簡(jiǎn)介：I愀獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作。除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。與我一N丁FP的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。本人承擔(dān)本聲明的法律責(zé)任。糊文作糍蘚婦級(jí)隗如7年R月Ⅵ日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)聲明本人完全了解第二軍醫(yī)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，第二軍醫(yī)大學(xué)有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)第二軍醫(yī)大學(xué)可以將學(xué)位論文全文或部分內(nèi)容編入中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)、中國(guó)優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)等數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索?？梢圆捎糜坝?、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書學(xué)位論文作者簽名琿晶坂導(dǎo)師簽名易櫛瓠日期少J7年J月即日眺叼年，月≯日

簡(jiǎn)介：授予單位代碼授予單位代碼10089學(xué)號(hào)或申請(qǐng)?zhí)枌W(xué)號(hào)或申請(qǐng)?zhí)?4077中國(guó)圖書分類號(hào)中國(guó)圖書分類號(hào)R39212碩士學(xué)碩士學(xué)位論文位論文科學(xué)學(xué)位腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因MTA2在膀胱癌中的表達(dá)及對(duì)膀胱癌在膀胱癌中的表達(dá)及對(duì)膀胱癌細(xì)胞生物學(xué)特性的研究細(xì)胞生物學(xué)特性的研究學(xué)位申請(qǐng)人學(xué)位申請(qǐng)人彭克楠彭克楠導(dǎo)師師單保恩單保恩教授教授趙連梅趙連梅助研助研專業(yè)業(yè)免疫學(xué)免疫學(xué)二級(jí)學(xué)院院河北醫(yī)科大學(xué)河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院第四醫(yī)院2016年3月中國(guó)圖書分類號(hào)中國(guó)圖書分類號(hào)R39212中國(guó)圖書分類號(hào)中國(guó)圖書分類號(hào)R39212中國(guó)圖書分類號(hào)中國(guó)圖書分類號(hào)R39212中國(guó)圖書分類號(hào)中國(guó)圖書分類號(hào)R39212中國(guó)圖書分類號(hào)中國(guó)圖書分類號(hào)R39212中國(guó)圖書分類號(hào)中國(guó)圖書分類號(hào)R39212中國(guó)圖書分類號(hào)中國(guó)圖書分類號(hào)R39212中國(guó)圖書分類號(hào)中國(guó)圖書分類號(hào)R39212HEBEIMEDICALUNIVERSITYHEBEIMEDICALUNIVERSITY目錄中文摘要1英文摘要3英文縮寫5研究論文腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因MTA2在膀胱癌中的表達(dá)以及對(duì)膀胱癌細(xì)胞生物學(xué)特性的研究前言6材料與方法8結(jié)果22附圖26附表35討論41結(jié)論43參考文獻(xiàn)44綜述腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因MTA2在腫瘤中的研究進(jìn)展46致謝55個(gè)人簡(jiǎn)歷56

