簡(jiǎn)介：ATHESISSUBMITTEDTOZHENGZHOUUNIVERS塒FORTHEDEGREEOFMASTERIILLPACTOFUPREGULATINGINSULINLIKEGROWTHFACTORBINDINGPROTEINRELATEDPROTEIN1IGFBPRP1GENEONHUMANENDOMETRIALCANCER1一AHEC一1ABI0109ICAL向NCTIONBYXIAOFENZHANGSUPEⅣISORPROFRUIXIAGUOPROFESSIONOFOBESTETRICSANDGYNECOLOGYTHEFIRSTAMLIATEDHOSPITALOFZHENGZHOUUNIVERSITYMARCH2014摘要上調(diào)胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白1對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系HEC一1A生物學(xué)功能的影響碩士研究生張曉芬導(dǎo)師郭瑞霞教授鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科鄭州市450052摘要背景與目的近些年來(lái)子宮內(nèi)膜腺癌的發(fā)病率逐年上升。肥胖，高血壓，糖尿病和血脂異常的多種危險(xiǎn)因素共同構(gòu)成的代謝綜合征與子宮內(nèi)膜腺癌的發(fā)病密切相關(guān)。而胰島素抵抗是代謝綜合征的中心環(huán)節(jié)。胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白INSULIN1IKEGROWMF．ACTORBINDINGPROTEINS，IGFBPS是胰島素樣生長(zhǎng)因子INSULIN．1IKEGROWMFACTOR，IGF體系中的重要成員，其中包括與IGF有較高的結(jié)合能力的IGFBPL6，及新近發(fā)現(xiàn)的與胰島素有較高結(jié)合能力的IGFBP7．15，又被稱為胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白INSULINLIKEGROWTHFACTORBINDINGPROTEINRELATEDPROTEIN，IGFBP．RP，其中研究最多最重要的是LGFBP．RPL，與IGFBPL．6相比，LGFBP．RPL與IGFL和IGF2的結(jié)合能力分別要弱5倍和20．25倍，但與胰島素的結(jié)合能力要強(qiáng)500倍。胰島素和IGFBP．RPL結(jié)合后使胰島素降低或喪失正常生理作用，導(dǎo)致機(jī)體胰島素敏感性下降，引起胰島素抵抗，從而參與一些惡性腫瘤如結(jié)腸癌、乳腺癌等的發(fā)生發(fā)展，并且高胰島素血癥和低IGFBP．RPL水平是子宮內(nèi)膜癌的高危因素。但是1GFBP．RPL在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞發(fā)揮何種作用尚不清楚，因此，本研究應(yīng)用脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染方法將重組質(zhì)粒PEX一2_IGFBP．RPL轉(zhuǎn)染LGFBP．RPL低表達(dá)的子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系HEC．1A，觀察上調(diào)LGFBP．RPL對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系HEC．1A的增殖速率，凋亡及細(xì)胞周期的影響，探討1GFBP．RPL在子宮內(nèi)膜癌中發(fā)揮的具體作用。

簡(jiǎn)介：背景與目的腎細(xì)胞癌是泌尿系統(tǒng)常見惡性腫瘤之一發(fā)病率約占成人全身惡性腫瘤的3％其中80為透明細(xì)胞癌全球每年大約有200000人死于腎癌而且發(fā)病率和死亡例數(shù)仍在不斷增加外科手術(shù)是治療早期腎癌的有效手段之一包括根治性腎切除術(shù)及腎部分切除術(shù)腎癌的總體5年生存率只有5060腫瘤的生長(zhǎng)依賴于血管的新生抑制腫瘤血管生成已經(jīng)成為腫瘤治療的一種策略。VEGF可特異性促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖、參與血管生成、增加血管通透性等在動(dòng)物胚胎發(fā)育、傷口修復(fù)、腫瘤發(fā)生等多種生理及病理過(guò)程中發(fā)揮重要作用。因此VEGF及其受體成為目前抗腫瘤血管形成治療最為成熟的靶分子。RNAI技術(shù)不僅在功能基因組研究中發(fā)揮了重要用而且是一種潛在的以特異性基因沉默為方法治療疾病的手段。尤其在腫瘤的干預(yù)中更具有潛在意義。本課題利用RNAI技術(shù)沉默腎細(xì)胞癌細(xì)胞中VEGF的表達(dá)抑制腎細(xì)胞癌細(xì)胞株的增殖、生長(zhǎng)、侵襲和遷移為其臨床開發(fā)和探索腫瘤治療的新途徑提供實(shí)驗(yàn)和理論基礎(chǔ)。方法化學(xué)合成針對(duì)VEGF的小干擾RNA通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染至腎癌細(xì)胞株ACHN中收集細(xì)胞通過(guò)蛋白印跡方法檢測(cè)VEGF的表達(dá)臺(tái)盼藍(lán)拒染法測(cè)定細(xì)胞生長(zhǎng)曲線、MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞增殖TUNEL方法檢測(cè)凋亡率AR法檢測(cè)凋亡率AR細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)測(cè)定細(xì)胞的黏附及遷移能力TRANSWELL法檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力。結(jié)果SIRNA12組VEGF蛋白表達(dá)水平明顯低于空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組生長(zhǎng)曲線表明與空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組相比SIRNA12組ACHN細(xì)胞的生長(zhǎng)明顯減慢。