檉柳MnSOD基因的克隆及功能驗(yàn)證.pdf

1、本研究是從抗旱、耐鹽植物檉柳中克隆MnSOD基因，構(gòu)建到酵母表達(dá)載體pYES2上，并對其進(jìn)行釀酒酵母的遺傳轉(zhuǎn)化，驗(yàn)證檉柳MnSOD基因的功能。主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： (1)根據(jù)已克隆得到的檉柳MnSOD基因片段，采用RACE技術(shù)從檉柳中獲得MnSOD的cDNA全長序列，699bp完整的開放讀碼框，編碼232個(gè)氨基酸。其5非編碼區(qū)為40bp，3非編碼區(qū)為333bp。經(jīng)生物信息學(xué)分析該蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)為7.10，分子量為26KD。

2、 (2)將MnSOD基因與酵母表達(dá)載體pYES2連接，獲得了pYES-SOD重組質(zhì)粒。將pYES-SOD轉(zhuǎn)化酵母菌INVSc1。隨機(jī)挑選4個(gè)INVSc1(pYES-SOD)單菌落，經(jīng)PCR擴(kuò)增證明MnSOD基因已構(gòu)建到pYES2載體上。 (3)對INVSc1(pYES-SOD)和INVSc1(pYES2)菌株進(jìn)行誘導(dǎo)，研究外源基因MnSOD在酵母中的的表達(dá)情況。結(jié)果表明，INVSc1(pYES-SOD)重組酵母經(jīng)誘導(dǎo)后能夠表達(dá)外

3、源基因，超氧化物歧化酶活性最高達(dá)2.064U/g·min。 (4)重組酵母INVSc1(pYES-SOD)的NaCL、NaCO3、NaHCO3、干旱、紫外線等脅迫實(shí)驗(yàn)證明，INVSc1(pYES-SOD)酵母的抗逆性明顯高于對照INVSc1(pYES2)菌株，實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明在酵母受到逆境脅迫時(shí)，MnSOD基因表達(dá)的超氧化物歧化酶對酵母細(xì)胞起到了保護(hù)作用，同時(shí)也證實(shí)了來源于檉柳的MnSOD基因具有提高真核生物抗逆性的功能。