簡(jiǎn)介：舢帥咖ⅢⅧ川洲0㈣Ⅲ川刪Y3333307學(xué)校代碼LQ2墨§分類號(hào)B223密級(jí)公玨UDC蠡§QQ量學(xué)號(hào)12坌51互隸．初大◆誓博士學(xué)位論文重組慢病毒介導(dǎo)的MCM7基因沉默對(duì)白血病及肝癌細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)的影響研究生姓名一旦亮一．導(dǎo)師姓名陵寶寶申請(qǐng)學(xué)位類別醫(yī)堂墟±一級(jí)學(xué)科名稱直瘞醫(yī)堂二級(jí)學(xué)科名稱囪型堂答辯委員會(huì)主席魅釜生學(xué)位授予單位丕直太堂論文答辯日期2Q3Z生§目】Z目學(xué)位授予日期評(píng)閱人2017年5月20日EFFECTSOFLENTIVIRUSMEDIATEDKNOCKDOWNOFMCM7GENEONHUMANIEUKEMIACEILSANDHEPATOCE¨ULARCARCINOMACEIISADISSERTATIONSUBMITTEDTOSOULHEASTUNIVERSITYBYTIANLIANGSUPEⅣISEDBYCHENBA0一ANSCH00IOFMEDICAISCIENCESOUTHEASTUNIVERSITYMAY2017

簡(jiǎn)介：南昌大學(xué)碩士學(xué)位論文高磷對(duì)乳鼠心肌細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)及聚磷菌的除磷作用姓名陳燕申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)營(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)指導(dǎo)教師曹郁生20110609摘要量、骨橋蛋白OSTEOPONTINOPN含量及表達(dá)量情況的影響。高磷對(duì)乳鼠心肌細(xì)胞有著增殖抑制作用，與對(duì)照組相比，0D和第2D時(shí)各濃度之間對(duì)乳鼠心肌細(xì)胞增殖抑制無顯著差異PO05，從第4D起，所有高磷組細(xì)胞增殖抑制率均高于對(duì)照組PO05。鈣沉積影響結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，三個(gè)高磷組鈣沉積量均明顯高于對(duì)照組P005，且鈣沉積含量與作用時(shí)間及濃度有密切關(guān)系。OPN含量及表達(dá)量含量結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，三個(gè)高磷組OPN含量及表達(dá)量顯著升高PO05，且隨著時(shí)間和濃度的增加而明顯增加。3根據(jù)C弱P嬲E3活性和DNALADDER方法評(píng)價(jià)了高磷對(duì)乳鼠心肌細(xì)胞凋亡的作用。高磷組乳鼠心肌細(xì)胞2D后凋亡蛋白酶CASPASE3含量增加，隨著濃度、時(shí)間的增加而加增加，CASPASE3含量由對(duì)照組1MMOL／L磷的0034PMOL／L上升至9MMOL／L磷的0344PMOL／L。在細(xì)胞培養(yǎng)后期，即培養(yǎng)6D后發(fā)現(xiàn)，高磷組6MMOL／L，9MMOL／L培養(yǎng)的乳鼠心肌細(xì)胞產(chǎn)生凋亡片段。4從污水中分離到一株高效聚磷茵J12，經(jīng)生理生化以及16SRDNA鑒定為節(jié)桿菌屬的一個(gè)種ARTHROBACTERSP，以初始磷濃度為20MG／L的合成廢水，考查了溫度，PH值，接種量，以及微量元素對(duì)J12菌除磷特性的影響。結(jié)果表明當(dāng)培養(yǎng)溫度32℃，PH7，接種量LO％，種齡為16H，添加一定微量元素時(shí)，培養(yǎng)10H后，合成廢水中總磷由20MG／L降至O1MG／L，污水中磷的去除率達(dá)到995％。關(guān)鍵詞高磷；乳鼠心肌細(xì)胞；骨橋蛋白；鈣沉積；凋亡；聚磷菌除磷作用

簡(jiǎn)介：ATHESISSUBMITTEDTOZHENGZHOUUNIVERSITYFORTHEDEGREEOFMASTERTHEEXPRESSIONOFTHROMBOSPONDIN1INLUNGADENOCARCINOMAANDTHEEFFECTOFITSREGULATIONONTHEBIOLOGICALBEHAVIOROFLUNGADENOCARCINOMACELLSPHDCANDIDATEGAOXIANZHENGSUPERVISORPROF．