在24H、48H、72HSIRNA1組的增殖抑制率分別為189、327、403和SIRNA2組增殖抑制率分別為276、506、678均高于空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組P﹤005SIRNA1組的細(xì)胞凋亡率為10793和SIRNA2組的細(xì)胞凋亡率為173274均高于空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組P﹤005其中SIRNA2對(duì)ACHN細(xì)胞的IR、AR和VEGF蛋白表達(dá)的抑制作用均顯著高于SIRNA2組P﹤005。細(xì)胞黏附試驗(yàn)結(jié)果顯示與空白對(duì)照組相比SIRNA12組的細(xì)胞黏附數(shù)量明顯下降815±31VS405±26P﹤005815±31VS225±24P﹤005其中以SIRNA2組最為明顯劃痕試驗(yàn)表明與空白對(duì)照組相比SIRNA12組的細(xì)胞遷移數(shù)量明顯下降162±9VS81±5P﹤005162±9VS38±4P﹤005TRANSWELL試驗(yàn)結(jié)果顯示與空白對(duì)照組比較SIRNA1組和SIRNA2組腎癌細(xì)胞侵襲能力明顯下降P結(jié)論VEGF在腎細(xì)胞癌細(xì)胞中高表達(dá)且在腎細(xì)胞癌細(xì)胞株的增殖、凋亡、黏附、遷移和侵襲中發(fā)揮著重要作用化學(xué)合成的VEGFSIRNA能特異性抑制腎細(xì)胞癌ACHN細(xì)胞株中VEGF的表達(dá)抑制細(xì)胞生長(zhǎng)增殖促進(jìn)細(xì)胞凋亡可抑制腎細(xì)胞癌細(xì)胞黏附、遷移和侵襲能力。RNAI有望成為腎細(xì)胞癌靶向治療的重要手段。

簡(jiǎn)介：第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文體外胃癌間質(zhì)成纖維細(xì)胞模型的建立和生物學(xué)特性初步研究姓名張浩申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)普通外科學(xué)指導(dǎo)教師畢建威20070501

簡(jiǎn)介：山東大學(xué)碩士學(xué)位論文腫瘤相關(guān)抗原CHP2對(duì)卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響姓名靳瓊申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師孔北華20070510山東大學(xué)碩士學(xué)位論文腫瘤相關(guān)抗原CHP2對(duì)卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響研究生靳瓊導(dǎo)師孔北華中文摘要【研究背景和目的】卵巢癌是女性生殖器官常見的腫瘤之一，但其發(fā)病機(jī)制還不十分明確，腫瘤特異／相關(guān)抗原的鑒定、分離及其生物學(xué)功能的探討是當(dāng)前腫瘤研究的熱點(diǎn)方向之一。CHP2CALCINCURINHOMOLOGOUSPROTEIN2是最近從肝細(xì)胞性肝癌中篩選出的腫瘤相關(guān)抗原，可表達(dá)于某些腫瘤如肝癌、結(jié)腸癌、宮頸癌及白血病等組織細(xì)胞，而在相應(yīng)的正常組織或細(xì)胞中沒(méi)有檢測(cè)到表達(dá)，其生物學(xué)功能目前尚不清楚。本研究旨在探討CHP2在卵巢癌細(xì)胞中的表達(dá)狀況及其對(duì)卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。【方法】1、CHP2在卵巢癌組織中的表達(dá)應(yīng)用RTPCR法測(cè)定20例正常人卵巢組織和20例卵巢上皮癌組織中CHP2MRNA的表達(dá)。2、質(zhì)粒構(gòu)建與轉(zhuǎn)染構(gòu)建PEGFPN1CHP2表達(dá)載體，并通過(guò)脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染方法。將此質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入OVCAR3細(xì)胞中，并篩選出穩(wěn)定克隆。實(shí)驗(yàn)分為3組，CHP2基因轉(zhuǎn)染組OVCAR3／CHP2組、空載體轉(zhuǎn)染組OVCAR3悄CO組和空自對(duì)照組OVCAR3組。3、CHP2和NA／HEXCHANGERISOFORM1OQ艦1在OVCAR3細(xì)胞中表達(dá)的鑒定利用RTPCR技術(shù)檢測(cè)OVCIAR3細(xì)胞中CHP2和NHEL轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)。用熒光顯微鏡下觀察的方法檢測(cè)3組細(xì)胞中CHP2綠色熒光融合蛋白水平的表達(dá)。4、細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的OVCAR3／CHP2、OVCAR3／NEO和OVCAR3以相同數(shù)量接種后應(yīng)用細(xì)胞活力儀每隔124時(shí)對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)繪制生長(zhǎng)曲線。5、粘附實(shí)驗(yàn)與上述相同辦法分組及制備細(xì)胞，分別于15RAIN、30MIN60RAIN或90MIN用細(xì)胞活力儀分別計(jì)數(shù)上清中和貼附的細(xì)胞數(shù)，計(jì)算細(xì)胞粘附率。6、劃痕實(shí)驗(yàn)將細(xì)胞以相同數(shù)量接種于預(yù)先包被有FNFIBRONECTIN的6

簡(jiǎn)介：本研究擬建立體外誘導(dǎo)擴(kuò)增VΑ24NKT細(xì)胞的方法，探討特異抗原和細(xì)胞因子對(duì)擴(kuò)增的影響；其次評(píng)價(jià)擴(kuò)增的VΑ24NKT細(xì)胞的特性以及細(xì)胞因子對(duì)其特性的影響；確定VΑ24NKT細(xì)胞體外腫瘤殺傷活性以及對(duì)同種反應(yīng)性T細(xì)胞免疫應(yīng)答的抑制；初步論證VΑ24NKT細(xì)胞在人小鼠異種移植中的作用。本研究顯示ΑGALCER能刺激成人外周血或臍帶血單個(gè)核細(xì)胞中的VΑ24NKT細(xì)胞短期內(nèi)大量擴(kuò)增。外周血擴(kuò)增效果優(yōu)于臍帶血。臍帶血CD34細(xì)胞能在不含NKT細(xì)胞特異配體的細(xì)胞因子培養(yǎng)體系中誘導(dǎo)擴(kuò)增VΑ24NKT細(xì)胞，但效率相對(duì)較低。IL2和IL15是ΑGALCER刺激擴(kuò)增VΑ24NKT細(xì)胞的基礎(chǔ)細(xì)胞因子。在ΑGALCER存在時(shí)，IL2和IL15趨向于促進(jìn)CD4NKT細(xì)胞優(yōu)先擴(kuò)增。