簡(jiǎn)介：目的檢測(cè)ΑMSH及其受體MC1R的瘢痕疙瘩組織中的表達(dá)和對(duì)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的生物學(xué)作用以正常皮膚和增生性瘢痕組織作對(duì)照初步探討ΑMSH在瘢痕疙瘩形成中的作用為瘢痕疙瘩的治療提供依據(jù)方法1、應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)方法對(duì)瘢痕疙瘩、增生性瘢痕和正常皮膚組織來(lái)源的成纖維細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)與擴(kuò)增2、應(yīng)用MTT法檢測(cè)ΑMSH對(duì)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞增殖的作用3、應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)ΑMSH對(duì)瘢痕疙瘩、增生性瘢痕和正常皮膚成纖維細(xì)胞周期分布和增殖水平的影響4、應(yīng)用ELISA方法檢測(cè)ΑMSH對(duì)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞TGFΒ1分泌的影響5、應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)不同組織中ΑMSH及其受體MC1R的表達(dá)以及體外培養(yǎng)的瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞MC1R的表達(dá)結(jié)論ΑMSH及MC1R在瘢痕疙瘩組織中的高表達(dá)、ΑMSH明顯促進(jìn)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞TGFΒ1的分泌以及瘢痕成纖維細(xì)胞對(duì)ΑMSH的反應(yīng)性增強(qiáng)可能在促進(jìn)瘢痕疙瘩的形成中起重要作用

簡(jiǎn)介：少突膠質(zhì)系細(xì)胞包括少突膠質(zhì)細(xì)胞OLIGODENDROCYTEOLGS和少突膠質(zhì)前體細(xì)胞OLIGODENDROCYTEPRECURSCELLSOPCS，是中樞神經(jīng)系統(tǒng)尤其是白質(zhì)內(nèi)的重要細(xì)胞成分。此前較多研究表明，當(dāng)中樞神經(jīng)損傷時(shí)，少突膠質(zhì)細(xì)胞的髓鞘成分對(duì)于軸突再生具有明顯的抑制作用。但是，目前對(duì)于少突膠質(zhì)系細(xì)胞在神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)揮的營(yíng)養(yǎng)與保護(hù)作用，尤其是對(duì)相對(duì)成熟神經(jīng)元的保護(hù)作用，卻研究甚少。近來(lái)的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，體外培養(yǎng)的OPCS具有向神經(jīng)干細(xì)胞NSCS逆向分化能力和無(wú)限增殖能力，而腦內(nèi)的成年OPCS與神經(jīng)元存在著突觸聯(lián)系現(xiàn)象，這提示少突膠質(zhì)系細(xì)胞有可能在體內(nèi)發(fā)揮著重要而復(fù)雜的功能。本課題從少突膠質(zhì)系細(xì)胞的體外培養(yǎng)和體內(nèi)移植入手，結(jié)合上丘逆行標(biāo)記技術(shù)、視神經(jīng)損傷技術(shù)和大鼠視網(wǎng)膜髓鞘形成模型，來(lái)研究少突膠質(zhì)系細(xì)胞在體內(nèi)外的發(fā)育、分化和營(yíng)養(yǎng)因子表達(dá)情況，及其所具有的神經(jīng)保護(hù)作用，以期進(jìn)一步深入認(rèn)識(shí)少突膠質(zhì)系細(xì)胞與神經(jīng)元之間的密切關(guān)系，并為中樞神經(jīng)相關(guān)疾病的治療提供新的思路。為此，本研究采用改良的膠質(zhì)細(xì)胞混合培養(yǎng)與差速貼壁方法獲得大鼠OPCS，使用無(wú)血清培養(yǎng)基進(jìn)行擴(kuò)增、培養(yǎng)，用免疫組織化學(xué)和流式細(xì)胞技術(shù)對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞的純度進(jìn)行鑒定，對(duì)少突膠質(zhì)系細(xì)胞表達(dá)部分營(yíng)養(yǎng)因子的情況進(jìn)行檢測(cè)采用TUNEL、MTT等方法對(duì)少突膠質(zhì)系細(xì)胞條件培養(yǎng)基對(duì)原代培養(yǎng)小腦顆粒神經(jīng)元的保護(hù)作用進(jìn)行檢測(cè)；將OPCS移植入成年SD大鼠玻璃體內(nèi)，利用上丘逆行熒光標(biāo)記技術(shù)，觀察眼內(nèi)移植的OPCS對(duì)眶內(nèi)視神經(jīng)切斷時(shí)的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞RGCS的保護(hù)作用及其持續(xù)時(shí)間；將OPCS或NSCS移植入新生和幼年SD大鼠玻璃體或視網(wǎng)膜內(nèi)，觀察不同時(shí)期視網(wǎng)膜內(nèi)髓鞘形成與分布特點(diǎn)，分析髓鞘的超微結(jié)構(gòu)，并觀察眼內(nèi)髓鞘形成對(duì)損傷神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的保護(hù)作用。主要結(jié)果及結(jié)論如下1利用改良的混合膠質(zhì)細(xì)胞原代培養(yǎng)方法，結(jié)合搖床振蕩和差速貼壁，獲得純度大于93％的OPCS擴(kuò)增培養(yǎng)的OPCS可以表達(dá)多種標(biāo)記物包括NESFIN和GAP43，因子撤除導(dǎo)致細(xì)胞自發(fā)向OLGS分化和成熟；短期的血清刺激使OPCS出現(xiàn)克隆樣增殖現(xiàn)象；OPCS與OLGS可以在MRNA和蛋白水平表達(dá)BDNF和IGF1；OPCS與OLGS的條件培養(yǎng)基能夠促進(jìn)原代培養(yǎng)的小腦顆粒神經(jīng)元的存活。2大鼠玻璃體內(nèi)移植的OPCS可在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)存活，部分細(xì)胞變?yōu)槎鄻O形狀；視神經(jīng)切斷后2周內(nèi)，OPCS移植組的RGCS存活數(shù)量大于對(duì)照組，表明少突膠質(zhì)系細(xì)胞能夠在體內(nèi)發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。3OPCS向新生大鼠玻璃體內(nèi)移植后4周，多數(shù)視網(wǎng)膜內(nèi)開始出現(xiàn)成束髓鞘，表明OPCS可在同種視網(wǎng)膜內(nèi)向少突膠質(zhì)細(xì)胞分化并成熟；髓鞘只分布于神經(jīng)纖維層，提示視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層具有促使髓鞘形成的作用；髓鞘束出現(xiàn)的比例、分布面積和形態(tài)變化與OPCS移植后大鼠的存活時(shí)間相關(guān)；紋狀體NSCS也可以在視網(wǎng)膜內(nèi)向OLGS分化并形成髓鞘。4OPCS向幼年大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)移植后7周，接近半數(shù)的視網(wǎng)膜內(nèi)發(fā)現(xiàn)成束髓鞘，多分布于原移植象限內(nèi)；透射電鏡和免疫組織化學(xué)檢測(cè)證實(shí)視網(wǎng)膜內(nèi)無(wú)明顯的RGCS退化現(xiàn)象及異位RGCS存在；形成的髓鞘具有正常的中樞神經(jīng)髓鞘樣特點(diǎn)，髓鞘化軸突的口徑明顯增大；視神經(jīng)切斷后10D內(nèi)，分布于髓鞘形成扇形區(qū)域內(nèi)的RGCS存活數(shù)量大于對(duì)照組，同時(shí)髓鞘束逐漸崩解消失，表明成熟的OLGS及其髓鞘有可能在體內(nèi)發(fā)揮了神經(jīng)保護(hù)作用。