ZHANGMINGZHIDEPARTMENTOFONCOLOGYTHEFIRSTAFFILIATEDHOSPITALOFZHENGZHOUUNIVERSTIYMARCH2017¨7一㈣6一眥0一叫7一蚴3一洲3一㈣3一MY摘要THBSL在肺腺癌中的表達(dá)及其調(diào)節(jié)對(duì)肺腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響博士研究生高獻(xiàn)爭(zhēng)導(dǎo)師張明智教授鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤科河南鄭州450052摘要肺癌是全球范圍內(nèi)發(fā)病率和死亡率處于首要地位的的惡性腫瘤，2012年公布的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，全球大約每年有180萬新增肺癌病例，占腫瘤發(fā)生總?cè)藬?shù)的近13％，它是男性中最常見的癌癥，在女性中位居第二。肺癌具有進(jìn)展快、侵襲力高及死亡率高等特點(diǎn)，已經(jīng)成為死亡人數(shù)最多的癌癥類型。肺癌主要分為小細(xì)胞癌SMALLCELLCAD_CER，SCLC和非小細(xì)胞癌NONSMALLCELLCANCER，NSCLC，其中后者約占所有肺癌類型的80％。NSCLC貝J主要包括了腺癌、鱗癌、大細(xì)胞癌等多種類型，腺癌則是主要類型。目前外科手術(shù)切除癌組織是早期非小細(xì)胞肺癌的首選治療方法，但多數(shù)患者確診時(shí)己處于晚期或進(jìn)展期，因此只有不到50％的患者能夠進(jìn)行手術(shù)治療。多數(shù)患者則要依賴于化療、放化療和分子靶向治療等綜合治療。尤其是分子靶向治療的應(yīng)用與研究已經(jīng)成為現(xiàn)階段醫(yī)學(xué)界的一個(gè)方向，越來越多的研究集中在各種肺癌的分子研究中。在過去10年中，由于一些新藥物和基于不同組織學(xué)亞型和驅(qū)動(dòng)突變的個(gè)體化治療方法的引入，使得部分肺癌患者的生存質(zhì)量和總生存期大大改善。針對(duì)表皮生長(zhǎng)因子受體基因EPIDERMALGROWTHFACTORRECEPTOR，EGFR和間變性淋巴瘤激酶基因ANAPLASTICLYMPHOMAKINASE，ALK等的基因靶向治療改變YNSCLC的診斷與治療。但部分患者不存在上述基因相關(guān)的改變，盡管經(jīng)過努力并積極進(jìn)行治療，預(yù)后仍然很差。因此，更多的分子驅(qū)動(dòng)基因仍有待研究。血小板凝血酶蛋自家族THROMBOSPONDIN，THBS是最初發(fā)現(xiàn)于血小板中的糖蛋白，但也可以由許多正常和轉(zhuǎn)化的細(xì)胞合成和分泌。THBSL

簡(jiǎn)介：分類號(hào)R73963學(xué)號(hào)2014110970重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文（學(xué)術(shù)學(xué)位）（學(xué)術(shù)學(xué)位）論文題目干擾干擾胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白相關(guān)蛋胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白1的表達(dá)對(duì)鼻的表達(dá)對(duì)鼻咽癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響咽癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響作者姓名羅玉杰羅玉杰一級(jí)學(xué)科名稱臨床醫(yī)學(xué)臨床醫(yī)學(xué)二級(jí)學(xué)科名稱耳鼻咽喉科學(xué)方向耳鼻咽喉科學(xué)方向論文答辯年月20172017年5月指導(dǎo)教師姓名（職稱、單位名稱）江洪江洪教授教授重慶醫(yī)科大學(xué)附屬永川醫(yī)院重慶醫(yī)科大學(xué)附屬永川醫(yī)院目錄英漢縮略語名詞對(duì)照英漢縮略語名詞對(duì)照1中文中文摘要摘要3英文摘要英文摘要5干擾胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白相關(guān)蛋干擾胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白1的表達(dá)對(duì)鼻咽癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影的表達(dá)對(duì)鼻咽癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響7前言前言71材料與方法材料與方法82結(jié)果17173討論討論2222全文總結(jié)全文總結(jié)2424參考文獻(xiàn)參考文獻(xiàn)2525文獻(xiàn)綜述文獻(xiàn)綜述2727參考文獻(xiàn)參考文獻(xiàn)3434致謝致謝4040攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文4141

