浙江省市售冷鮮雞微生物污染及大腸桿菌耐藥性評(píng)估與分子基礎(chǔ)分析.pdf

1、食源性病原菌能夠引起人和動(dòng)物的感染，是食品安全的主要問題之一。在動(dòng)物養(yǎng)殖中抗生素的大量使用，導(dǎo)致細(xì)菌耐藥率的不斷提高，同時(shí)耐藥基因能在細(xì)菌之間水平轉(zhuǎn)移，給畜禽肉產(chǎn)品產(chǎn)業(yè)鏈構(gòu)成巨大威脅。由于我國冷鮮雞產(chǎn)業(yè)發(fā)展比較緩慢，生產(chǎn)技術(shù)比較落后，從而導(dǎo)致冷鮮雞在生產(chǎn)運(yùn)輸和銷售環(huán)節(jié)容易受到微生物的污染，因此對(duì)市售冷鮮雞微生物污染情況進(jìn)行評(píng)估，同時(shí)分析冷鮮雞源大腸桿菌耐藥性情況，具有重要現(xiàn)實(shí)意義。
　　本研究以浙江省六個(gè)地區(qū)的市售冷鮮雞為原料，對(duì)

2、不同的來源的市售冷鮮雞進(jìn)行微生物檢測(cè)，并對(duì)檢出的大腸桿菌進(jìn)行耐藥性分析。研究主要分為三個(gè)部分:首先，對(duì)來自浙江省六個(gè)市的市售冷鮮雞檢測(cè)微生物污染指標(biāo)，評(píng)估冷鮮雞微生物污染水平;其次，對(duì)市售冷鮮雞進(jìn)行大腸桿菌分離，同時(shí)檢測(cè)大腸桿菌耐藥表型、耐藥基因和毒力基因;最后選擇13株具有代表性的大腸桿菌進(jìn)行全基因組測(cè)序，預(yù)測(cè)所有的耐藥基因、血清型和質(zhì)粒，并對(duì)所測(cè)序的13株大腸桿菌進(jìn)行多位點(diǎn)序列分型。
　　(1)本研究共采集129只來自于浙江省

3、六個(gè)地區(qū)（寧波、杭州、紹興、湖州、嘉興和金華）的農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)和超市地區(qū)的冷鮮雞，其中超市冷鮮雞55只，農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)冷鮮雞74只。按照國標(biāo)的方法分別檢測(cè)菌落總數(shù)、大腸菌群、霉菌和酵母指標(biāo)。結(jié)果表明菌落總數(shù)污染在105～108（CFU/g）數(shù)量級(jí)，菌落總數(shù)污染水平從小到大依次為紹興、寧波、杭州、湖州、金華和嘉興;其中5～6月份，農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)和超市菌落總數(shù)污染沒有顯著差異，7～8月份二者具有顯著性差異;大腸菌群污染水平平均值在8.52×104MPN/g以

4、上;酵母污染水平在103～105（CFU/g）數(shù)量級(jí)，高于霉菌污染，農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)和超市的霉菌和酵母污染沒有差異;
　　(2)本研究共檢出133株大腸桿菌菌株。對(duì)分離大腸桿菌進(jìn)行耐藥表型、耐藥基因和毒力基因的檢測(cè)。冷鮮雞大腸桿菌檢出率表明，農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)檢出率從大到小依次為金華(100％)、寧波(78.6％)、紹興(54.5％)，湖州(54.5％)、嘉興(41.2％)和杭州(40％);超市大腸桿菌檢出率從大到小依次為金華(92.9％)、寧波(

5、75％)、嘉興(71.4％)、紹興(50％)、杭州(33.3％)和湖州(30.8％)。大腸桿菌耐藥表型檢測(cè)結(jié)果表明，大腸桿菌對(duì)氨芐西林的耐藥率最高，其次為復(fù)方磺胺甲噁唑，耐藥率分別為63.85％和55.39％，其次是頭孢唑啉(30％)、頭孢曲松(26.16％)、氨曲南(15.39％)、環(huán)丙沙星(23.85％)、左氧氟沙星(16.93)和慶大霉素(14.62％);哌拉西林、厄他培南和替加環(huán)素沒有檢出耐藥性;通過來自農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)和超市的大腸桿菌

6、對(duì)不同抗生素的耐藥情況對(duì)比，兩個(gè)來源的大腸桿菌對(duì)氨芐西林和復(fù)方磺胺甲惡唑的耐藥率都在50％以上，對(duì)其他藥物的耐藥率均低于40％。大腸桿菌多重耐藥性情況表明，耐3種以上抗生素的大腸桿菌菌株占36.1％，4株大腸桿菌最多可耐6類抗生素，分別是青霉素類、頭孢類、氨基糖苷類、喹諾酮類、四環(huán)素類和磺胺類抗生素。
　　(3)大腸桿菌耐藥基因檢測(cè)結(jié)果顯示，喹諾酮耐藥基因qnrS、aac(6')-Ib、oqxA和oqxB耐藥基因檢出率分別為56.

7、4％、33.8％、25.6％和17.3％;超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBL)與頭孢類耐藥基因TEM、CTX-M-2、CTX-M-9和CTX-M-1檢出率分別為41.4％、37.6％、27.8％和13.5％;β-內(nèi)酰胺類耐藥基因ompCA和ompFA檢出率分別為75.2％和57.1％;氨基糖苷類耐藥基因aphA430、aadA和aacC2檢出率分別為63.2％、47.4％和16.5％;四環(huán)素類耐藥基因tetC、tetM、tetX、tetG和t

8、etO檢出率分別為9％、3.6％、4.5％、3％和2.6％;磺胺類耐藥基因sulⅠ和sulⅡ檢出率較高，分別為77.4％和87.2％;大腸桿菌毒力基因檢測(cè)結(jié)果表明:腸致病性大腸桿菌(EPEC)毒力基因eae和產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌(STEC) stx基因未檢出;其他四種毒力基因est、elt、ipaH和aggR基因檢出率在10％左右
　　(4)通過對(duì)13株大腸桿菌全基因組測(cè)序，并進(jìn)行結(jié)果分析。其中12株大腸桿菌分別預(yù)測(cè)到不同的耐藥基因

9、，包含氨基糖苷類耐藥基因、β-內(nèi)酰胺類耐藥基因、四環(huán)素類耐藥基因、甲氧芐啶耐藥基因和磺胺類耐藥基因;9株大腸桿菌可以預(yù)測(cè)到不同的質(zhì)粒，并能夠與腸桿菌科質(zhì)粒相匹配，其中6株大腸桿菌質(zhì)粒類型能夠與耐藥基因的復(fù)制子相匹配，進(jìn)一步驗(yàn)證攜帶耐藥基因的質(zhì)粒在耐藥性傳播有重要的作用。13株大腸桿菌共預(yù)測(cè)到O血清型10種，H血清型9種，其中O174、O9和H4、H10血清型出現(xiàn)2～3次，各個(gè)地區(qū)來源的大腸桿菌血清型具有較大的差異性。根據(jù)7個(gè)管家基因?qū)?