粗提蛋白，層析純化蛋白等過程，持續(xù)操作時間長。由于功能性磁性納米粒子具有磁性核體材料的磁響應性和表面殼體材料的功能性，可以在外加磁場的作用下快速方便地從反應體系中分離目標分子。因此，本課題采用磁性納米粒子分離技術，建立了一種新型的卵黃高磷蛋白提取方法，并通過熒光光譜法等研究白藜蘆醇與卵黃高磷蛋白相互作用。論文主要研究結論如下：
　　通過

2、化學沉淀法制備出Fe3O4，表面修飾3％的硫酸軟骨素鈉和Fe3+得到目標磁性納米粒子CMNP@Fe3+。透射電子顯微鏡表征其表面形態(tài)顯示CMNP@Fe3+呈圓球形，粒徑為20 nm，分散性較好。磁滯回線結果表明具有超順磁性；傅里葉紅外光譜表明硫酸軟骨素鈉和 Fe3+已經(jīng)成功修飾在磁性粒子表面；通過原子吸收光譜檢測并計算出納米粒子表面Fe3+修飾量為152.0 mg/g。
　　比較磁性粒子對三種不同前處理粗蛋白吸附量，選擇熱輔助鹽析

3、粗蛋白為提取卵黃高磷蛋白的底物。利用納米粒子表面 Fe3+與卵黃高磷蛋白的強結合力，建立從蛋黃中磁性分離卵黃高磷蛋白的新方法。最優(yōu)的提取條件為：在pH4.0的10 mg/mL粗蛋白醋酸-醋酸鈉溶液中，加入磁性納米粒子CMNP@Fe3+，最終濃度為4 mg/mL，混勻后于30℃恒溫搖床中吸附180 min，利用外加磁場將磁性納米粒子分離，水洗數(shù)次后，加入pH8.0的2 mol/L咪唑-NaCl溶液，37℃恒溫搖床上洗脫2 h。上層洗脫液經(jīng)

4、過透析后冷凍干燥，得到卵黃高磷蛋白。
　　利用動力學模型和等溫吸附模型擬合，確定磁性納米粒子 CMNP@Fe3+吸附卵黃高磷蛋白的過程符合偽二級動力學模型和 Freundlich等溫吸附模型。吸附過程是靜電作用為主的吸熱過程；卵黃高磷蛋白的最大理論吸附量為625.00 mg/g。紅外光譜和非變性凝膠電泳結果表明，利用磁性分離的卵黃高磷蛋白，純度較高。
　　研究了白藜蘆醇和卵黃高磷蛋白的相互作用。發(fā)現(xiàn)卵黃高磷蛋白的熒光發(fā)射峰強

5、度減弱并出現(xiàn)位移現(xiàn)象。計算出25℃和35℃下相互作用體系的猝滅常數(shù)分別為1.12×104 M-1、9.4×103 M-1，確定為靜態(tài)猝滅機理；白藜蘆醇與卵黃高磷蛋白的結合常數(shù)為1.80×104M-1(25℃)、結合位點數(shù)約為1和熱力學參數(shù)分別為?G<0、?H=53.50 kJ/mol、?S=261.00 J/mol·K，由此判定二者之間主要以疏水相互作用為主，是一個吸熱的自發(fā)結合過程。卵黃高磷蛋白的添加能夠提高白藜蘆醇的溶解性，但對DP