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1、本文主要研究了雙孔型色譜介質(zhì)在手性拆分和質(zhì)粒純化中的應(yīng)用。首先以甲基丙烯酸縮水甘油酯為單體,雙甲基丙烯酸乙二醇酯為交聯(lián)劑,采用固液聯(lián)合致孔方式,通過一步懸浮聚合制備了球形樹脂,利用掃描電鏡和壓汞儀對(duì)樹脂的外貌和內(nèi)部孔結(jié)構(gòu)進(jìn)行了表征,結(jié)果表明此樹脂具有雙孔型結(jié)構(gòu)。 以雙孔型樹脂為載體,以三聚氯氰為間隔臂,以牛血清白蛋白為手性配基制備了蛋白質(zhì)手性色譜固定相。以d,l-色氨酸為探針,考察了pH值、流速和上樣量等因素對(duì)分離性能的影響,結(jié)
2、果表明上述因素對(duì)分離度的影響較小。當(dāng)上樣量為0.1mg,流速為1800cm/h時(shí),色氨酸的分離度仍可達(dá)到1。比較了色氨酸在雙孔型色譜介質(zhì)上的分離度和在普通色譜固定相上分離度隨流速的變化關(guān)系,結(jié)果表明在雙孔型介質(zhì)上的分離度受流速變化的影響較小。 在質(zhì)粒的提取過程中考察了硫酸銨和氯化鈣對(duì)質(zhì)粒收率及對(duì)蛋白質(zhì)和RNA去除效果的影響。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)硫酸銨是去除蛋白質(zhì)和RNA的有效試劑,同時(shí)能夠保持較高的質(zhì)粒收率,當(dāng)質(zhì)粒提取液中硫酸銨的濃度達(dá)到2
3、.5M時(shí),質(zhì)粒的純化因子可達(dá)10.2,而質(zhì)粒的收率在90%以上,氯化鈣的加入也能有效去除質(zhì)粒提取液中蛋白質(zhì)和RNA,但是質(zhì)粒的收率相對(duì)較低。 以苯酚為配基,對(duì)雙孔型樹脂進(jìn)行修飾,制備了疏水性色譜固定相,用于質(zhì)粒的純化,優(yōu)化了色譜分離條件。由于雙孔型樹脂中大孔的存在,提高了介質(zhì)內(nèi)部的傳質(zhì)速率,增大了對(duì)生物大分子的吸附表面,使得雙孔型介質(zhì)可以在高流速下進(jìn)行質(zhì)粒的純化,同時(shí)保持較高的分離度。當(dāng)流速為20cm/min,上樣量為8mL(質(zhì)
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