微波離子液體強(qiáng)化酶促合成異槲皮苷.pdf

1、異槲皮苷具有較好的抗氧化、抗抑郁、降壓降脂等多種藥理作用,引起了醫(yī)學(xué)界廣泛關(guān)注。酶促水解蘆丁產(chǎn)異槲皮苷是被公認(rèn)的最有效獲得途徑之一,但該酶促水解體系中存在著底物溶解度低、反應(yīng)速率慢、后期純化難度大等不可逾越的瓶頸。本文成功構(gòu)建了微波強(qiáng)化離子液體共溶劑選擇性水解蘆丁產(chǎn)異槲皮苷的新體系,在新體系中,蘆丁轉(zhuǎn)化率99.65％、異槲皮苷得率99.27%;反應(yīng)效率提高了120倍;萃取效率達(dá)到68.26%;具體結(jié)果如下:
　　在離子液體作共溶劑

2、體系中,探索并優(yōu)化了[Bmim][BF4]和[Emim][BF4]共溶劑體系中酶促水解蘆丁定向合成異槲皮苷的工藝條件。[Bmim][BF4]體系的最適條件:pH9.0、離子液體濃度10%(V/V)、底物濃度0.78g/L、酶濃度0.05g/mL,與純緩沖液體系相比,異槲皮苷得率提高了2.33倍(91.41%),底物濃度提高了8.75倍,反應(yīng)時間縮短了20h,表觀動力學(xué)參數(shù)提高了29.39倍(259.49g/mol/s);[Emim][B

3、F4]體系的最適條件:pH5.0、離子液體濃度10%(V/V)、底物濃度0.71g/L、酶濃度0.01g/mL,與純緩沖液體系相比,異槲皮苷得率提高了1.65倍(64.86%),底物濃度提高了7.86倍,反應(yīng)時間縮短了10h,表觀動力學(xué)參數(shù)提高了21.80倍(192.48g/mol/s)。經(jīng)響應(yīng)曲面法優(yōu)化后,[Bmim][BF4]體系的異槲皮苷得率提高了8.60%(99.27±0.55%)。
　　在成功構(gòu)建離子液體共溶劑體系的基礎(chǔ)

4、上,采用微波輻射代替?zhèn)鹘y(tǒng)加熱方式,考察了微波輻射效應(yīng)對酶催化蘆丁選擇性水解產(chǎn)異槲皮苷的酶促效率的影響。微波輻射溫度30℃、微波輻射時間5min、pH9.0時,[Bmim][BF4]反應(yīng)體系蘆丁轉(zhuǎn)化率89.18%、異槲皮苷得率84.74%、槲皮素得率2.79%,反應(yīng)時間從原來的10h縮短為5min,反應(yīng)效率提高了120倍,顯著降低了生產(chǎn)成本。
　　以萃取體系的分離系數(shù)和萃取效率為評價指標(biāo),成功篩選出有機(jī)溶劑三乙酸甘油酯作為酶促合成產(chǎn)

5、物異槲皮苷的最適萃取劑。采用單因素法優(yōu)化三乙酸甘油酯萃取分離異槲皮苷的工藝條件:pH6.0、相比1.2、萃取溫度30℃、萃取時間30min時,三乙酸甘油酯萃取異槲皮苷的萃取效率為68.26%。在最優(yōu)條件下,經(jīng)理論計(jì)算,完全萃取反應(yīng)體系中的異槲皮苷需要4級逆流萃取。
　　本文在國內(nèi)外首次構(gòu)建的微波強(qiáng)化離子液體共溶劑選擇性水解蘆丁產(chǎn)異槲皮苷的新體系顯著地提高了轉(zhuǎn)化率、得率和反應(yīng)效率,同時構(gòu)建了三乙酸甘油酯高效萃取體系,為天然產(chǎn)物的生物