N-亞甲基磷酸化修飾的殼聚糖非病毒轉(zhuǎn)基因載體的研究.pdf

1、本工作采用均相反應(yīng)法制備N-亞甲基磷酸化殼聚糖衍生物(NMPCS)，研究了其與DNA的復合能力，并將所形成的復合物用于介導體外基因轉(zhuǎn)染，同時考察了載體及其復合物的細胞毒性，主要內(nèi)容包括以下四個部分： (1)以紅外光譜(FT-IR)分析表明改性后的殼聚糖的特征基團有顯著變化;13CNMR檢測進一步證明了亞甲基磷酸基團的引入，結(jié)合元素分析確定了取代度。 (2)通過復凝聚的方法，制備了納米尺寸的NMPCS/DNA聚電解質(zhì)復合物

2、。考察了共聚物與DNA的相互作用情況，復合物中DNA的構(gòu)象變化和復合物的形態(tài)和粒徑。圓二色譜結(jié)果表明DNA與殼聚糖作用形成納米尺寸的復合物后仍然保持著典型的B型構(gòu)象。透射電鏡，原子力顯微鏡檢測結(jié)果表明，不同N/P下的N-亞甲基磷酸化修飾的殼聚糖/DNA納米復合物呈現(xiàn)較規(guī)則的球形，且在高電荷比時可形成尺寸較小的納米尺度顆粒。 (3)以人肝癌細胞HepG2和人宮頸癌細胞HeLa為宿主細胞，嘗試了以NMPCS為載體介導含熒光素酶的pG

3、L3質(zhì)粒的體外轉(zhuǎn)染，重點研究了pH值和N/P比對轉(zhuǎn)染效率的影響。實驗結(jié)果表明，載體可有效將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HeLa和HcpG2細胞，獲得的最佳轉(zhuǎn)染效率遠高于裸DNA和CS，與PEI相當?；诹姿峄鶊F對鈣離子有良好的鰲合能力制備了聚合物鹽型NMPCS-Ca載體，并用于介導基因轉(zhuǎn)染，其轉(zhuǎn)染過程類似于傳統(tǒng)的P-Ca載體，并認為Ca2+離子通道促進了轉(zhuǎn)染過程?？疾炝?6-CS和NMPCS載體協(xié)同介導基因轉(zhuǎn)染研究，結(jié)果表明親疏水相互作用影響復合物的形成和