簡(jiǎn)介：蘇州大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所提交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不含為獲得蘇州大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位證書而使用過(guò)的材料。對(duì)本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人承擔(dān)本聲明的法律責(zé)任。論文作者簽名2塑篁日期刃，≯’甲‘3蘇州大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人完全了解蘇州大學(xué)關(guān)于收集、保存和使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)位論文著作權(quán)歸屬蘇州大學(xué)。本學(xué)位論文電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致。蘇州大學(xué)有權(quán)向國(guó)家圖書館、中國(guó)社科院文獻(xiàn)信息情報(bào)中心、中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所含萬(wàn)方數(shù)據(jù)電子出版社、中國(guó)學(xué)術(shù)期刊光盤版電子雜志社送交本學(xué)位論文的復(fù)印件和電子文檔，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存和匯編學(xué)位論文，可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索。涉密論文口本學(xué)位論文屬在年月解密后適用本規(guī)定。非涉密論文口論文作者簽名，弓M片￡日期7R堅(jiān)’∽導(dǎo)師簽名笪翌鴦竺日期壘竺呈圣

簡(jiǎn)介：目的新生兒中性粒細(xì)胞由于其殺菌機(jī)制不成熟導(dǎo)致新生兒高死亡率。新生兒中性粒細(xì)胞功能的研究說(shuō)明新生兒中性粒細(xì)胞存在多方面功能不成熟，但是沒有一個(gè)統(tǒng)一的理論來(lái)解釋這種功能上的差異。本研究利用定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)尋找新生兒和成人中性粒細(xì)胞的蛋白質(zhì)表達(dá)差異，從而解釋新生兒中性粒細(xì)胞功能不成熟的原因。方法ITRAQ定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析兩組臨床樣本新生兒臍帶血和健康成人靜脈血。KEGG分析差異蛋白的功能。WESTERNBLOT用于認(rèn)證ITRAQ的蛋白表達(dá)結(jié)果。結(jié)果共有1332個(gè)蛋白被檢測(cè)到，其中98％蛋白被定量。當(dāng)把差異表達(dá)蛋白倍數(shù)設(shè)定為124時(shí)，127個(gè)蛋白在新生兒和成人中性粒細(xì)胞中存在差異（P結(jié)論研究提供了一個(gè)整體的新生兒中性粒細(xì)胞與成人中性粒細(xì)胞的蛋白表達(dá)差異的全貌，揭示了臍帶血中性粒細(xì)胞的多種功能缺陷。此外，臍帶血新生兒S組份的下降有可能是S在臍帶血中性粒細(xì)胞中形成推遲的原因。

簡(jiǎn)介：中山大學(xué)博士學(xué)位論文Y’’768013神經(jīng)生長(zhǎng)因子及其受體對(duì)前列腺癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響及其機(jī)制THEEFFECTANDMOLECULARMECHANISMOFNGFANDITSRECEPTORTOPROSTATECANCER專業(yè)人體解剖與組織胚胎學(xué)博士研究生陳昌杰導(dǎo)師何蘊(yùn)韶教授答辯委員會(huì)主席答辯委員會(huì)成員‰填厶淞泓彬俐2啷鉗月刪L砂拗飛VC神經(jīng)生長(zhǎng)因子及其受體對(duì)前列腺癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響及其機(jī)制凋亡，具有抑制NGF刺激TSUPRL、PC3前列腺癌細(xì)胞株增殖的能力。研究還發(fā)現(xiàn)，與正常前列腺上皮細(xì)胞中的表達(dá)情況不同，在前列腺癌細(xì)胞形成的過(guò)程中，P75逐漸失去其表達(dá)，在四種轉(zhuǎn)移性前列癌細(xì)胞株中P75完全不表達(dá)。文獻(xiàn)報(bào)道，在正常上皮細(xì)胞中P75受體的表達(dá)率為100％，但在癌形成過(guò)程中，特別是在分化良好的腫瘤中其表達(dá)減少到37％，分化中等的下降到36％，分化較差的僅僅為16％。P75基因表達(dá)與前列腺腫瘤病理學(xué)分級(jí)呈負(fù)相關(guān)，P75受體和血清PAS水平可以作為前列腺癌的輔助診斷工具。有研究表明，在前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C3中表達(dá)P75受體，可導(dǎo)致細(xì)胞凋亡增加，抑制微衛(wèi)星癌的形成，更深入地研究證實(shí)，對(duì)前列腺癌而言，P75是一種新的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因。P75與TRKA受體協(xié)同性的提高NGF對(duì)TRKA受體反應(yīng)性，P75又與IIJN腺細(xì)胞凋亡有關(guān)，因此，P75受體失表達(dá)可被視為前列腺腫瘤細(xì)胞阻止凋亡機(jī)制的～個(gè)環(huán)節(jié)。P75對(duì)膀胱腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用，可能是通過(guò)下述機(jī)制來(lái)實(shí)現(xiàn)，既誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞停留在G1期，同時(shí)減少S期細(xì)胞數(shù)量，阻礙細(xì)胞周期進(jìn)展。最新文獻(xiàn)報(bào)道，P75通過(guò)NFKAPPAB和JUNK信號(hào)途徑抑制PC3細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。TRK受體為酪氨酸激酶受體家族，其細(xì)胞外區(qū)域與原肌球蛋白融合，具有激活酪氨酸激酶的活性。該家族包括TRKA、TRKB、TRKC三種受體，通過(guò)與不同的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子結(jié)合，來(lái)調(diào)節(jié)中樞和周圍神經(jīng)元的生長(zhǎng)、分化、凋亡。TRK基因最初作為癌基因，該基因編碼的TRKA，分子量為140KD，能以高親和力與NGF結(jié)合。TRKA在神經(jīng)發(fā)育、調(diào)節(jié)細(xì)胞分化和細(xì)胞死亡中起著關(guān)鍵作用，而NGF／TRKA信號(hào)傳導(dǎo)途徑如何及其對(duì)腫瘤發(fā)生、發(fā)展的作用如何均未完全清楚。前列腺癌細(xì)胞株完全失去P75受體表達(dá)，但保留TRKA的表達(dá)。利用吲唑復(fù)合物CEP75L酪氨酸激酶受體抑制劑抑制NGF／TRKA信號(hào)傳導(dǎo)途徑，能夠抑制腫瘤細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)前列腺腫瘤細(xì)胞凋亡，說(shuō)明NGF／TRKA信號(hào)通路在前列腺癌中起著非常重要的作用。目前關(guān)于NGF及其受體在前列腺癌中的表達(dá)情況及其與臨床病理的關(guān)系，以及P75和TRKA對(duì)前列腺癌細(xì)胞的作用等問題，仍有待深入地研究。若針對(duì)上述問題的研究得以實(shí)現(xiàn)，那么，基于研究的進(jìn)一步設(shè)想是，能否采用P75轉(zhuǎn)基因治療前列腺癌，能否采用阻斷NGF／TRKA信號(hào)傳導(dǎo)途徑的方式，來(lái)抑制前列腺腫瘤細(xì)胞的增殖，以實(shí)現(xiàn)阻止腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的目的。