在此基礎(chǔ)上，IL12、IFNΓ促進(jìn)CD4NKT優(yōu)先擴(kuò)增，IL7則促進(jìn)CD4NKT細(xì)胞擴(kuò)增。經(jīng)ΑGALCER擴(kuò)增的VΑ24NKT細(xì)胞能在有絲分裂原刺激下出現(xiàn)體外增殖反應(yīng)；并能大量生成IL4和IFNΓ，以IFNΓ為主。IL7主要通過(guò)作用于CD4NKT細(xì)胞而促進(jìn)IL4的生成；IL12和IFN?？赡艽偈笽FNΓ的生成。這種可能效應(yīng)是通過(guò)無(wú)差異地作用于CD4和CD4細(xì)胞亞群來(lái)實(shí)現(xiàn)。VΑ24NKT細(xì)胞能有效殺傷腫瘤細(xì)胞系HL60、KGLA和RAJI，對(duì)NK細(xì)胞敏感細(xì)胞系K562無(wú)效；同時(shí)VΑ24NKT細(xì)胞能有效抑制同種反應(yīng)性T細(xì)胞免疫應(yīng)答。在人小鼠GVHD模型中，體外擴(kuò)增的VΑ24NKT細(xì)胞可能有助于抵御致死性GVHD。

簡(jiǎn)介：CXCR4SDF1Α是目前最受關(guān)注的一對(duì)趨化因子配體和受體，相關(guān)研究揭示它們參與了細(xì)胞的生長(zhǎng)、發(fā)育、分化和增殖等多種生理功能，并在多種病理過(guò)程中發(fā)揮重要作用。CXCR4SDF1Α為人們廣為熟知的生物學(xué)功能是在炎癥反應(yīng)中趨化各種炎癥細(xì)胞到損傷部位，參與了炎癥細(xì)胞的滾動(dòng)、黏附和跨內(nèi)皮遷移等一系列過(guò)程。許多研究表明，腫瘤轉(zhuǎn)移和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)有著相似的形成過(guò)程，如均涉及到細(xì)胞滾動(dòng)、黏附和跨內(nèi)皮遷移等。也有研究報(bào)道，腫瘤細(xì)胞可以限定性表達(dá)某些趨化因子或趨化因子受體，并且存在趨化因子信號(hào)途徑異常的狀態(tài)，提示趨化因子或其受體可能通過(guò)與炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)相似的機(jī)制參與了腫瘤的轉(zhuǎn)移。目前CXCR4SDF1Α參與多種腫瘤如乳腺癌、肺癌、前列腺癌的轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散已見報(bào)道。近來(lái)的還研究發(fā)現(xiàn)，在有效的免疫應(yīng)答中，SDF1Α不僅能趨化T細(xì)胞到次級(jí)淋巴器官，而且對(duì)T細(xì)胞的活化還具有協(xié)同刺激作用。NANKI研究發(fā)現(xiàn)，在風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的關(guān)節(jié)腔內(nèi)有大量的記憶性CD4T的集聚，其細(xì)胞表面CXCR4的表達(dá)水平大大提高，關(guān)節(jié)腔內(nèi)SDF1Α表達(dá)水平也大大提高，推測(cè)CXCR4SDF1Α的相互作用可能既可以聚集T細(xì)胞，而且為可T細(xì)胞活化提供一個(gè)潛在的協(xié)同刺激信號(hào)。盡管目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)CXCR4SDF1Α有多種不同的生物學(xué)功能，并且推測(cè)它在行使不同的功能時(shí)依靠不同的的信號(hào)途徑。但是這些功能的的作用機(jī)制，信號(hào)傳導(dǎo)差異以及影響因素還需要進(jìn)一步深入研究。本研究旨在通過(guò)CXCR4基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞株作為免疫原免疫小鼠研制獲得鼠抗人CXCR4單克隆抗體，并以抗人CXCR4單抗為材料研究揭示人CXCR4SDF1Α在膠質(zhì)瘤細(xì)胞上表達(dá)的生物學(xué)意義和對(duì)T細(xì)胞的協(xié)同刺激作用。一、鼠抗人CXCR4單克隆抗體的研制及生物學(xué)特性的鑒定目的研制鼠抗人CXCR4單克隆抗體，為探討人CXCR4SDF1Α的生物學(xué)功能及其機(jī)制提供必備的物質(zhì)手段。方法利用高表達(dá)人CXCR4分子的基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞株L929CXCR4為免疫原，常規(guī)免疫BALBC小鼠。采用B淋巴細(xì)胞雜交瘤融合技術(shù)研制鼠抗人CXCR4單克隆抗體，并以該基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞L929CXCR4作為陽(yáng)性篩選細(xì)胞，以轉(zhuǎn)空質(zhì)粒的對(duì)照細(xì)胞L929MOCK作為陰性篩選細(xì)胞。經(jīng)間接免疫熒光標(biāo)記和流式細(xì)胞術(shù)分析、反復(fù)篩選和多次克隆化培養(yǎng)，獲得特異分泌鼠抗人CXCR4分子單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株；采用細(xì)胞核染色體計(jì)數(shù)、IG亞型快速定性試紙法、競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抑制以及WESTERNBLOT等試驗(yàn)，對(duì)獲得的雜交瘤細(xì)胞株及單克隆抗體進(jìn)行生物學(xué)特性的鑒定；用間接免疫熒光法初步分析單抗對(duì)免疫細(xì)胞表達(dá)CXCR4的識(shí)別作用。結(jié)果成功獲得2株持續(xù)、穩(wěn)定分泌鼠抗人CXCR4單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，分別命名為6H7和7D4。核型分析顯示，雜交瘤細(xì)胞株的染色體數(shù)目在100條以上，超過(guò)小鼠B細(xì)胞和SP20細(xì)胞的染色體數(shù)，表明為融合體；經(jīng)過(guò)快速定性試紙分析顯示，2株單抗輕鏈均為Κ鏈，6H7重鏈為IGG1亞類，而7D7重鏈為IGG2A；WESTERNBLOT分析結(jié)果顯示，單抗7D4能與CXCR4分子特異性結(jié)合，形成陽(yáng)性條帶；單抗識(shí)別的抗原表位分析結(jié)果表明，單抗6H7和7D4與商品化的鼠抗人CXCR4單抗克隆號(hào)12G5識(shí)別不同的抗原表位。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果表明，單抗6H7和7D4能檢測(cè)到PBMCS亞群上CXCR4分子的表達(dá)。