基于芘衍生物的分子熒光探針在生物大分子檢測上的應(yīng)用研究.pdf

1、酶作為具有生物催化功能的大分子物質(zhì)，與生命過程緊密相關(guān)。胰蛋白酶作為人體腸道內(nèi)最重要的消化酶，參與眾多的生理過程，其含量異?？赡軙鹨认侔⒁认傺椎缺姸嗉膊?。乙酰膽堿酶在神經(jīng)中樞和外圍神經(jīng)系統(tǒng)中起著非常關(guān)鍵的作用，其含量是否正常與一些神經(jīng)肌肉疾病和阿爾茨海默病等緊密相關(guān)。因此，快速準(zhǔn)確的對這些酶實(shí)施檢測具有很重要的現(xiàn)實(shí)意義。傳統(tǒng)的檢測方法儀器昂貴、操作復(fù)雜且無法快速實(shí)時檢測，因而開發(fā)一種簡單快速靈敏的可視化檢測方法具有很重要的意義。<

2、br>　　分子熒光探針由于其選擇性靈敏度高、原位實(shí)時快速、對樣品檢測無損等優(yōu)點(diǎn)，在環(huán)境科學(xué)以及生命科學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用中受到人們高度關(guān)注。芘作為最重要的熒光基團(tuán)之一，其量子產(chǎn)率高，容易形成穩(wěn)定的激基締合物，已被廣泛的應(yīng)用在各種分子熒光探針的設(shè)計中。
　　針對上述兩種生物大分子的檢測，本文主要做了以下兩部分工作：
　　1.合成了芘的衍生物3-(芘-1-氧基)丙磺酸鈉(Pypos)，采用熒光光譜法實(shí)現(xiàn)了對胰蛋白酶的檢測。該法以精蛋白為

3、底物，帶負(fù)電荷的Pypos分子由于靜電作用在表面帶正電荷的精蛋白周圍規(guī)整排列，形成芘的激基締合物，在胰蛋白酶作用下，精蛋白被迅速水解使得 Pypos分子解聚為單體態(tài)，通過這種excimer-monomer轉(zhuǎn)換實(shí)現(xiàn)對胰蛋白酶的檢測。同時對胰蛋白酶的活性進(jìn)行了實(shí)時監(jiān)測，紫外燈下裸眼檢測限可達(dá)0.5μg/mL。最后對胰蛋白酶抑制劑的抑制效率進(jìn)行了實(shí)時監(jiān)測，其半數(shù)抑制效率濃度IC50為0.4977U/mL。
　　2.合成了芘的衍生物3-(

4、4-(1-芘基)丁酰)丙基三甲基溴化銨(Py-Ch)，利用芘丁酸/Py-Ch的探針體系實(shí)現(xiàn)了對乙酰膽堿酯酶的檢測。芘丁酸/Py-Ch以一定濃度混合后形成激基締合物，在乙酰膽堿酯酶作用下Py-Ch被水解為芘丁酸和膽堿，激基締合物消失，利用芘分子從excimer到monomer之間的轉(zhuǎn)換實(shí)現(xiàn)對乙酰膽堿酯酶的可視化檢測。最后研究了磷農(nóng)藥馬拉硫磷對乙酰膽堿酯酶的抑制作用，結(jié)果表明該體系可潛在的用于對乙酰膽堿酯酶抑制劑的檢測。
　　上述兩種