尿樣中四種有機(jī)化合物代謝產(chǎn)物的富集及氣相色譜檢測方法的研究.pdf

1、正己烷、苯、甲苯和硝基苯等有機(jī)化合物被廣泛用于工業(yè)生產(chǎn)和科學(xué)研究領(lǐng)域中，是最常用的有機(jī)溶劑。這些物質(zhì)通過呼吸道吸入或皮膚接觸，會對人體健康產(chǎn)生一定程度的危害，此類有害物質(zhì)經(jīng)體內(nèi)代謝后可在其尿、血等生物材料中檢出其相應(yīng)的代謝產(chǎn)物，其中2，5-己二酮、苯酚、鄰甲酚和對硝基苯酚依次為上述四種物質(zhì)的尿代謝產(chǎn)物。隨著社會的發(fā)展，職業(yè)危害及預(yù)防越來越受到人們的關(guān)注，對這些有害、有毒物質(zhì)的尿代謝產(chǎn)物進(jìn)行監(jiān)測，能客觀反映出機(jī)體接觸有害物質(zhì)的水平及中毒程

2、度，可為職業(yè)中毒診斷和治療提供重要的依據(jù)。然而，目前我國尚缺乏尿樣中多種有害物質(zhì)代謝產(chǎn)物同時(shí)檢測的成熟方法，更缺少這些有害物質(zhì)代謝物在正常人群尿中的本底值和樣本庫。為此，建立一種同時(shí)檢測尿樣中多種有害物質(zhì)代謝產(chǎn)物的分析方法十分必要。
　　本研究建立了一種同時(shí)檢測四種尿代謝產(chǎn)物的毛細(xì)管氣相色譜方法(GC)。通過考察色譜柱類型、柱溫、進(jìn)樣方式、進(jìn)樣量、載氣流速、柱前壓等條件對四種組分的分離和檢測情況的影響，確定最佳色譜分離及檢測條件:

3、以DB-1毛細(xì)管柱(15 m×0.53mm×0.50μm)為色譜分離柱;采取程序升溫方式:初始溫度60°C，以25°C/min升至140°C，并保持2min;以氮?dú)鉃檩d氣，流速為20 mL/min;尾吹氣（氮?dú)猓┝魉贋?1.7mL/min;氫氣流速為43.4 mL/min;空氣流速為430 mL/min;采用不分流進(jìn)樣，最佳進(jìn)樣量為1.6μL;進(jìn)樣口溫度為260°C，F(xiàn)ID檢測器溫度為300°C。在最佳色譜條件下，四種組分在5 min內(nèi)

4、全部出峰，且達(dá)到完全分離，可以滿足四種有害物質(zhì)尿代謝產(chǎn)物的同時(shí)分離與檢測。
　　本研究同時(shí)建立了分散液相微萃取(DLLME)和固相萃取(SPE)兩種樣品前處理方法，用于尿樣中四種有害物質(zhì)尿代謝產(chǎn)物的提取與富集。通過一系列實(shí)驗(yàn)參數(shù)的優(yōu)化，確定兩種預(yù)處理方法的最佳實(shí)驗(yàn)條件。其中，分散液相微萃取是以150μL二氯甲烷作為萃取劑，0.6 mL異丙醇為分散劑，萃取時(shí)間6 min，尿樣最佳pH值為6左右，加鹽量0.2 g。固相萃取時(shí)，固定相為

5、ProElut C18，尿樣最大上樣體積25 mL，尿樣pH為6左右，洗脫劑為二氯甲烷-四氯乙烷(v∶v=17∶3)，洗脫劑用量0.5 mL。
　　在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，分別建立了用于四種尿代謝產(chǎn)物定量分析的DLLME-GC和SPE-GC的工作曲線，線性相關(guān)系數(shù)在0.9990～0.9999，線性范圍0.01～8.3μg/mL。其中，DLLME-GC對各組分的富集倍數(shù)在19～31倍之間，檢出限為0.002～0.2μg/mL(S/N=3)

6、，尿樣加標(biāo)平均回收率為86.7％～105％，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.1％～5.0％。SPE-GC對各組分的富集倍數(shù)在14～42倍之間，檢出限為0.002～0.4μg/mL(S/N=3)，樣品加標(biāo)平均回收率為88.2％～108％，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.0％～4.9％。
　　研究表明，所建立的DLLME-GC和SPE-GC兩種尿中有害物質(zhì)代謝產(chǎn)物的同時(shí)測定方法均具有簡便、快速、靈敏、準(zhǔn)確、對環(huán)境友好的特點(diǎn)，能夠滿足尿樣中有害物質(zhì)代謝產(chǎn)物生物監(jiān)測