結(jié)論成功獲得兩株穩(wěn)定分泌特異性鼠抗人CXCR4單抗的雜交瘤細(xì)胞株，兩株單抗識(shí)別的抗原位點(diǎn)不同，與商品化單抗12G5識(shí)別的抗原位點(diǎn)也不同，是兩株新型的抗人CXCR4單克隆抗體。這兩株抗人CXCR4單抗的研制成功為探討CXCR4表達(dá)特性、CXCR4SDF1Α多種生物學(xué)功能及其機(jī)制提供必備的物質(zhì)手段。二、CXCR4SDF1Α信號(hào)促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移和增殖及其單抗阻斷作用的研究目的利用研制的CXCR4單抗，初步分析了CXCR4在多種腫瘤細(xì)胞株和膠質(zhì)瘤組織上的表達(dá)，以及探討了CXCR4SDF1Α介導(dǎo)信號(hào)在單抗阻斷和非阻斷情況下對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251體外生物物學(xué)行為的影響。方法采用間接免疫熒光標(biāo)記法分析腫瘤細(xì)胞株表面CXCR4分子的表達(dá)，用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)膠質(zhì)瘤組織中CXCR4的表達(dá)。MTT法研究了SDF1Α刺激的膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251體外增殖及單抗7D4的阻斷作用。用趨化小室分析了CXCR4SDF1Α信號(hào)對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251的體外遷移作用及單抗的阻斷作用。結(jié)果流式細(xì)胞儀分析結(jié)果，顯示大多數(shù)腫瘤細(xì)胞株上都表達(dá)CXCR4分子，尤其是造血系統(tǒng)來(lái)源的腫瘤細(xì)胞株CXCR4表達(dá)較高，而在上皮源性的腫瘤細(xì)胞株M231、MCF7和95D上表達(dá)相對(duì)偏低。免疫組化的結(jié)果表明，膠質(zhì)瘤組織上檢測(cè)到CXCR4的表達(dá)。增殖與抗體阻斷實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，SDF1Α能夠刺激U251體外增殖，并且有濃度依賴性；CXCR4特異性的單抗7D4能阻斷SDF1Α的這一激發(fā)作用。遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示單抗7D4也能阻斷SDF1Α誘導(dǎo)的U251細(xì)胞的體外遷移作用，表明研制的抗人CXCR4單抗7D4具有阻斷作用。結(jié)論本研究分析并證實(shí)了CXCR4在腫瘤細(xì)胞株表面的廣泛表達(dá)和在膠質(zhì)瘤組織上表達(dá)；CXCR4SDF1Α信號(hào)能夠作用于膠質(zhì)瘤細(xì)胞株的體外生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，推測(cè)該信號(hào)與膠質(zhì)瘤侵襲性生長(zhǎng)有關(guān)。三、CXCR4SDF1Α信號(hào)對(duì)T細(xì)胞協(xié)同刺激及其單抗阻斷作用的研究目的利用所獲得的抗人CXCR4單克隆抗體7D4和重組人SDF1Α，探討CXCR4SDF1Α相互作用對(duì)T細(xì)胞協(xié)同刺激作用。方法采用熒光單標(biāo)或雙標(biāo)記法通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分析DC誘導(dǎo)成熟過(guò)程中細(xì)胞表面及PHA活化的CD4、CD8T淋巴細(xì)胞上的CXCR4的表達(dá)；用激發(fā)型抗人CD3單抗包板，重組人SDF1Α聯(lián)合或不聯(lián)合抗人CD28單抗處理，通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)、MTT法和ELISA法分別測(cè)定了SDF1Α對(duì)T淋巴細(xì)胞活化、增殖及細(xì)胞因子分泌的作用；在此基礎(chǔ)上，用激發(fā)型抗人CD3單抗包板，選用特定的SDF1Α濃度和CD28單抗聯(lián)合處理，通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)、MTT法和ELISA法分別測(cè)定單抗7D4對(duì)T淋巴細(xì)胞活化、增殖及細(xì)胞因子分泌的影響；結(jié)果PHA活化條件下，CD4T細(xì)胞上CXCR4呈上調(diào)性表達(dá)，隨后表達(dá)有所下降。而在CD8T細(xì)胞上沒(méi)有明顯的變化；CXCR4分子在單核細(xì)胞誘導(dǎo)至MDC過(guò)程中，呈現(xiàn)逐步上調(diào)性表達(dá)。SDF1Α單獨(dú)作用時(shí)，并不能明顯促進(jìn)T細(xì)胞的體外增殖、活化和上調(diào)細(xì)胞因子的分泌，而與CD28信號(hào)協(xié)同作用時(shí)，SDF1Α則能促進(jìn)T細(xì)胞的增殖和細(xì)胞因子的分泌，并且有一定的劑量依賴性。但是，對(duì)T細(xì)胞上CD25和CD69的表達(dá)無(wú)顯著影響。單抗7D4可阻斷SDF1Α對(duì)T細(xì)胞的協(xié)同刺激作用，并呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。而且單抗7D4能不同程度地下調(diào)CD4T細(xì)胞上CD25和CD69的表達(dá)，但對(duì)CD8T上的CD25和CD69影響并不明顯。結(jié)論以研制獲得的抗人CXCR4單抗7D4和重組人SDF1Α為手段，揭示了CXCR4在免疫細(xì)胞上的調(diào)節(jié)性表達(dá)。同時(shí)，CXCR4SDF1Α信號(hào)在與CD28信號(hào)共同作用時(shí)，對(duì)T細(xì)胞的活化具有協(xié)同刺激作用，單抗7D4能抑制SDF1Α的協(xié)同刺激作用。綜上所述，本研究成功獲得了兩株穩(wěn)定分泌特異性鼠抗人CXCR4單抗的雜交瘤細(xì)胞株，進(jìn)一步對(duì)單抗的生物學(xué)特性進(jìn)行了鑒定。在此基礎(chǔ)上分析了PBMCS亞群上CXCR4的表達(dá)譜。通過(guò)對(duì)腫瘤表面CXCR4表達(dá)的檢測(cè)和在膠質(zhì)瘤細(xì)胞株上的功能分析，證實(shí)了CXCR4是腫瘤組織中廣泛表達(dá)的分子，并且對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移都有一定的作用。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)CXCR4SDF1Α信號(hào)在與CD28聯(lián)合作用時(shí)，對(duì)T細(xì)胞的活化具有一定的協(xié)同刺激作用，研制的抗體對(duì)SDF1Α的協(xié)同刺激作用呈現(xiàn)出阻斷效應(yīng)。

