重要耐鹽多基因載體GY11在水稻中的表達(dá)分析.pdf

1、鹽害是影響農(nóng)業(yè)生產(chǎn)重要的非生物逆境脅迫之一，水稻作為全世界人口最重要的食用作物之一，全球近一半人口均以稻米為主食。鹽害導(dǎo)致世界上灌溉地的三分之一的水稻減產(chǎn)。在我國(guó)，約占總水稻種植面積近五分之一的稻田受鹽害的脅迫，并且鹽害的程度隨著環(huán)境的變化還在日益擴(kuò)大和不斷加劇，給我們?cè)斐闪撕艽蟮膿p失。寧夏地區(qū)現(xiàn)有鹽堿化耕地已占整個(gè)引黃灌區(qū)耕地的33.54％，且鹽堿化程度仍舊在加劇。所以，培育耐鹽水稻品種具有很重要的意義。
　　 本研究通過改良

2、的農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化法，將多基因表達(dá)載體GY11轉(zhuǎn)入優(yōu)引3號(hào)水稻，通過分子生物學(xué)檢測(cè)，獲得了較多的轉(zhuǎn)基因植株，并進(jìn)行了耐鹽性鑒定。為以后植物轉(zhuǎn)基因表達(dá)載體的設(shè)計(jì)和水稻耐鹽性育種奠定了良好的基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下：⑴水稻再生體系的優(yōu)化:分化培養(yǎng)基中最佳激素配比組合為:0.6 mg/L NAA+1.8 mg/L6-BA。⑵水稻遺傳轉(zhuǎn)化體系的優(yōu)化:Hyg篩死濃度為50 mg/L最佳Hyg篩選濃度為42 mg/L。⑶最佳分蘗激素配比:陽性轉(zhuǎn)基因

3、植株的最佳分蘗激素配比為:0.2 mg/L NAA+0.8 mg/L6-BA。⑷分子檢測(cè):PCR檢測(cè)結(jié)果:從抗性植株中擴(kuò)增出目的基因片段;RT-PCR檢測(cè)結(jié)果，各功能基因均表達(dá);southern blotting結(jié)果，檢測(cè)出單拷貝和多拷貝。⑸Hyg基因表達(dá)檢測(cè):將50 mg/L的Hyg涂抹在轉(zhuǎn)基因植株和對(duì)照植株葉片上，7d后陽性轉(zhuǎn)基因水稻的葉片沒有變化，野生型對(duì)照的水稻葉片變黃，表明Hyg基因在陽性轉(zhuǎn)基因植株中已經(jīng)得到表達(dá)。⑹轉(zhuǎn)基因植株