簡(jiǎn)介：光生物調(diào)節(jié)PBM通過光線影響內(nèi)源光感受器的活性，激活線粒體逆行信號(hào)傳導(dǎo)途徑改變細(xì)胞增殖和代謝。低水平激光LLL）是用于光生物調(diào)節(jié)的常見光源。光譜中這個(gè)區(qū)域中的光可以穿透組織且不具有致癌性質(zhì)。低水平激光LLL已作為非侵入性物理治療應(yīng)用于臨床，例如骨質(zhì)疏松癥，通過改變骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的狀態(tài)來發(fā)揮作用。由于光療法廣泛用于醫(yī)學(xué)，干細(xì)胞療法和光療法的組合似乎是一個(gè)更加明智的選擇。LLL對(duì)人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞HADSCS的效應(yīng)機(jī)制仍有待研究。一種可能的機(jī)制是線粒體呼吸鏈中的細(xì)胞色素C氧化酶參與光子吸收。微陣列技術(shù)發(fā)現(xiàn)輻照后涉及能量產(chǎn)生和細(xì)胞抗氧化保護(hù)途徑的基因表達(dá)顯著上調(diào)。在本文的第一部分，評(píng)估了LLL對(duì)細(xì)胞活力，遷移，抗凋亡能力的影響以及探討了相關(guān)機(jī)制。使用MTS測(cè)量細(xì)胞增殖，并通過流式細(xì)胞術(shù)FLOWCYTOMETRYFCM檢測(cè)細(xì)胞周期。通過TEM、FCM、QRTPCR和免疫熒光評(píng)價(jià)LLL對(duì)線粒體生物發(fā)生（分裂和融合）和功能ATP，ROS，NO的影響。使用TRANSWELL、免疫熒光、ELISA和WESTERNBLOT評(píng)估細(xì)胞遷移和細(xì)胞骨架改變（肌動(dòng)蛋白和微管蛋白）。使用流式細(xì)胞術(shù)、免疫熒光和WESTERNBLOT評(píng)估細(xì)胞凋亡。研究了低水平激光LLLLLL照射1小時(shí)后繼續(xù)培養(yǎng)6小時(shí)或24小時(shí)后MSCS上述各項(xiàng)指標(biāo)的變化。作用機(jī)制包括增殖速率增加介導(dǎo)的S期比例上調(diào)通過融合（MFN1，MFN2和OPA1）和分裂（FIS1，DRP1和MTP18）相關(guān)蛋白介導(dǎo)的線粒體生物發(fā)生，以及NRF1，TFAM，PGC1A表達(dá)上調(diào)和細(xì)胞內(nèi)ROS和NO濃度變化介導(dǎo)的線粒體功能改變通過ERK12和FAK途徑以及生長(zhǎng)因子如HGF和PDGF的上調(diào)引起細(xì)胞遷移加速通過增加BCL2和降低BAX蛋白表達(dá)量，或者LLL處理的MSC與5氟尿嘧啶誘導(dǎo)凋亡的MSC之間形成隧道納米管TNT來抵抗凋亡。MSCS在動(dòng)物模型和臨床上獲得了良好治療效果，對(duì)于MSCS和基于它的產(chǎn)品在再生醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用將會(huì)被持續(xù)探討。MSCS促進(jìn)組織救援治療的機(jī)制包括1涉及到蛋白多肽以及激素分泌的旁分泌作用2通過隧道納米管或者微囊泡轉(zhuǎn)移線粒體3通過外泌體EXOSOMES轉(zhuǎn)移RNA等分子。MSC被募集到應(yīng)激或炎癥部位以實(shí)現(xiàn)其修復(fù)功能。MSCS的免疫調(diào)節(jié)不是自發(fā)的，需要“授權(quán)”或激活來發(fā)揮其免疫抑制作用。MSCS表面表達(dá)TOLL樣受體TLR，TLR信號(hào)傳導(dǎo)參與MSCS的許可。MSC表面表達(dá)的TLR3和TLR4可分別被雙鏈RNA如POLYI∶C和脂多糖LPS所激活?；罨疶LR4信號(hào)后MSCS會(huì)釋放增強(qiáng)炎癥反應(yīng)的細(xì)胞因子（IL6，IL8和TGFB等）從而極化成MSC1型促炎細(xì)胞，MSC1型細(xì)胞能活化T細(xì)胞相反，激活TLR3信號(hào)后，MSCS會(huì)產(chǎn)生抑制炎癥反應(yīng)的細(xì)胞因子（IDO，PGE2，IL4和IL1RA）極化成MSC2抑炎細(xì)胞，MSC2型細(xì)胞具有抑制淋巴細(xì)胞增殖的能力。