簡(jiǎn)介：廣西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文腹腔鏡CO氣腹對(duì)宮頸癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響姓名林飛申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)腫瘤麻醉學(xué)指導(dǎo)教師潘靈輝20080101廣西醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明秉承學(xué)校嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶W(xué)風(fēng)與優(yōu)良的科學(xué)道德，本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，不包含本人或他人已申請(qǐng)學(xué)位或其他用途使用過(guò)的成果。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示了致謝。申請(qǐng)學(xué)位論文與資料若有不實(shí)之處，本人承擔(dān)一切責(zé)任。論文作者簽名研伊廣西醫(yī)科大學(xué)保護(hù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)說(shuō)明本人完全了解廣西醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保護(hù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即研究生在校攻讀學(xué)位期間，博士后工作人員、人才小高地工作人員在校工作期間，論文工作的知識(shí)產(chǎn)權(quán)單位屬?gòu)V西醫(yī)科大學(xué)。本人保證在校期間和離校后，發(fā)表或使用論文工作成果時(shí)署名第一作者單位均為廣西醫(yī)科大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保留論文，允許論文被查閱和借閱；學(xué)?？梢怨颊撐牡娜炕虿糠謨?nèi)容，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文。論文作者簽名幸乖匹指導(dǎo)教師簽名弋靄P諺曳嗍洲_1＼

簡(jiǎn)介：分類號(hào)密級(jí)國(guó)際十進(jìn)分類號(hào)（UDC）第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)位論文低堿性磷酸酯酶癥患兒乳牙牙周膜干細(xì)胞低堿性磷酸酯酶癥患兒乳牙牙周膜干細(xì)胞生物學(xué)行為的實(shí)驗(yàn)研究生物學(xué)行為的實(shí)驗(yàn)研究（題名和副題名）冀堃（作者姓名）指導(dǎo)教師姓名楊富生教授金巖教授指導(dǎo)教師單位第四軍醫(yī)大學(xué)口腔醫(yī)院兒童口腔科第四軍醫(yī)大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院組織病理學(xué)教研室申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)名稱口腔臨床醫(yī)學(xué)（兒牙）論文提交日期201004答辯日期201005論文起止時(shí)間2008年06月至2010年04月學(xué)位授予單位第四軍醫(yī)大學(xué)低堿性磷酸酯酶癥患兒乳牙牙周膜干細(xì)胞低堿性磷酸酯酶癥患兒乳牙牙周膜干細(xì)胞生物學(xué)行為的實(shí)驗(yàn)研究生物學(xué)行為的實(shí)驗(yàn)研究研究生冀堃學(xué)科專業(yè)口腔臨床醫(yī)學(xué)（兒童口腔醫(yī)學(xué)）所在單位第四軍醫(yī)大學(xué)口腔醫(yī)院兒童口腔科導(dǎo)師楊富生教授（主任醫(yī)師）金巖教授（主任醫(yī)師）輔導(dǎo)教師軒昆副教授（副主任醫(yī)師）資助基金項(xiàng)目資助基金項(xiàng)目1國(guó)家自然科學(xué)基金（NO30600709）2省自然科學(xué)基金社發(fā)公關(guān)項(xiàng)目2006K11G1（2）關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞低堿性磷酸酯酶癥；堿性磷酸酯酶；乳牙牙周膜干細(xì)胞中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)2010年5月

簡(jiǎn)介：分類號(hào)R322密級(jí)單位代碼10422學(xué)號(hào)200712727◎厶茹辦署碩士學(xué)位論文HANDONGUNIVERSITYMASTERSTHESIS論文題目PTEN表達(dá)下調(diào)對(duì)乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)性狀的影響THEINFLUENCEOFPTENDECENTONBIOLOGICALABILITY作專導(dǎo)OFBREASTCANCERCELL合作導(dǎo)師2010年5月20日山東大學(xué)碩士學(xué)位論文目錄中文摘要?????????????????????????????3英文摘要?????????????????????????????5符號(hào)說(shuō)明?????????????????????????????7論文正文前言?????????????????????????????8日Ⅱ舌．．．．．．．．．．．．．．?．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8實(shí)驗(yàn)材料??????????????????????????1L實(shí)驗(yàn)方法??????????????????????????15實(shí)驗(yàn)結(jié)果?????????????????????????19討論?????????????????????????????22結(jié)論?????????????????????????????25參考文獻(xiàn)???????????????????????????26IJF；|圖???????????????????????????????3L綜J丕???????????????????????????．34致{射???????????????????????????????51發(fā)表論文????????????????????????52