簡(jiǎn)介：學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明，所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不包含為獲得中南大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過(guò)的材料。與我共同工作的同志對(duì)本研究所作的貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說(shuō)明。申請(qǐng)學(xué)位論文與資料若有不實(shí)之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。作毒簽名孛吼捌轤{月監(jiān)日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者和指導(dǎo)教師完全了解中南大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定即學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交學(xué)位論文的復(fù)印件和電子版；本人允許本學(xué)位論文被查閱和借閱；學(xué)?？梢詫⒈緦W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密論文待解密后適應(yīng)本聲明。作者簽名啦日期72雌年。至月J翌日一名翻INVITROSTUDYONSHRNADECREASINGTHEEXPRESSIONOFHUMANTESTISSPECIFICGENETDRGLANDAFFECTINGTHEPROLIFERATION，INVASIONANDAPOPTOSISOFNTERA一2CELLABSTRACT0BJECTIVEWEHAVESCREENEDANDCLONEDANOVELHUMANTESTISSPECIFICGENE，NAMEDTESTISDEVELOPMENTALRELATEDGENE1TDRG1GENBANKDQ168992，USINGDIGITALDIFFERENTIALDISPLAY．INOURPREVIOUSWORK，WEHYPOTHESIZEDTHATTHISGENEMIGHTBEINVOLVEDINTHEOCCURRENCEANDDEVELOPMENTOFTESTICULOMA．TOINVESTIGATETHISPOSSIBILITY,WEHAVESUCCESSFULLYESTABLISHEDASTABILIZEDRNAINTERFERENCESYSTEMTODECREASETHEEXPRESSIONOFTDRGLINNTERA．2EELLLINE．INTHISSTUDY,TOEXPLORETHEFUNCTIONOFTDRGLINTESTICULOMAFURTHER,WESUCCESSFULLYTRANS；FECTEDTHETDRG1．SHRNA486ANDTDRG1．SHRNA／CONTROLEXPRESSIONVECTORSDESCRIBEDINOURPREVIOUSWORKPUBMEDPMID23117448INTONTERA．2CELLSINVITROANDTESTEDTHEBIOLOGICALBEHAVIORSOFNTERA一2CELLS．METHODSFIRSTLY,WECHECKEDTHEEXPRESSIONOFTDRGLINNTERA．2CELLLINE．THENWEUSEDFLUORESCENCEMICROSCOPETOENSURETHESUCCESSFULTRANSFECTION．THEEXPRESSIONOFTDRG1MRNAANDPROTEINWASVERIFIEDBYFLUORESCENCEQUANTITATIVEPCRANDINDIRECTEELLIMMUNOFLUORESCENCE，RESPECTIVELY．FURTHERMORE，WEUSEDSUCHMETHODSASMTTASSAY,TRANSWELLASSAYANDFLOWCYTOMETRYTODETECTTHEBIOLOGICALBEHAVIORSOFNTERA．2CELLS．RESULTSWEDETERMINEDTHATTHETDRGLMRNAANDPROTEINLEVELSWERESIGNIFICANTLYREDUCEDBVTDRG1．SHRNA486EXPRESSIONVECTOR．MOREOVER,THEABILITYTOPROLIFERATEANDINVADEINVITROWASSUPPRESSEDINCELLSWHERETHEEXPRESSIONOFTDRG1WASDOWNREGULATED．ANDACORRESPONDINGINCREASEINTHEAPOPTOTICPOTENTIALWASOBSERVED．CONCLUSIONFIRSTLY,THESERESULTSINDICATETHATTHETDRG1．SHRNA486EXPRESSIONVECTORCONSTRUCTEDPREVIOUSLYCANINTERFERETHETDRGLEXPRESSIONEFFECTIVELYANDSTABLY．WECONSTRUCTAGOODCELLLINEMODELINWHICHTDRG1EXPRESSIONWASINHIBITED．SECONDLY,THEABILITYOFPROLIFERATIONANDINVASIONOFNTERA一2CELLSINVI仃OCANBEPOSITIVELYREGULATEDBYTDRG1，WHILETHEPOTENTIALOFAPOPTOSISCANBEIII

簡(jiǎn)介：細(xì)胞微環(huán)境中除了微流體流動(dòng)引起的動(dòng)態(tài)變化的剪應(yīng)力外，還包含多種濃度隨時(shí)間變化的生化因子，即動(dòng)態(tài)生化信號(hào)，這些動(dòng)態(tài)生物力學(xué)和生化信號(hào)對(duì)細(xì)胞功能和細(xì)胞行為起重要的調(diào)控作用。近年來(lái)微流控芯片技術(shù)成為離體構(gòu)建細(xì)胞微環(huán)境用以研究細(xì)胞與微環(huán)境相互作用的重要實(shí)驗(yàn)技術(shù)平臺(tái)。但現(xiàn)有的大多數(shù)研究將細(xì)胞暴露于恒定濃度的生化環(huán)境中，僅能為細(xì)胞加載單一的生物力學(xué)或生化信號(hào)，并且忽略了微通道傳輸特性對(duì)動(dòng)態(tài)生化信號(hào)傳輸?shù)挠绊懀瑢?dǎo)致無(wú)法實(shí)現(xiàn)對(duì)離體細(xì)胞生物力學(xué)或生化動(dòng)態(tài)微環(huán)境的精確控制。基于流體力學(xué)和微流控芯片技術(shù)，本文設(shè)計(jì)了一種流量法控制兩種動(dòng)態(tài)生化信號(hào)快速切換刺激的Y型微流控剪切裝置。該裝置能對(duì)離體培養(yǎng)的細(xì)胞精確加載剪應(yīng)力和不同動(dòng)態(tài)生化信號(hào)的組合切換刺激用于細(xì)胞生物學(xué)分析。將Y型微流控剪切裝置的混合通道看作信號(hào)傳輸系統(tǒng)，考慮微通道內(nèi)定常流和單向振蕩流流速分布、TAYLARIS彌散、分子橫向擴(kuò)散、通道尺寸等因素的影響，系統(tǒng)分析了混合微通道的傳輸特性和動(dòng)態(tài)生化信號(hào)在混合微通道內(nèi)的傳輸規(guī)律。在定常流情況下，利用分離變量法求解混合微通道內(nèi)動(dòng)態(tài)生化信號(hào)傳輸?shù)腡AYLARIS彌散控制方程，得到了混合微通道信號(hào)系統(tǒng)傳遞函數(shù)和截止頻率的解析表達(dá)式。