尿樣中多環(huán)芳烴的四種代謝產(chǎn)物的富集及HPLC檢測(cè)方法研究.pdf

1、多環(huán)芳烴是廣泛分布并穩(wěn)定存在于自然環(huán)境中的一類持久性有毒有機(jī)污染物。這類有機(jī)物種類較多，分布較廣，與人類密切相關(guān)，具有致癌、致畸、致突變的“三致”作用，極大地威脅著人類的健康，尤其在高職業(yè)PAHs暴露環(huán)境下，具有很大的潛在危害。為了保護(hù)和促進(jìn)職業(yè)人群的健康，預(yù)防及防治職業(yè)傷害和疾病成為人們關(guān)注的熱點(diǎn)問題。對(duì)尿樣中多環(huán)芳烴的代謝產(chǎn)物進(jìn)行監(jiān)測(cè)，既能客觀反映出機(jī)體接觸有害物質(zhì)的水平及中毒程度，又可以為職業(yè)中毒診斷和治療提供重要的依據(jù)。因此，建

2、立一種同時(shí)檢測(cè)尿樣中多種多環(huán)芳烴代謝產(chǎn)物的分析方法十分必要。
　　本項(xiàng)研究建立了同時(shí)測(cè)定尿樣中多環(huán)芳烴四種代謝產(chǎn)物的高效液相色譜法?？疾炝肆鲃?dòng)相組成及配比、流速、檢測(cè)波長等對(duì)四種組分分離與檢測(cè)的影響，確定了最佳色譜條件:以ZORBAX Eclipse XDB-C18為色譜分離柱，用甲醇-水為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，流速1.0 mL/min;采用時(shí)間程序最大吸收波長檢測(cè)，進(jìn)樣量10μL。在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，四種組分在14 min內(nèi)全部出峰

3、，且達(dá)到完全分離，可以滿足四種組分的同時(shí)分離與檢測(cè)。
　　本研究同時(shí)建立了分散液相微萃取和竹炭固相萃取兩種樣品前處理方法，用于實(shí)際尿樣中四種待測(cè)組分的提取與富集。通過一系列實(shí)驗(yàn)參數(shù)的優(yōu)化，確定兩種預(yù)處理方法的最佳實(shí)驗(yàn)條件。分散液相微萃取的最佳實(shí)驗(yàn)條件為:以200μL四氯化碳作為萃取劑，0.8 mL丙酮為分散劑，萃取時(shí)間3 min，尿樣最佳pH值為6.0左右，加鹽量0.1g，揮干溫度為65℃。該條件下，各組分的富集倍數(shù)在40～48倍

4、之間。竹炭固相萃取最佳條件:洗脫劑為丙酮-四氯化碳(v∶v=4∶1)，洗脫劑用量0.5 mL，尿樣最大上樣體積為30mL，尿樣pH為6.0左右，該條件下，各組分的富集倍數(shù)在21～41倍之間。
　　在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，分別建立了用于四種尿代謝產(chǎn)物定量分析的DLLME-HPLC和SPE-HPLC的工作曲線，線性相關(guān)系數(shù)在0.9993～0.9999，線性范圍可達(dá)到103。其中，DLLME-HPLC法中各組分的檢出限為0.06～0.3 ng

5、/mL(S/N=3)，尿樣加標(biāo)平均回收率為95.4～105％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.4～3.5％。SPE-HPLC法中各組分的檢出限為0.08～0.3ng/mL(S/N=3)，樣品加標(biāo)平均回收率為95.3～107％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.5～5.3％。
　　研究表明，所建立的DLLME-HPLC和SPE-HPLC兩種尿樣中多環(huán)芳烴的四種代謝產(chǎn)物的同時(shí)測(cè)定方法均具有簡便、快速、靈敏、準(zhǔn)確、對(duì)環(huán)境友好的特點(diǎn)，能夠滿足尿樣中四種多環(huán)芳烴代謝產(chǎn)物