簡(jiǎn)介：Z793269學(xué)校代碼10023學(xué)號(hào)200201005抗髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白抗體生物學(xué)特性研究姓名張遙北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)2002級(jí)導(dǎo)師崔麗英教授指導(dǎo)老師徐雁副教授北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)院神經(jīng)內(nèi)科完成日期二零一零年六月北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)畢業(yè)論文縮寫英文縮略詞及注釋英文全稱中文全稱APCCMSEAEEDSSELISAHCLCAMLLIND臌譬1MBPMHC1IAMTIGENPRESEMINGCELLCL舔SICMULTIPLESCLEROSISEXPERIMENTALAUTOIINMUNEENCEPHALONLYELITISEXPAILDEDDISABIL時(shí)STANLSSCALEEN巧MELINKEDIMM蚰OSORBENTASSAYHEALTHYCON仃OLINTERCELLULARADHESIONMOLECULEINTE訂EUKIILILLFLAI砌ATODRNEUROLOGICALDISEASESINTERFERONYMYELILLBASICPROTEINM勾ORHISTOCOMPATIBILI鑼COMPLEXCLASSILMOGMYELINOLI90DENDROCYTEGLYCOPROTEILL抗原呈遞細(xì)胞經(jīng)典型多發(fā)性硬化實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎擴(kuò)展殘疾狀態(tài)評(píng)分酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)健康對(duì)照細(xì)胞間粘附分子白介素炎性神經(jīng)系統(tǒng)疾病T干擾素髓鞘堿性蛋白主要組織相容性復(fù)合體髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白MSMULTIPLESCLEROSIS多發(fā)性硬化N1VIONEUROMYELITISOPTICA視神經(jīng)脊髓炎01心M0CLLERNONI11NAMMATO巧NEWOLOGICALDISEASES其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病OSMSOPTICOSPIMLMULTIPLESCLEROSISOSPOLIGODENDROCYTESPECIFICPROTEIILPLPP10TEOLIPIDPMTEINVCAM、協(xié)CULARCELLADHESIONMOLECULEVEPⅥSUALEVOKEDPOTENTIAL2視神經(jīng)脊髓型多發(fā)性硬化少突膠質(zhì)細(xì)胞特異性蛋白蛋白脂質(zhì)蛋白血管細(xì)胞粘附分子視覺(jué)誘發(fā)電位

簡(jiǎn)介：分類號(hào)密級(jí)國(guó)際十進(jìn)分類號(hào)（UDC）第四軍醫(yī)大學(xué)第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)位論文異氟醚對(duì)人口腔癌細(xì)胞系生物學(xué)特性異氟醚對(duì)人口腔癌細(xì)胞系生物學(xué)特性影響的實(shí)驗(yàn)研究影響的實(shí)驗(yàn)研究（題名和副題名）任軍（作者姓名）指導(dǎo)教師姓名徐禮鮮教授（主任醫(yī)師）指導(dǎo)教師單位第四軍醫(yī)大學(xué)第三附屬醫(yī)院麻醉科申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)名稱麻醉學(xué)論文提交日期201104答辯日期201105論文起止時(shí)間2009年03月至2011年04月學(xué)位授予單位第四軍醫(yī)大學(xué)異氟醚對(duì)人口腔癌細(xì)胞系生物學(xué)特性異氟醚對(duì)人口腔癌細(xì)胞系生物學(xué)特性影響的實(shí)驗(yàn)研究影響的實(shí)驗(yàn)研究研究生生任軍學(xué)科專業(yè)麻醉學(xué)所在單位第四軍醫(yī)大學(xué)第三附屬醫(yī)院麻醉科導(dǎo)師徐禮鮮教授（主任醫(yī)師）輔導(dǎo)教師張惠副教授副主任醫(yī)師資助基金項(xiàng)目資助基金項(xiàng)目國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81070997）關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞吸入麻醉藥；異氟醚；細(xì)胞增殖；凋亡；TCA8113細(xì)胞；HSC2細(xì)胞；侵襲；流式細(xì)胞術(shù)；蛋白質(zhì)印跡中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)2011年4月

簡(jiǎn)介：目的觀察內(nèi)皮祖細(xì)胞EPC在不同濃度血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子VEGF作用下的生物學(xué)特性探討VEGF對(duì)EPC生物學(xué)特性的影響。方法無(wú)菌條件下分離脛骨和股骨M199培養(yǎng)液沖洗骨髓腔收集沖洗液充分吹打混勻加入裝有密度梯度為1077GCM3的淋巴細(xì)胞分離液的離心管沖洗液與分離液的體積比為2∶1。20℃下2000RMINFICOLLHISTOPAQUE梯度離心沉淀20MIN。吸取中間乳白色云霧狀單個(gè)核細(xì)胞層PBS沖洗細(xì)胞沉淀。以1106ML的密度接種到100ML培養(yǎng)瓶中。含20％胎牛血清的M199培養(yǎng)基37℃、5％CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。48H后重新接種未貼壁細(xì)胞。第3天半量換液第5天全量換液。細(xì)胞達(dá)到80％以上融合時(shí)用025％胰酶含1％EDTA消化細(xì)胞。