數(shù)值計(jì)算結(jié)果表明混合微通道信號(hào)系統(tǒng)具有低通濾波特性，其截止頻率是由微通道高度日、流體動(dòng)力粘度Μ、分子擴(kuò)散系數(shù)D、傳輸距離Z和剪應(yīng)力ΤW決定的函數(shù)。在單向振蕩流情況下，用數(shù)值仿真方法分析了振蕩流頻率、振蕩流幅度、平均流量和傳輸距離對(duì)微通道內(nèi)動(dòng)態(tài)生化信號(hào)傳輸?shù)挠绊?。結(jié)果表明，振蕩流頻率接近于生化信號(hào)頻率時(shí)，振蕩流對(duì)生化信號(hào)傳輸有明顯的非線性調(diào)制作用增大振蕩幅度將加劇生化信號(hào)的非線性失真程度。攝動(dòng)分析結(jié)果表明，振蕩流與動(dòng)態(tài)生化信號(hào)的非線性相互作用是導(dǎo)致振蕩流與定常流中生化信號(hào)傳輸產(chǎn)生差異的根本原因。本文工作有助于理解動(dòng)態(tài)生化信號(hào)在動(dòng)態(tài)微環(huán)境中的傳輸規(guī)律，同時(shí)也為運(yùn)用微流控芯片技術(shù)離體構(gòu)建動(dòng)態(tài)的細(xì)胞微環(huán)境時(shí)相關(guān)微通道傳輸系統(tǒng)的優(yōu)化提供了一定的理論依據(jù)。

簡(jiǎn)介：復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文星形膠質(zhì)細(xì)胞原代培養(yǎng)與神經(jīng)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化的生物學(xué)研究THEBIOLOGICALRESEARCHOFASTROCYTESFROMPRIMARYCULTUREANDNEURALSTEMCELLSINDUCED作者姓名滕騰學(xué)科專業(yè)臨床醫(yī)學(xué)碩士（兒外科導(dǎo)師李昊教授導(dǎo)師組成員陳蓮副教授陸國(guó)平副教授復(fù)旦大學(xué)碩JR研究生學(xué)位論文星形膠質(zhì)細(xì)胞原代培養(yǎng)與神經(jīng)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化生物學(xué)研究縮略語(yǔ)注釋英文縮寫英文詞匯中文詞匯ASTASTROCYTE星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAPGLIALFIBRILLARYACIDICPROTEIN膠質(zhì)纖維酸性蛋白CNSCENTRALNERVOUSSYSTEM中樞神經(jīng)系統(tǒng)BFGFBASICFIBROBLASTGROWTHFACT堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)RTPCRREVERSETRANSCRIPTASEPOLYMERASECHAINREACTION逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)REALIMEPCRREALTIMEPOLYMERASECHAINREACTION實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)CNTFCILIARYNEUROTROPHICFACT睫狀神經(jīng)生長(zhǎng)因子EGFEPITHELIALGROWTHFACT表皮生長(zhǎng)因子NSCNEURALSTEMCELL神經(jīng)干細(xì)胞DAPI46DIAMIDINO2PHENYLINDOLE46_聯(lián)脒2_苯基N引噪FBSFETALBOVINESERUM胎牛血清PBSPHOSPHATEBUFFEREDSALINE磷酸鹽緩沖液VEGFVULARENDOTHELIALGROWTHFACT血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子BFGFBASICFIBROBLASTGROWTHFACT堿性成纖維生長(zhǎng)因子NPCNEURALPRECURSCELL神經(jīng)前體細(xì)胞MMPM(jìn)ATRIXMETALLOPROTEINASE基質(zhì)金屬蛋白酶TLR4TOLLLIKERECEPT4TOLL樣受體44

簡(jiǎn)介：分類號(hào)分類號(hào)R7352R7352學(xué)校代碼學(xué)校代碼1039210392學(xué)科專業(yè)代碼學(xué)科專業(yè)代碼100210100210學(xué)號(hào)號(hào)21210031132121003113碩士學(xué)位學(xué)位論文論文轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)錄因子SOX2SOX2、OCT4OCT4在胃癌組織中的表達(dá)及過(guò)表達(dá)在胃癌組織中的表達(dá)及過(guò)表達(dá)SOX2SOX2對(duì)胃癌細(xì)胞生物學(xué)特性影響的研究對(duì)胃癌細(xì)胞生物學(xué)特性影響的研究ASTUDYABOUTTHEEXPRESSIONOFSOX2OCT4INGASTRICCANCERTISSUESTHEIMPACTOFOVERPRESSIONOFSOX2INTHEBIOLOGICALACTERISTICSOFGASTRICCANCERCELLS學(xué)位類型型醫(yī)學(xué)碩士醫(yī)學(xué)碩士所在學(xué)院院第一臨床第一臨床醫(yī)學(xué)院學(xué)院申請(qǐng)人姓名申請(qǐng)人姓名徐毅徐毅學(xué)科學(xué)科、專業(yè)專業(yè)外科學(xué)（普外科）外科學(xué)（普外科）導(dǎo)師師羅琪羅琪教授教授研究起止日期研究起止日期2012013年1010月至月至2012015年2月答辯委員會(huì)主席答辯委員會(huì)主席陳思曾陳思曾教授教授答辯日期期2012015年0505月1313日二○一五○一五年五月福建醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文目錄英文縮略詞英文縮略詞1中文摘要中文摘要2ABSTRACT5前言前言8材料與方法材料與方法101主要材料1011組織標(biāo)本1012細(xì)胞株來(lái)源1013質(zhì)粒來(lái)源1015主要試劑1216主要試劑的配制1417PCR引物162實(shí)驗(yàn)方法1621組織標(biāo)本采集1622細(xì)胞培養(yǎng)1623慢病毒包裝1724慢病毒生物學(xué)滴度測(cè)定1825慢病毒感染SGC7901并誘導(dǎo)穩(wěn)轉(zhuǎn)株SGC7901HSOX2，穩(wěn)轉(zhuǎn)株SGC7901ZPP1926總RNA提取及MRNA逆轉(zhuǎn)成CDNA20

簡(jiǎn)介：第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文CD34、CD105、MMP9在脊柱骨巨細(xì)胞瘤中的表達(dá)及其生物學(xué)意義的研究姓名黃權(quán)申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)骨外科學(xué)指導(dǎo)教師肖建如20080401獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作。除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。本人承擔(dān)本聲明的法律責(zé)任。學(xué)位論文作者簽名叛投學(xué)位論文使用授權(quán)書聲明本人完全了解第二軍醫(yī)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤。允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)第二軍醫(yī)大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書學(xué)位論文作者簽名勢(shì)衣勺簽字日期≯噻針月這日導(dǎo)師張％簽字日期勘。繹嵋7，日

