小鼠主要組織相容性復(fù)合體ⅰ類mhcⅰ酶聯(lián)免疫分析

1、小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類（MHCⅠ）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍：96T10ngL320ngL使用目的：本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類（MHCⅠ）含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類（MHCⅠ）水平。用純化的小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類（MHCⅠ）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ

2、類（MHCⅠ），再與HRP標(biāo)記的主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類（MHCⅠ）抗體結(jié)合，形成抗體抗原酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類（MHCⅠ）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類（MHCⅠ）濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml1瓶6ml1瓶1

3、2孔8條6ml1瓶6ml1瓶6ml1瓶789終止液6ml1瓶0.5ml1瓶1.5ml1瓶1份2酶標(biāo)試劑標(biāo)準(zhǔn)品（640ngL）標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液3酶標(biāo)包被板4樣品稀釋液5顯色劑A液6顯色劑B液10說明書11封板膜12密封袋2張1個標(biāo)本要求1標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融2不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟

4、1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。320ngL160ngL80ngL40ngL20ngL5號標(biāo)準(zhǔn)品4號標(biāo)準(zhǔn)品3號標(biāo)準(zhǔn)品2號標(biāo)準(zhǔn)品1號標(biāo)準(zhǔn)品150l的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液150l的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液150l的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液150l的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液150l的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為

5、縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。注意事項(xiàng)1試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡1530分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。3各步加樣均應(yīng)使用加樣器，

6、并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（n5）。5封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6底物請避光保存。7嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8所有樣品，洗滌液和各種廢棄物