在第7天運(yùn)用流式細(xì)胞儀行細(xì)胞表型CD133、CD34鑒定。收集貼壁細(xì)胞并計(jì)數(shù)將等量EPC懸液200ΜL接種到96孔培養(yǎng)板繼續(xù)培養(yǎng)2D用不含胎牛血清的M199培養(yǎng)液培養(yǎng)24H后換含有不同濃度0、10、50NGMLVEGF的培養(yǎng)液每個(gè)濃度組重復(fù)5孔培養(yǎng)24H后每孔加MTT5GL20ΜL繼續(xù)培養(yǎng)4H后吸棄上清液再加入DMSO150ΜL孔水平振蕩10MIN后置于酶標(biāo)儀波長(zhǎng)560NM處取5個(gè)孔吸光值OPTICALDENSITYOD的平均值得到最適濃度。以最適濃度按上述方法培養(yǎng)以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)、OD值為縱坐標(biāo)繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。應(yīng)用24孔的TRANSWELL孔徑8ΜM小室行體外遷移實(shí)驗(yàn)。上室為200ΜLEPC1104ML懸液下室為含不同濃度0、10、50NGMLVEGF的M199培養(yǎng)液。37℃下培養(yǎng)24H將上室附著細(xì)胞用濕棉簽擦去固定GIEMSA染色脫色拍照200實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。倒置顯微鏡計(jì)數(shù)遷移細(xì)胞。體外血管生成能力檢測(cè)應(yīng)用纖維蛋白凝膠行體外血管生成實(shí)驗(yàn)。96孔培養(yǎng)板每孔依次加30ΜL人纖維蛋白原與20ΜL凝血酶晃勻37℃30MIN成凝膠加入5103細(xì)胞懸液培養(yǎng)過(guò)夜去除培養(yǎng)液依次加30ΜL人纖維蛋白原與20ΜL凝血酶晃勻加100ΜL培養(yǎng)液24H。顯微鏡觀察血管生成隨機(jī)選取3個(gè)視野200計(jì)數(shù)血管數(shù)目。原代細(xì)胞培養(yǎng)至第4天時(shí)換用含不同濃度10和50NGMLVEGF的M199培養(yǎng)液培養(yǎng)1D后運(yùn)用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。將貼壁細(xì)胞用胰酶消化后PBS反復(fù)吹打制成單細(xì)胞懸液2000RMIN離心5MIN將細(xì)胞置于50ΜLPBS中制成單細(xì)胞懸液。加入CD31直標(biāo)抗體4℃孵育60MIN。PBS洗滌重懸后立即在避光條件下進(jìn)行流式細(xì)胞檢測(cè)計(jì)數(shù)1104個(gè)細(xì)胞。同型對(duì)照一抗為PBS其余操作同上。統(tǒng)計(jì)CD31細(xì)胞的百分率應(yīng)用WINMDI29軟件進(jìn)行分析。結(jié)果培養(yǎng)7D的細(xì)胞CD133和CD34陽(yáng)性率分別為6944％和810596。MTT實(shí)驗(yàn)顯示10NGML組細(xì)胞的OD值明顯大于0NGML組和50NGML組0NGML組的OD值明顯大于50NGML組P＜005遷移實(shí)驗(yàn)、體外血管形成實(shí)驗(yàn)及誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)顯示50NGML組和10NGML組較0NGML組更能促進(jìn)EPC的遷移、體外血管形成及誘導(dǎo)分化且50NGML組強(qiáng)于10NGML組P＜005。結(jié)論VEGF能夠提高EPC遷移能力、體外血管形成能力及促進(jìn)誘導(dǎo)分化且隨著VEGF濃度的升高而增強(qiáng)。VEGF能夠提高EPC增殖能力但隨著濃度的升高而減弱。

簡(jiǎn)介：分類號(hào)密級(jí)國(guó)際十進(jìn)分類號(hào)（UDC）第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)位論文惡性骨腫瘤側(cè)群（SP）細(xì)胞的分離，鑒定及生物學(xué)特性研究（題名和副題名）楊旻（作者姓名）指導(dǎo)教師姓名羅卓荊教授（主任醫(yī)師）指導(dǎo)教師單位第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院骨科申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)名稱外科學(xué)（骨外）論文提交日期201004答辯日期201005論文起止時(shí)間2007年9月至2010年3月學(xué)位授予單位第四軍醫(yī)大學(xué)惡性骨腫瘤側(cè)群（惡性骨腫瘤側(cè)群（SP）細(xì)胞的分離，鑒定）細(xì)胞的分離，鑒定及生物學(xué)特性研究及生物學(xué)特性研究研究生楊旻學(xué)科專業(yè)外科學(xué)（骨外）所在單位第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院骨科導(dǎo)師羅卓荊教授（主任醫(yī)師）資助基金項(xiàng)目資助基金項(xiàng)目973課題2009CB5217052009CB521705關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞惡性骨腫瘤；腫瘤干細(xì)胞；SP細(xì)胞中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)2010年5月

簡(jiǎn)介：共焦熒光顯微術(shù)和全內(nèi)反射熒光顯微術(shù)在分子生物學(xué)、分子化學(xué)及納米材料等領(lǐng)域受到了廣泛關(guān)注。本文就這兩種技術(shù)在生物活體細(xì)胞中的應(yīng)用進(jìn)行了探索。首先，利用激光掃描共焦顯微鏡，將一種新的汞離子探針運(yùn)用于對(duì)活體細(xì)胞中微量汞離子的檢測(cè)。當(dāng)探針在水溶液中與汞離子發(fā)生反應(yīng)以后，它的熒光光譜將會(huì)產(chǎn)生約50NM的藍(lán)移。這個(gè)探針具有很高的靈敏度和離子選擇性，并且不會(huì)受到PH的影響。在水溶液中，無(wú)論是單光子或雙光子激發(fā)，探針的探測(cè)極限可以達(dá)到PPB水平。用這種探針探測(cè)纖細(xì)裸藻細(xì)胞EUGLENAGRACILIS277中的汞離子時(shí)，可以觀察到熒光峰會(huì)有大約3235NM的藍(lán)移，這個(gè)位移較溶液中要小，可能是細(xì)胞中復(fù)雜的環(huán)境所帶來(lái)的的溶劑效應(yīng)引起的。