簡(jiǎn)介：第一部分、脂肪基質(zhì)干細(xì)胞與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性的比較目的分離培養(yǎng)人脂肪基質(zhì)干細(xì)胞，并鑒定其表型，建立脂肪基質(zhì)干細(xì)胞的分離、純化、擴(kuò)增和鑒定的方法。比較脂肪基質(zhì)干細(xì)胞與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞MSC生物學(xué)特性上的異同，為的細(xì)胞移植治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法分離人脂肪組織，膠原酶Ⅰ消化后制備細(xì)胞懸液并培養(yǎng)，消化傳代以純化細(xì)胞。細(xì)胞計(jì)數(shù)法繪制脂肪基質(zhì)干細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線，流式細(xì)胞術(shù)及免疫熒光法檢測(cè)其表型。密度梯度離心法分離骨髓單個(gè)核細(xì)胞，有核細(xì)胞貼壁法培養(yǎng)獲得MSC。對(duì)培養(yǎng)前后的和MSC分別進(jìn)行計(jì)數(shù)比較，流式細(xì)胞儀測(cè)定比較和MSC表面抗原表達(dá)的異同。通過(guò)混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)和淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)比較這兩種細(xì)胞免疫學(xué)特性的差別。結(jié)果從脂肪中分離的細(xì)胞第3天開始貼壁生長(zhǎng)，其倍增時(shí)間約為48小時(shí)。以后細(xì)胞主要呈梭形生長(zhǎng)。其表型為CD31CD34CD45HLADRCD29CD105CD13CD44。從骨髓中分離出的有核細(xì)胞數(shù)多于從脂肪中分離的有核細(xì)胞P＜0001，但培養(yǎng)后獲得的干細(xì)胞數(shù)差別無(wú)顯著性意義P＞005。和MSC都表達(dá)CD13、CD29、CD44、CD105，而在CD49D、CD106的表達(dá)上存在差異。相同數(shù)量的和MSC在混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)中對(duì)淋巴細(xì)胞的抑制作用相當(dāng)P＞005。結(jié)論成功建立了從人脂肪組織中分離培養(yǎng)和擴(kuò)增基質(zhì)干細(xì)胞的體系。和MSC在細(xì)胞表面抗原表達(dá)和免疫原性等方面既有相似之處，又存在一些差異，說(shuō)明是一群不同于MSC的細(xì)胞。第二部分、脂肪基質(zhì)干細(xì)胞多向分化潛能的研究目的研究脂肪基質(zhì)干細(xì)胞體外定向分化為心肌樣細(xì)胞、神經(jīng)元樣細(xì)胞、成骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞的能力，進(jìn)一步了解的生物學(xué)特性。方法獲取并培養(yǎng)正常人的。5氮胞苷5AZA誘導(dǎo)分化為心肌樣細(xì)胞，全反式維甲酸ATRA誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞，不同濃度地塞米松聯(lián)合維生素C、Β磷酸甘油分別誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞。倒置顯微鏡觀察誘導(dǎo)后細(xì)胞的形態(tài)，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)RTPCR檢測(cè)心肌相關(guān)基因ANP、CTNT、CTNI和ΑMHC及神經(jīng)細(xì)胞相關(guān)基因NESTIN的表達(dá)。免疫熒光法檢測(cè)CTNT和結(jié)蛋白的表達(dá)；WESTERNBLOT法檢測(cè)CONNEXIN43的表達(dá)。免疫組織化學(xué)染色法和WESTERNBLOT法檢測(cè)神經(jīng)絲蛋白NF和神經(jīng)元烯醇化酶NSE的表達(dá)。VONKOSSA染色法檢測(cè)鈣鹽沉積，油紅O染色法檢測(cè)誘導(dǎo)后脂肪細(xì)胞形態(tài)。結(jié)果經(jīng)5氮胞苷的作用可呈現(xiàn)典型的心肌樣細(xì)胞形態(tài)，ANP、CTNT、CTNI和ΑMHC基因及CTNT、結(jié)蛋白和CONNEXIN43均呈陽(yáng)性表達(dá)。不同擴(kuò)增代數(shù)的經(jīng)誘導(dǎo)劑ATRA的作用均呈現(xiàn)典型的神經(jīng)元樣細(xì)胞形態(tài)，巢蛋白基因及NF、NSE均表達(dá)陽(yáng)性。向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)后有鈣鹽沉積，VONKOSSA染色陽(yáng)性；向脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化后油紅O染色陽(yáng)性。結(jié)論具有體外大量擴(kuò)增并保持低分化狀態(tài)的特性，以及定向分化為心肌樣細(xì)胞、神經(jīng)元樣細(xì)胞、成骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞的能力是一種可用于組織工程的理想的種子細(xì)胞。第三部分、脂肪基質(zhì)干細(xì)胞對(duì)異基因T淋巴細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞的影響及機(jī)制探討目的研究對(duì)異基因T淋巴細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞表型及分泌細(xì)胞因子的影響，探討發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用的方式和可能機(jī)制。方法1將上清和分別與異基因T淋巴細(xì)胞進(jìn)行混合培養(yǎng)。MTT法檢測(cè)T細(xì)胞的增殖，ANNEXINⅤ法檢測(cè)凋亡，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)T淋巴細(xì)胞中CD4CD25細(xì)胞的比例，ELISA法檢測(cè)T細(xì)胞分泌IL10和TGFΒ1的水平，RTPCR法檢測(cè)FOXP3基因的表達(dá)。2將上清和分別與異基因樹突狀細(xì)胞DC進(jìn)行混合培養(yǎng)。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD80、CD83和CD86的表達(dá)，ELISA法檢測(cè)DC表達(dá)IL12的水平，RTPCR法檢測(cè)吲哚胺2，3雙加氧酶IDO基因的表達(dá)。結(jié)果1上清對(duì)T淋巴細(xì)胞的增殖和凋亡無(wú)明顯影響。對(duì)T淋巴細(xì)胞的生長(zhǎng)有抑制作用，但對(duì)其凋亡無(wú)影響。上清和均能增加CD4CD25T細(xì)胞在T淋巴細(xì)胞中的比例，增加T細(xì)胞分泌IL10和TGFΒ1的水平，上調(diào)FOXP3基因的表達(dá)。2上清與DC共培養(yǎng)后，使DC表達(dá)CD80、CD83和CD86減少；上清與均能降低DC分泌IL12的水平，并上調(diào)IDO基因的表達(dá)。結(jié)論能通過(guò)細(xì)胞直接接觸和分泌細(xì)胞因子這兩種方式分別作用于T淋巴細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞，發(fā)揮免疫負(fù)調(diào)節(jié)作用，并參與誘導(dǎo)機(jī)體的免疫耐受。

