基于金銀-DNA的雙光子納米探針構(gòu)建及其細(xì)胞成像應(yīng)用研究.pdf

1、近年來(lái)，以近紅外光作為激發(fā)光源的雙光子顯微鏡在生物檢測(cè)和醫(yī)學(xué)成像領(lǐng)域成為關(guān)注的熱點(diǎn)。與傳統(tǒng)的單光子顯微鏡相比，雙光子顯微鏡具有明顯的優(yōu)勢(shì)：能夠進(jìn)行深層組織成像，具有高的時(shí)空分辨率，允許的觀察時(shí)間更長(zhǎng)。然而，目前大部分應(yīng)用于雙光子成像的熒光探針雙光子吸收橫截面積較小，限制了雙光子顯微技術(shù)的應(yīng)用。此外，雙光子有機(jī)小分子探針由于其本身內(nèi)在的原因，在實(shí)際應(yīng)用過(guò)程中不可避免地存在細(xì)胞膜穿透能力差、抗光漂白能力弱等問(wèn)題。因而設(shè)計(jì)并合成具有優(yōu)良性質(zhì)的

2、雙光子有機(jī)小分子仍然是雙光子顯微鏡應(yīng)用于生物檢測(cè)和成像中亟需解決的問(wèn)題。
　　納米材料由于其優(yōu)良的特性，在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用越來(lái)越廣泛。納米材料如金屬納米材料、介孔硅等不僅是很好的載體，其在生物體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間可調(diào)，且存在 EPR效應(yīng)?；陔p光子有機(jī)小分子在生物檢測(cè)和醫(yī)學(xué)成像方面的優(yōu)勢(shì)，結(jié)合納米材料的應(yīng)用特點(diǎn)，本論文的研究工作主要包括以下幾個(gè)方面：
　　一、設(shè)計(jì)并合成了具有優(yōu)良雙光子性質(zhì)的有機(jī)小分子BMVC-Bu，并對(duì)其與不同

3、DNA序列的作用進(jìn)行研究，考察不同 DNA序列對(duì)BMVC-Bu的熒光增強(qiáng)效果，測(cè)定最強(qiáng)增強(qiáng)效果下 DNA與 BMVC-Bu的結(jié)合比和結(jié)合常數(shù)。同時(shí)，也考察了BMVC-Bu與DNA/BMVC-Bu的雙光子性質(zhì)，為后續(xù)的實(shí)際應(yīng)用打下理論基礎(chǔ)。
　　二、基于谷胱甘肽（GSH）與銀納米顆粒（AgNPs）之間的作用，設(shè)計(jì)了銀納米顆粒（AgNPs）/DNA/BMVC-Bu雙光子納米復(fù)合探針檢測(cè) GSH。首先，以BMVC-Bu/HPDNA為模板

4、合成AgNPs/DNA/BMVC-Bu納米復(fù)合探針。由于AgNPs與 BMVC-Bu之間的距離靠近，產(chǎn)生能量轉(zhuǎn)移，BMVC-Bu/HPDNA的熒光減弱。GSH與 AgNPs之間會(huì)形成強(qiáng)力的Ag-S鍵，產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)作用，促使 AgNPs遠(yuǎn)離BMVC-Bu/HPDNA，熒光恢復(fù)。該納米復(fù)合探針被成功地應(yīng)用于細(xì)胞內(nèi) GSH的檢測(cè)，并實(shí)現(xiàn)了對(duì)細(xì)胞和組織凋亡過(guò)程中GSH變化的監(jiān)測(cè)。
　　三、基于核酸內(nèi)切酶Dnase I對(duì)DNA的剪切作用，設(shè)計(jì)了