然而，在細(xì)胞中當(dāng)探針或汞離子濃度很低時(shí)，由于熒光信號(hào)較弱，它的單光子光譜會(huì)受到細(xì)胞的自體熒光的干擾。但是因?yàn)樘结樀碾p光子吸收截面比自體熒光物質(zhì)的高很多，所以其雙光子光譜仍然具有很好的信噪比。另一方面，利用全內(nèi)反射顯微鏡在單分子條件下，研究中性PH溶液中的牛血清白蛋白BSA在石英表面的吸附作用。從結(jié)果可以看出993％的BSA分子是沒(méi)有粘性的，即使能夠吸附，也會(huì)很快解吸附。相反另外07％的BSA具有很大的粘性。這種異質(zhì)性是集合平均無(wú)法測(cè)量到的。我們根據(jù)單分子的測(cè)量結(jié)果，建立了一種新的BSA表面吸附的動(dòng)力學(xué)模型。為了通過(guò)調(diào)節(jié)BSA的環(huán)境條件來(lái)有效地控制其在石英表面的吸附，因而研究了BSA分子在不同PH值下的狀態(tài)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在不同PH值下，BSA分子的吸附會(huì)發(fā)生變化，所以可以通過(guò)調(diào)節(jié)PH值來(lái)改變其吸附狀態(tài)。但是這些改變并不是很明顯，因此我們又利用溶劑效應(yīng)來(lái)更有效的控制其吸附。在乙醇溶劑中，常規(guī)BSA分子會(huì)大量的轉(zhuǎn)變?yōu)檎承苑肿?。因此，只要能夠控制溶液中乙醇的濃度，我們就可以很有效的控制BSA分子在石英表面的吸附。

簡(jiǎn)介：肝功能衰竭是各種嚴(yán)重肝病的終末期表現(xiàn)，是威脅人類健康的重要原因之一，雖然原位肝移植是目前治療肝細(xì)胞衰竭的最有效手段，但卻受到捐獻(xiàn)器官短缺和手術(shù)費(fèi)用較高的限制，而建立有效的人工肝治療，一方面可以為尋求合適的肝移植供體提供時(shí)間，另一方面可以為肝細(xì)胞再生爭(zhēng)取時(shí)間。目前各種物理型人工肝輔助治療系統(tǒng)雖然有不錯(cuò)的療效，但仍無(wú)法替代肝臟的各種復(fù)雜生物學(xué)功能。隨著細(xì)胞生物學(xué)和組織工程學(xué)的發(fā)展，體外生物人工肝支持系統(tǒng)EXTRACPEALBIOARTIFICIALLIVERSUPPTSYSTEM，EBLSS在肝功能衰竭治療方面的應(yīng)用，正日益受到人們的關(guān)注。原代人肝細(xì)胞無(wú)疑是體外生物人工肝支持系統(tǒng)的治療最為理想的肝細(xì)胞來(lái)源，但原代人肝細(xì)胞，增殖傳代極為困難；動(dòng)物源性肝細(xì)胞雖可大量獲得，卻有著極大的風(fēng)險(xiǎn)，包括使病人出現(xiàn)人畜共患疾病如使用豬肝細(xì)胞治療有潛在的感染豬內(nèi)生逆轉(zhuǎn)錄病毒的可能以及異種蛋白進(jìn)入病人體內(nèi)導(dǎo)致免疫反應(yīng)等風(fēng)險(xiǎn)，因此合適的肝細(xì)胞來(lái)源問(wèn)題仍是制約生物人工肝發(fā)展的一個(gè)瓶頸問(wèn)題。目前，通過(guò)永生化的方法設(shè)計(jì)建立能無(wú)限增殖并具有良好生物代謝功能的人源性肝細(xì)胞系是解決肝細(xì)胞來(lái)源問(wèn)題的主要研究方向之一。本課題通過(guò)將HTERT基因?qū)氤扇烁渭?xì)胞HL7702，構(gòu)建了永生化成人肝細(xì)胞系PLNHL7702，并且對(duì)導(dǎo)入HTERT基因前后兩種細(xì)胞的形態(tài)、增殖狀況、生物學(xué)功能進(jìn)行了比較和研究，對(duì)新建永生化成人肝細(xì)胞系PLNHL7702致瘤性問(wèn)題進(jìn)行了初步研究，以期為進(jìn)一步研究解決生物人工肝細(xì)胞來(lái)源問(wèn)題奠定試驗(yàn)基礎(chǔ)。研究將攜帶有HTERT基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體導(dǎo)入成人肝細(xì)胞HL7702，通過(guò)RTPCR，WESTERNBLOT，和IEA間接免疫熒光法在基因和蛋白水平對(duì)所建細(xì)胞系PLNHL7702進(jìn)行了鑒定；在倒置相差顯微鏡和透射電鏡下觀察并比較了基因?qū)肭昂蠹?xì)胞的形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)；采用MTT染色法檢測(cè)在基因?qū)肭昂蟾渭?xì)胞的增殖能力變化，連續(xù)觀察并描繪生長(zhǎng)曲線；采用RTPCR法檢測(cè)基因?qū)肭昂蟾渭?xì)胞功能基因表達(dá)情況；采用WESTERNBLOT檢測(cè)基因?qū)肭昂蟾渭?xì)胞細(xì)胞色素P450的表達(dá)；并通過(guò)軟瓊脂實(shí)驗(yàn)、裸鼠致瘤性實(shí)驗(yàn)對(duì)所建細(xì)胞系PLNHL7702的致瘤性進(jìn)行了初步分析。結(jié)果1RTPCR、WESTERNBOLT和IEA可檢測(cè)到HTERT基因在肝細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，可檢測(cè)到相關(guān)蛋白；2光鏡和電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)未發(fā)現(xiàn)基因?qū)肭昂蟾渭?xì)胞的差異；3細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)表明細(xì)胞在導(dǎo)入基因后增殖能力有了明顯的提高；4肝細(xì)胞功能基因的轉(zhuǎn)錄在轉(zhuǎn)染前后均可檢測(cè)到；5基因?qū)肭昂蠹?xì)胞上清的檢測(cè)表明肝細(xì)胞的一般生化功能未受影響；6基因?qū)肭昂蟾渭?xì)胞通過(guò)WESTERNBOLT均可檢測(cè)到細(xì)胞色素P450的表達(dá)；7。軟瓊脂實(shí)驗(yàn)、裸鼠致瘤性實(shí)驗(yàn)未提示PLNHL7702有致瘤性表現(xiàn)。討論本研究成功建立永生化成人肝細(xì)胞系PLNHL7702，其體外增殖能力較原細(xì)胞系HL7702明顯提高，在形態(tài)、結(jié)構(gòu)及生物學(xué)功能方面與基因?qū)肭盁o(wú)明顯差異，并可檢測(cè)到細(xì)胞色素P450的表達(dá)，初步致瘤性分析未發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有致瘤性，提示該細(xì)胞系進(jìn)一步研究后有可能為生物人工肝的治療提供一種安全有效的肝細(xì)胞來(lái)源。