簡(jiǎn)介：目的探討人腎臟系膜細(xì)胞（HUMANMESANGIALCELLS，HMCS）的活化最佳條件和HMCS活化的細(xì)胞表型和分子標(biāo)志，以及活化后的HMCS對(duì)人單核巨噬細(xì)胞HUMANMONOCYTEMACROPHAGESCELLS，HMMCS產(chǎn)生的生物學(xué)效應(yīng)。方法1人HMCS的活化研究及活化后的細(xì)胞表型和分子標(biāo)志研究用10NGML、20NGML、50NGML的重組人血小板源性生長(zhǎng)因子RECOMBINANTHUMANPLATELETDERIVEDGROWTHFACTBB，PDGFBB分別刺激HMCS2H、6H、12H、24H、48H、72H，實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增檢測(cè)系統(tǒng)技術(shù)REALTIMEQUANTITATIVEPCRDETECTINGSYSTEM，QPCR尋找并確定最佳刺激濃度和時(shí)間細(xì)胞計(jì)數(shù)CELLCOUNTINGK8，CCK8檢測(cè)HMCS活化后的增殖能力細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)CELLSCRATCHTEST測(cè)定HMCS活化后的趨化及遷徙能力免疫熒光染色技術(shù)IMMUNOFLUESCENCESTAINING檢測(cè)活化后的HMCS的DESMIN、ASMA、PDGFRΒ、TRANSGELIN、TENSIN表達(dá)情況，并利用QPCR技術(shù)檢測(cè)HMCS處于活化高表達(dá)狀態(tài)下可以持續(xù)的時(shí)間。2活化的人腎系膜細(xì)胞對(duì)人單核巨噬細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)用QPCR方法檢測(cè)PDGFBB刺激后的HMCS是否可以分泌誘導(dǎo)HMMCS活化的細(xì)胞因子以及有無(wú)分泌HMMCS活化的分子標(biāo)志將PDGFBB誘導(dǎo)的的HMCS與HMMCS置于TRANSWELL系統(tǒng)中進(jìn)行共培養(yǎng)，選取2H、6H、12H、24H、48H、72H時(shí)間節(jié)點(diǎn)，研究活化后的HMCS對(duì)HMMCS的生物學(xué)效應(yīng)CCK8檢測(cè)共培養(yǎng)后HMMCS的增殖能力，細(xì)胞劃傷實(shí)驗(yàn)檢測(cè)共培養(yǎng)后HMMCS的趨化和遷徙能力。結(jié)果1人HMCS的活化以及活化后的細(xì)胞表型和分子標(biāo)志1QPCR技術(shù)檢測(cè)不同濃度刺激下的不同時(shí)間點(diǎn)的HMCS活化后的細(xì)胞因子IL1、IL6、CCL2、PDGFRΒ、TRANSGELIN、TENSINMRNA表達(dá)情況結(jié)果顯示當(dāng)使用濃度為20NGML的PDGFBB刺激HMCS時(shí)，效果最為明顯，且于刺激48H的時(shí)候觀察細(xì)胞因子分泌情況效果最佳并且最為顯著，72H時(shí)觀察反而有一個(gè)回落趨勢(shì)，說(shuō)明HMCS活化于48H的時(shí)候出現(xiàn)頂峰。2不同濃度的PDGFBB刺激HMCS后細(xì)胞的增殖能力細(xì)胞計(jì)數(shù)和CCK8均顯示加入PDGFBB刺激的HMCS相比較于空白對(duì)照組，均在20NGML濃度的PDGFBB刺激下增殖最為明顯P＜005。3活化后的HMCS的的遷徙能力變化分別于六孔板內(nèi)劃傷20NGML的PDGFBB刺激48H后的HMCS和對(duì)照組，結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞最后剩余的傷痕面積明顯少于對(duì)照組，面積計(jì)算有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005。4細(xì)胞活化表型的蛋白質(zhì)學(xué)改變免疫熒光染色顯示，活化表型DESMIN、ASMA、PDGFRΒ、TRANSGELIN、TENSIN表達(dá)量與對(duì)照組相比均有增強(qiáng)，NFKB的核內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)也明顯強(qiáng)于對(duì)照組。5HMCS處于活化高表達(dá)狀態(tài)下可以持續(xù)的時(shí)間HMCS于48H的時(shí)候處于活化高表達(dá)的最高峰，以48H為基點(diǎn)，QPCR檢測(cè)技術(shù)顯示這種活化狀態(tài)一直到在此之后的48H才逐漸趨于沒有。2活化的人腎系膜細(xì)胞與人單核巨噬細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)1PDGFBB刺激HMCS細(xì)胞可以分泌促使HMMCS活化的細(xì)胞因子TNF和IL4，而不會(huì)分泌HMMCS活化的分子標(biāo)志CCL0和CCL15和CCL17。2活化的HMCS和HMMCS共培養(yǎng)共培養(yǎng)狀態(tài)下的HMMCS不分泌CCL17（抑炎型），而會(huì)分泌CCL15M1型和CCL1（調(diào)節(jié)型）并在24H的時(shí)候達(dá)到最高。3與活化的HMCS共培養(yǎng)后的HMMCS細(xì)胞的增殖能力和遷徒趨化能力都明顯高于未共培養(yǎng)的HMMCSP＜005。結(jié)論1PDGFBB刺激HMCS并可以致其活化的最佳濃度和最佳時(shí)間分別是20NGML和刺激48H，在此條件下，HMCS的增殖和遷徙能力都達(dá)到最高點(diǎn)P＜005，免疫熒光也表明各種分子標(biāo)志和細(xì)胞表型都在此時(shí)表達(dá)量最高。此種活化狀態(tài)在逐漸變?nèi)醯那闆r下仍然可以維持大約48H，充足用于刺激并活化HMMCS。2活化的HMCS可以分泌誘導(dǎo)HMMCS活化的細(xì)胞因子而不會(huì)分泌HMMCS活化的細(xì)胞表型和分子標(biāo)志，可以排除后期共培養(yǎng)時(shí)的假陽(yáng)性結(jié)果。共培養(yǎng)24HHMMCS的細(xì)胞表型表達(dá)量最高，活化后的HMCS只會(huì)刺激HMMCS產(chǎn)生M1型巨噬細(xì)胞（促炎）和調(diào)節(jié)型巨噬細(xì)胞，而不會(huì)刺激HMMCS產(chǎn)生M2型巨噬細(xì)胞（抑炎）。

簡(jiǎn)介：各種家用電器、輸電線路等產(chǎn)生的工頻電磁場(chǎng)和移動(dòng)通訊設(shè)備產(chǎn)生的射頻電磁場(chǎng)是日常生活中最常見的兩類電磁輻射。由于二者的輻射強(qiáng)度越來(lái)越大人們暴露在其中的時(shí)間越來(lái)越長(zhǎng)有關(guān)這兩類電磁場(chǎng)對(duì)人體健康的影響已經(jīng)受到廣泛關(guān)注。流行病學(xué)研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)期暴露在包括工頻電磁場(chǎng)在內(nèi)的極低頻電磁場(chǎng)中的人們易患白血病腦瘤及乳腺癌而長(zhǎng)期手機(jī)輻射則與聽神經(jīng)瘤和腦膠質(zhì)瘤發(fā)生密切相關(guān)因此國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)IARC分別于2002年和2011年將極低頻電磁場(chǎng)和射頻電磁場(chǎng)列為人類可疑致癌物。目前關(guān)于這兩類電磁輻射致癌效應(yīng)的研究尚缺乏足夠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。體外細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)是模擬整體致癌啟動(dòng)和促進(jìn)過(guò)程的一種體外實(shí)驗(yàn)方法。研究表明體外培養(yǎng)細(xì)胞其細(xì)胞形態(tài)、周期、增殖和凋亡等生物學(xué)特性的改變與細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化密切相關(guān)但迄今為止有關(guān)長(zhǎng)期環(huán)境電磁輻射對(duì)哺乳類細(xì)胞生物學(xué)特性的影響研究尚未見報(bào)道。