岷江百合LrABCF1基因的克隆及功能驗(yàn)證.pdf

1、ATP結(jié)合盒（ATP-binding cassette，ABC）轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族是一類(lèi)跨膜運(yùn)輸?shù)鞍准易?，與植物離子運(yùn)輸、脂質(zhì)運(yùn)輸、次生代謝產(chǎn)物轉(zhuǎn)運(yùn)和外源物質(zhì)運(yùn)輸有關(guān)，在不同生物膜轉(zhuǎn)位過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族分全轉(zhuǎn)運(yùn)子和半轉(zhuǎn)運(yùn)子兩種類(lèi)型。
　　本研究選取ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白F亞族中的一類(lèi)—GCN(general controlnon-derepressible)進(jìn)行研究。野生岷江百合植物ATP結(jié)合盒(ABC)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白F亞族基因

2、LrABCF1屬GCN家族，篩選自CMV誘導(dǎo)的岷江百合抑制消減雜交cDNA文庫(kù)。在矮牽牛中組成型表達(dá)增強(qiáng)了轉(zhuǎn)基因植株對(duì)黃瓜花葉病毒(CMV)、煙草脆裂病毒(TRV)和灰霉菌(B.cinerea)侵染的敏感性。我們檢測(cè)了岷江百合（L.regale）、宜昌百合（L.leucanthum）、卷丹(L.lancifolium)、野百合（L.brownii）、山丹（L.pumilum）、寶興百合（L.duchartrei）、大花卷丹(L.leic

3、htlinii)、毛百合(L.dauricum)、川百合（L.davidii）、淡黃花百合（L.sulphureum）接種CMV和LMoV后LrABCF1的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)岷江百合LrABCF1基因在接種CMV和LMoV后上調(diào)表達(dá)，其最大誘導(dǎo)值顯著高于其他9種野生百合。另外，壓力相關(guān)激素水楊酸(salicylic acid，SA)和乙烯(ethylene，ET)，以及低溫、高鹽堿和造傷處理顯著誘導(dǎo)LrABCF1的表達(dá)。
　　采用RA

4、CE方法克隆岷江百合LrABCF1基因全長(zhǎng)序列，發(fā)現(xiàn)該基因全長(zhǎng)為2，087bp，含有1，779bp開(kāi)放閱讀框，可以編碼592個(gè)氨基酸。相似性序列對(duì)比和系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析顯示，LrABCF1蛋白與水稻OsABCF1和擬南芥AtGCN1高度同源。LrABCF1在矮牽牛中的過(guò)表達(dá)顯著降低了轉(zhuǎn)基因植株正常生長(zhǎng)發(fā)育速度，增強(qiáng)了矮牽牛轉(zhuǎn)基因植株對(duì)CMV、TRV和B.cinerea侵染的抗性，同時(shí)提高了PhGCN2和一些在SA信號(hào)通路中防御相關(guān)基因PhP