AMPK在肌源性IL-6抑制胰島素抵抗發(fā)生的作用研究.pdf

1、本論文研究AMPK信號(hào)通路在肌源性IL-6抑制胰島素抵抗發(fā)生的作用;探討血液、肌肉、肝臟和脂肪等組織在運(yùn)動(dòng)，高脂膳食和shRNA(short hairpin RNA)干預(yù)下，研究AMPK各組織表達(dá)量與肌源性IL-6的相互影響和變化情況;以及運(yùn)動(dòng)與肌源性IL-6的關(guān)系;探討AMPK改善大鼠胰島素抵抗的機(jī)制;揭示AMPK是肌源性IL-6抑制胰島素抵抗發(fā)生的重要轉(zhuǎn)導(dǎo)因子之一。
　　目的:有氧耐力訓(xùn)練的干預(yù)下的高糖高脂膳食大鼠實(shí)驗(yàn)，研究肌

2、源性IL-6對(duì)胰島素抵抗的作用，探討腺苷酸活化蛋白激酶(activated protein kinases，AMPK)作為蛋白通路抑制胰島素抵抗的作用研究。
　　方法與步驟:雄性SD大鼠72只，約4周齡，體重100±10g，按體重隨機(jī)分成9組(A-I)，每組8只。A組:安靜正常飼料組;B組:安靜高脂飼料組;C組:運(yùn)動(dòng)高脂飼料組;D組:運(yùn)動(dòng)高脂飼料shRNA組;E組:運(yùn)動(dòng)高脂飼料空白載體組;F組:安靜高脂飼料shRNA組;G組:安靜

3、高脂飼料空白載體組;H組:安靜正常飼料shRNA組;I組:安靜正常飼料空白載體組。運(yùn)動(dòng)組需進(jìn)行動(dòng)物跑臺(tái)有氧訓(xùn)練，每個(gè)星期休息一天，運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練6天，起始跑速為16米/分，時(shí)間為50分鐘，訓(xùn)練期為8周;需要注射的SD大鼠同時(shí)采用尾部靜脈注射shRNA或空白載體進(jìn)行對(duì)比，shRNA或空白載體實(shí)驗(yàn)鼠在正式開(kāi)始訓(xùn)練前一天尾部靜脈注射，后三次每運(yùn)動(dòng)2周后休息日注射shRNA或空白載體;有氧訓(xùn)練每完成一周運(yùn)動(dòng)，跑速增加1米/分鐘，時(shí)間延長(zhǎng)5分鐘;至第8

4、周結(jié)束時(shí)，運(yùn)動(dòng)速度為23米/分鐘，時(shí)間為85分鐘。實(shí)驗(yàn)結(jié)束，所有SD大鼠采用麻醉法取樣。分別提取大鼠的血液、肌肉組織，脂肪（腹脂）和部分肝進(jìn)行超低溫保存再分析數(shù)據(jù)。然后對(duì)比不同組中，空腹血糖，空腹胰島素和葡萄糖輸注率變化情況，在注射shRNA或空白載體的對(duì)比情況下，比較基因沉默組和空白組的組織中大鼠血清IL-6濃度、各組織IL-6mRNA水平。分析檢測(cè)數(shù)據(jù)來(lái)研究IL-6與AMPK抑制胰島素抵抗形成的作用。
　　實(shí)驗(yàn)測(cè)試的指標(biāo):

5、r>　　1:空腹血糖，空腹胰島素和葡萄糖輸注率在各組中的表達(dá)量。
　　2:大鼠血清IL-6濃度、各組織IL-6mRNA水平。
　　3:IL-6在肌肉、肝和脂肪組織的表達(dá)對(duì)照量。
　　4:AMPK在肌肉、肝和脂肪組織對(duì)比表達(dá)量。
　　結(jié)論:
　　(1)高脂飲食能誘導(dǎo)大鼠發(fā)生胰島素抵抗，高脂飲食形成胰島素抵抗的大鼠其肝臟與脂肪組織的AMPK顯著激活。
　　(2)安靜和高脂飲食形成胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)下，肝臟和脂

6、肪組織中IL-6基因表達(dá)最強(qiáng);而運(yùn)動(dòng)應(yīng)激則大幅度提高了骨骼肌IL-6的基因表達(dá)。
　　(3)大鼠通過(guò)運(yùn)動(dòng)可以改善和預(yù)防胰島素抵抗發(fā)生，運(yùn)動(dòng)抑制胰島素抵抗發(fā)生在一定程度上是通過(guò)IL-6而起作用。
　　(4)運(yùn)動(dòng)會(huì)激活A(yù)MPK蛋白表達(dá)增加，在抑制胰島素抵抗形成的過(guò)程中，與AMPK有關(guān)。
　　(5)shRNA干預(yù)效果明顯，能達(dá)到預(yù)期設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)要求，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，IL-6能有效控制AMPK蛋白表達(dá)量，但I(xiàn)L-6基因的沉默卻不一