為了探討工頻電磁場(chǎng)和射頻電磁場(chǎng)與腫瘤發(fā)生的關(guān)系本實(shí)驗(yàn)以對(duì)電磁輻射較為敏感的兩種細(xì)胞株人眼晶狀體上皮細(xì)胞SRA0104和小鼠胚成纖維細(xì)胞BALBC3T3為研究對(duì)象觀察了50HZ工頻電磁場(chǎng)和1950MHZ射頻電磁場(chǎng)長(zhǎng)期暴露對(duì)SRA0104和BALBC3T3細(xì)胞形態(tài)、周期、增殖、凋亡、遷移力以及惡性轉(zhuǎn)化能力的影響進(jìn)行了研究明確了本實(shí)驗(yàn)條件下的電磁輻射對(duì)SRA0104和BALBC3T3細(xì)胞生物學(xué)特性的影響并探討了其相關(guān)機(jī)制。方法將處于指數(shù)生長(zhǎng)期的SRA0104和BALBC3T3細(xì)胞假暴露或暴露于磁場(chǎng)強(qiáng)度為23MT頻率為50HZ的工頻電磁場(chǎng)中每天連續(xù)暴露2H每周暴露5天連續(xù)暴露11周將處于指數(shù)生長(zhǎng)期的SRA0104和BALBC3T3細(xì)胞假暴露或暴露于頻率為1950MHZ比吸收率SPECIFICABSPTIONRATESAR為279WKG的射頻電磁場(chǎng)中每天暴露1H每周暴露5天周一至周五連續(xù)暴露4周。暴露結(jié)束后立即收集細(xì)胞相關(guān)檢測(cè)方法和指標(biāo)如下1利用MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活力2利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期與凋亡3利用免疫蛋白印跡法WESTERNBLOT檢測(cè)蛋白表達(dá)水平4利用劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力5利用軟瓊脂克隆和平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化能力結(jié)果1工頻電磁場(chǎng)暴露11周與假暴露組相比SRA0104細(xì)胞形態(tài)變圓部分細(xì)胞可見異染色體邊集BALBC3T3細(xì)胞形態(tài)無(wú)明顯改變。射頻電磁場(chǎng)暴露4周SRA0104細(xì)胞和BALBC3T3細(xì)胞形態(tài)無(wú)明顯變化。2MTT結(jié)果顯示與假暴露組相比SRA0104細(xì)胞經(jīng)工頻電磁場(chǎng)暴露4周細(xì)胞存活力明顯降低P005暴露11周后細(xì)胞存活力明顯升高P005。3流式對(duì)細(xì)胞周期的檢測(cè)結(jié)果顯示與假暴露組相比SRA0104細(xì)胞經(jīng)工頻電磁場(chǎng)暴露4周處于S期的細(xì)胞比例明顯減少P005暴露11周后處于S期的細(xì)胞比例增大處于G1期的細(xì)胞比例減小P005。4蛋白免疫印跡WESTERNBLOT結(jié)果顯示與假暴露組相比經(jīng)工頻電磁場(chǎng)暴露11周SRA0104細(xì)胞增殖細(xì)胞核抗原PROLIFERATINGCELLNUCLEARANTIGENPCNA和CYCLIND1蛋白水平明顯增加P5流式對(duì)細(xì)胞凋亡的檢測(cè)結(jié)果顯示與假暴露組相比經(jīng)工頻電磁場(chǎng)暴露11周SRA0104細(xì)胞和BALBC3T3細(xì)胞凋亡水平均未發(fā)生明顯改變P005。同樣經(jīng)射頻電磁場(chǎng)暴露4周與假暴露組相比兩種細(xì)胞的凋亡水平也未發(fā)生明顯改變P005。6劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示與假暴露組相比SRA0104細(xì)胞和BALBC3T3細(xì)胞經(jīng)工頻電磁場(chǎng)暴露11周細(xì)胞遷移能力無(wú)明顯變化P005。7軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示SRA0104細(xì)胞和BALBC3T3細(xì)胞經(jīng)工頻電磁場(chǎng)暴露11周假暴露組和暴露組均未見克隆形成。8平板克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示工頻電磁場(chǎng)暴露11周SRA0104細(xì)胞和BALBC3T3細(xì)胞未在平板上形成Ⅲ型轉(zhuǎn)化灶即轉(zhuǎn)化細(xì)胞克隆。結(jié)論111周工頻電磁場(chǎng)暴露對(duì)SRA0104和BALBC3T3細(xì)胞的生物學(xué)特性可產(chǎn)生不同程度的影響且細(xì)胞種類不同工頻電磁場(chǎng)引起的生物學(xué)效應(yīng)也有差異。2PCNA和CYCLIND1參與了工頻電磁場(chǎng)誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖和周期分布的改變。311周工頻電磁場(chǎng)暴露不能誘導(dǎo)SRA0104和BALBC3T3細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。44周射頻電磁場(chǎng)暴露對(duì)SRA0104和BALBC3T3細(xì)胞的增殖、細(xì)胞周期分布和凋亡沒有明顯影響。

簡(jiǎn)介：南方醫(yī)科大學(xué)2010級(jí)碩士學(xué)位論文人根尖乳頭干細(xì)胞與牙周膜干細(xì)胞體外生物學(xué)特性的比較研究COMOARATIVEANALYSISOFINVITN’?！籓F。CELLSOMOARATLVEOIINVLTROCIIARACTERLSTLCSSTEMCELLS0IFROMAPICALPAPILLASCAPANDPERIODONTALLIGAMENTSTEMCELLSPDLSCS課題來(lái)源廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目2009806030000620118061300060學(xué)位申請(qǐng)人導(dǎo)師姓名專業(yè)名稱培養(yǎng)類型培養(yǎng)層次所在學(xué)院熊華翠¨’、●J陳柯口腔醫(yī)學(xué)碩士專業(yè)型碩士研究生南方醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院2013年5月9日廣州中文摘要結(jié)果顯示不僅有含血管的牙髓樣組織生成，更重要的是，原有牙本質(zhì)和MTA表面有一層連續(xù)均勻的牙本質(zhì)樣組織生成。表明人SCAP分化為成牙本質(zhì)樣細(xì)胞后，進(jìn)而形成牙本質(zhì)10L?；加懈庵苎谆蚋饽撃[的年輕恒牙中存活的SCAP可能具有促使病變根尖周組織繼續(xù)發(fā)育成形的作用。哺乳動(dòng)物的牙根發(fā)育是一個(gè)長(zhǎng)期的過(guò)程，包括牙根發(fā)育啟動(dòng)、牙根延長(zhǎng)并建立牙周附著關(guān)系、牙齒萌出直至咬合關(guān)系建立、最后牙根發(fā)育完成、根尖孔閉合。在這一過(guò)程中，牙根進(jìn)一步發(fā)育同時(shí)伴有牙周組織形成及牙周附著的建立【L2|，從而使牙根及牙周組織形成一個(gè)功能單位被錨定在頜骨上。牙根及牙周組織共同的發(fā)育依賴于發(fā)育期牙根的根端組織持續(xù)增殖并分化【L3|。在結(jié)構(gòu)上，發(fā)育期牙根的根端組織包含雙層上皮細(xì)胞構(gòu)成的鞘樣結(jié)構(gòu)，即HERTWIG上皮根鞘HERTWIG’SEPITHELIALROOTSHEATH，HERS，上皮根鞘將其下方的外胚間充質(zhì)組織劃分為牙乳頭及牙囊【141。以往的研究表明牙囊可分化形成牙周膜、牙骨質(zhì)和牙槽骨等牙周組織115171，而牙乳頭形成牙本質(zhì)及牙髓‘71，HERTWIG上皮根鞘則作為牙根形成的誘導(dǎo)者和調(diào)節(jié)者，調(diào)節(jié)牙根大小、形狀和牙根數(shù)【】4|。