殼聚糖-聚乙烯亞胺構(gòu)建新型非病毒基因載體及其評(píng)價(jià).pdf

1、目的：依據(jù)載體材料聚乙烯亞胺(PEI)和殼聚糖的自身特點(diǎn)，構(gòu)建PEI修飾的殼聚糖，并進(jìn)一步連接靶向性多肽，通過物理化學(xué)和生物學(xué)手段評(píng)價(jià)新型載體的基本性能、基因轉(zhuǎn)染效率、安全性與體內(nèi)藥效。
　　 方法：⑴孵育法制備PEI/殼聚糖/DNA納米粒，考察不同N/P下納米粒的形態(tài)、粒徑、分布及與DNA的結(jié)合程度。MTT法考察對(duì)HeLa細(xì)胞的毒性，轉(zhuǎn)染試驗(yàn)考察復(fù)合納米粒的轉(zhuǎn)染效率，以獲得PEI，殼聚糖，DNA的最佳配比。⑵合成法制備PEI/

2、殼聚糖新型材料(CP)?？疾觳牧霞凹{米粒在HeLa、A549、HepG2三種細(xì)胞的毒性。測定納米粒的粒徑，電位及凝膠電泳下與DNA的結(jié)合程度.采用蟲熒光素酶質(zhì)粒pGL3及綠熒光蛋白EGFP質(zhì)?？疾霤P在HeLa、A549、HepG2三種細(xì)胞的轉(zhuǎn)染，并考察其入胞機(jī)制。⑶合成法制備靶向性多肽/PEI/殼聚糖新型材料(CPT)，考察其在不同細(xì)胞上轉(zhuǎn)染效率的差異及加入多肽后的競爭性抑制實(shí)驗(yàn)。⑷將CP，CPT攜載趨化性細(xì)胞因子CCL22質(zhì)粒和白介

3、素IL—12質(zhì)粒。分別采用ex vivo和in vivo的方法，考察載體攜載治療基因?qū)22鼠源肝腫瘤的抑制效果。
　　 結(jié)果：當(dāng)PEI/殼聚糖/DNA的N/P為10:4：1時(shí)，孵育法制得的復(fù)合納米粒有較高的生物安全性及轉(zhuǎn)染效率，且血清對(duì)復(fù)合納米粒轉(zhuǎn)染效果影響不大。通過合成反應(yīng)成功地將小分子PEI連接在殼聚糖上形成新型材料，此材料在三種細(xì)胞上均未顯示毒性，與PEI25KDa相比，能夠長時(shí)間地高效轉(zhuǎn)染。結(jié)果顯示CP/DNA的入胞為