非病毒載體介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因雞的初步研究.pdf

1、非病毒載體相比病毒載體具有一些優(yōu)勢(shì)：耐受性、相關(guān)的自身缺陷或誘導(dǎo)中和抗體反應(yīng)性及載體構(gòu)建利鑒定的簡(jiǎn)便性。實(shí)驗(yàn)利用流體力學(xué)注射法、肌肉注射法和睪丸注射法三種方法以非病毒載體進(jìn)行轉(zhuǎn)基因雞研究，在基因治療、基因疫苗及轉(zhuǎn)基因雞生產(chǎn)上有一定的指導(dǎo)意義。
　　 1.流體力學(xué)注射法：10％體重pCAG-EGFP質(zhì)粒(40～100μg)快速靜脈注射6～10日齡小公雞(10～15s內(nèi)完成)。利用熒光顯微鏡觀察、PCR及免疫組化法鑒定8h、1d、3

2、d、5d心、肝、脾、肺、腎組織內(nèi)EGFP基因的表達(dá)，結(jié)果顯示8h肝、脾、肺、腎均檢測(cè)到EGFP，但很快消失。并且8h心、肝、脾、肺、腎組織基因組DNAPCR檢測(cè)為陰性，說明EGFP未整合到雞基因組上。此方法對(duì)雞肝臟基因功能獲得或缺失快述研究提供了一個(gè)有力的工具。
　　 2.肌肉注射法：6～10日齡小公雞左腿肌肉注射pCAG-EGFP質(zhì)粒40～100μg/只。利用熒光顯微鏡觀察、PCR和免疫組化法鑒定8h、1d、3d心、肝、脾、肺

3、、腎組織內(nèi)EGFP基因的表達(dá)，結(jié)果顯示8h肝、腎組織內(nèi)檢測(cè)到EGFP的表達(dá)，隨即消失。且其PCR結(jié)果為陰性，說明EGFP未整合到雞基因組上。此方法對(duì)快速簡(jiǎn)便的基因治療提供了一種可能。
　　 3.睪丸注射法：18周齡體重相近、健康公雞睪丸內(nèi)注射80μgpCAG-EGFP與脂質(zhì)體混合物。轉(zhuǎn)染48h后，利用免疫組化法檢測(cè)睪丸組織內(nèi)EGFP基因的表達(dá)，結(jié)果為陽性，說明EGFP基因在睪丸組織內(nèi)成功地表達(dá)；但是30、60、70d精液PcR均