學(xué)者發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)牙根及牙周組織發(fā)育的信號(hào)分子，如BMP、同源異型盒基因家族MSX和SHH、FGF、GDF均定位于發(fā)育期的根端組織【18。21】。推測(cè)可能通過(guò)細(xì)胞．細(xì)胞及細(xì)胞．基質(zhì)問的相互作用并由此產(chǎn)生的信號(hào)分子使牙根和牙周組織形成細(xì)胞的前體細(xì)胞分化，從而促成牙根和牙周組織的形態(tài)發(fā)生。牙齒萌出前，牙囊包圍著成釉器與牙乳頭組織。然而在牙齒萌出后，牙囊僅居于發(fā)育期牙根根端，與牙乳頭相連，兩種組織間失去了牙胚發(fā)育早期所存在的組織學(xué)分界?？紤]到牙根、牙周組織在發(fā)育上的同步性以及二者功能上的完整性，學(xué)者將發(fā)育期的牙根根端組織命名為“根端發(fā)育復(fù)合體”DEVELOPINGAPICALCOMPLEX，DAC四】。學(xué)者將SD大鼠DAC與陶瓷化骨混合后，移植到大鼠腎包膜下，4W后可見牙本質(zhì)、牙骨質(zhì)、牙周膜及骨樣組織形成。由此推測(cè)DAC在牙根發(fā)育時(shí)期，不僅繼續(xù)形成牙根，同時(shí)也形成牙周組織，以建立結(jié)構(gòu)完整的牙根／牙周復(fù)合體，從而行使咀嚼功能【22】。學(xué)者利用小型豬動(dòng)物模型，外科手術(shù)去除牙根發(fā)育初期的牙乳頭后，盡管牙髓組織完整，但牙根停止發(fā)育；相比之下，含有牙乳頭的其它牙根生長(zhǎng)和發(fā)育均正LI

簡(jiǎn)介：腫瘤干細(xì)胞是指在腫瘤中組織少量存在的一群具有自我更新和分化潛能的腫瘤細(xì)胞。先后急性髓性白血病、乳腺癌、腦癌、腸癌、黑色素瘤等多種腫瘤中發(fā)現(xiàn)了腫瘤干細(xì)胞，該細(xì)胞亞群是腫瘤發(fā)生、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的根源，為腫瘤的診斷和治療提供了新靶點(diǎn)。腦膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)常見的腫瘤類型，惡性程度高、術(shù)后易復(fù)發(fā)、病人預(yù)后差。2003年，SINGH等首次發(fā)現(xiàn)了腦瘤干細(xì)胞，并將CD133分子作為腦瘤干細(xì)胞特異性的標(biāo)志分子。此后，諸多研究表明CD133腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞與腫瘤的分級(jí)預(yù)后、血管形成、高度耐藥性、放化療耐受等許多惡性行為有關(guān)，但CD133分子具體的生物學(xué)功能和作用機(jī)制還有待深入研究。鑒此，本研究通過(guò)基因轉(zhuǎn)染的方法構(gòu)建了一株穩(wěn)定表達(dá)CD133分子的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株，并對(duì)其生長(zhǎng)、細(xì)胞周期、神經(jīng)球形成、干細(xì)胞相關(guān)基因表達(dá)、裸鼠體內(nèi)致瘤性等生物學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了分析。第一部分人CD133基因轉(zhuǎn)染腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株的建立【目的】構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)人CD133分子的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株?！痉椒ā繕?gòu)建含人CD133全長(zhǎng)CDNA的逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體，采用脂質(zhì)體法將重組質(zhì)粒及其輔助載體導(dǎo)入293T細(xì)胞包裝逆轉(zhuǎn)錄病毒，進(jìn)而感染腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251，ZEOCIN加壓篩選，流式細(xì)胞術(shù)、細(xì)胞免疫化學(xué)及REALTIMEPCR檢測(cè)CD133分子的表達(dá)；同時(shí)構(gòu)建PEGZTERM空載體轉(zhuǎn)染的對(duì)照細(xì)胞株U251MOCK。【結(jié)果】成功構(gòu)建高表達(dá)CD133分子的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251CD133?！窘Y(jié)論】成功構(gòu)建了高表達(dá)CD133分子的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株，為CD133分子的生物學(xué)作用研究提供了良好工具。第二部分CD133分子轉(zhuǎn)染對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的作用研究【目的】研究CD133分子對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖、遷移、細(xì)胞周期、干細(xì)胞相關(guān)基因的表達(dá)、體內(nèi)致瘤性等生物學(xué)特性的影響?！痉椒ā恳缘谝徊糠謽?gòu)建的U251CD133及U251MOCK細(xì)胞株為研究模型，利用細(xì)胞計(jì)數(shù)、神經(jīng)球形成實(shí)驗(yàn)及PI染色法檢測(cè)CD133分子對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞在體外增殖、神經(jīng)球形成能力及細(xì)胞周期的影響；REALTIMEPCR檢測(cè)CD133基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞株干細(xì)胞相關(guān)基因的表達(dá)；裸鼠皮下成瘤法檢測(cè)CD133分子對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的體內(nèi)致瘤性的影響?！窘Y(jié)果】1在有血清培養(yǎng)條件下，人CD133分子對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251的細(xì)胞增殖并無(wú)影響；但在無(wú)血清神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)條件下可以促進(jìn)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞神經(jīng)球的形成；2與對(duì)照組相比，CD133基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞株S期細(xì)胞比例明顯增加；3CD133分子促進(jìn)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株不同程度上調(diào)干細(xì)胞相關(guān)基因的表達(dá)；4CD133分子可明顯增強(qiáng)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的體內(nèi)致瘤性?！窘Y(jié)論】初步研究表明CD133分子促進(jìn)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株進(jìn)入S期；促進(jìn)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞上調(diào)干細(xì)胞相關(guān)基因的表達(dá)，增強(qiáng)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的神經(jīng)球形成能力和體內(nèi)致瘤性。