親水性離子液體1,3-二丁基咪唑氯代鹽在溶菌酶結晶中的應用研究.pdf

1、離子液體可設計的結構特性使其成為潛力巨大的功能性材料，其優(yōu)良的物理和化學性質也使離子液體在多種領域得到了廣泛的應用。蛋白質結構分析是蛋白質組學研究中的重要組成部分，而X-射線衍射是確定蛋白質結構的最有效方法。但迄今為止，適合X-射線衍射的蛋白質晶體的獲取仍是這一領域的主要技術瓶頸。因此發(fā)展蛋白質結晶技術以獲取高質量的蛋白質晶體具有重要意義。
　　本論文以親水性離子液體1，3-二丁基咪唑氯代鹽(BBimCl)為添加劑，以溶菌酶為模型

2、蛋白，研究了離子液體對蛋白質結晶的影響。分別考察了離子液體對溶菌酶晶體形貌與數量、晶體生長速度以及蛋白質結晶純度要求的影響;采用X-射線衍射對所得晶體進行結構測定及解析;并探討了離子液體對溶菌酶結晶過程影響的相關作用機理。
　　實驗發(fā)現結晶過程中離子液體可有效地增大溶菌酶的溶解度、降低溶菌酶的過飽和度；離子液體的低蒸汽壓有利于調節(jié)結晶過程中達到過飽和度的速率和控制晶體生長速率，避免多晶態(tài)現象的發(fā)生并能夠顯著增大晶體的尺寸，得到更適

3、合衍射分析的高質量晶體；此外以離子液體為添加劑可顯著降低結晶過程中對溶菌酶樣品純度的要求，在高濃度雜蛋白共存的情況下仍能得到高質量的溶菌酶晶體。X-射線衍射分析結果表明離子液體的加入不影響溶菌酶晶體的空間結構，離子液體的陽離子進入晶體結構內部，其結合位點位于溶菌酶分子表面的狹長空隙，與周圍的Trp(色氨酸)62、Trp63、Asp(天冬氨酸)101殘基之間有相互作用。
　　將新鮮雞蛋清經過稀釋、酸化、加熱、冷凍干燥處理后，無須加入