在本文的第二部分，探討了LLL對(duì)TLR4誘導(dǎo)因子LPS介導(dǎo)的MSCS炎癥反應(yīng)的抑制作用。通過ELISA試劑盒和QRTPCR評(píng)價(jià)炎性因子表達(dá)和分泌，用CMH2DCFDA和DAFFM試劑盒測(cè)量細(xì)胞內(nèi)ROS和NO含量變化，發(fā)現(xiàn)LLL降低LPS誘導(dǎo)MSC中IL1Β，IL6，IL8，ROS和NO的分泌。免疫熒光檢測(cè)NFΚB在LLL照射的MSC中核易位相對(duì)于LPS誘導(dǎo)組顯著下降。WESTERNBLOT分析表明，LLL通過調(diào)節(jié)P65和IΚBΑ的磷酸化抑制NFΚB的活化。將純化的外周血單核細(xì)胞PBMC通過植物凝集素PHA刺激后與3種方式處理的MSCS共培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，LLL處理后的MSC顯著降低淋巴細(xì)胞激活標(biāo)記CD25和CD69在PHA刺激的淋巴細(xì)胞上的表達(dá)。綜上所述，使用1116JCM2劑量的LLL促進(jìn)MSCS的增殖，遷移和抗凋亡能力以及加強(qiáng)其抑炎作用。LLL可以作為MSC在移植前預(yù)處理手段，以達(dá)到基于干細(xì)胞治療的安全和長(zhǎng)期功效。

簡(jiǎn)介：分類號(hào)R7379UDC密級(jí)重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文論文題目RNAI沉默沉默GRP94表達(dá)對(duì)乳腺癌表達(dá)對(duì)乳腺癌MCF7細(xì)胞生物學(xué)特細(xì)胞生物學(xué)特性的影響及機(jī)制的研究性的影響及機(jī)制的研究作者姓名樊建軍樊建軍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士學(xué)科、專業(yè)名稱生物化學(xué)與分子生物學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)論文答辯年月2015年5月2015年4月指導(dǎo)教師姓名（職稱、單位名稱）宋方洲宋方洲教授教授重慶醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院重慶醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文1英文英文縮略語名詞對(duì)照縮略語名詞對(duì)照英文縮寫英文縮寫英文全稱英文全稱中文全稱中文全稱CCK8CELLCOUNTINGKIT8細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒DEPCDIETHYLPYROCARBONATE二乙基焦磷酰胺ERKEXTRACELLULARREGULATEDPROTEINKINASES細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶GRP94GLUCOSEREGULATEDPROTEIN葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白94HHOUR時(shí)HSP90HEATSHOCKPROTEIN90熱休克蛋白90IHCIMMUNOHISTOCHEMISTRY免疫組織化學(xué)KBKILOBASEPAIR千堿基對(duì)MCF7MICHIGANCANCERFOUNDATION–7乳腺癌細(xì)胞系7MGMILLIGRAM微克MINMINUTE分MLMICROLITER微升MRNAMESSENGERRIBONUCLEICACID信使核糖核酸PCRPOLYMERASECHAINREACTION聚合酶鏈反應(yīng)QRTPCRQUANTIFICATIONALREALTIMEPOLYMERASECHAINREACTION實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)RNAIRNAINTERFERENCERNA干擾RPMREVOLUTIONSPERMINUTE每分鐘轉(zhuǎn)速SDSSODIUMDODECYLSULPHATE十二烷基硫酸鈉SIRNASMALLINTERFERINGRNA小干擾RNATEMEDTETRAMETHYLETHYLENEDIAMIN四甲基乙二胺TGFΒTRANSFMINGGROWTHFACTBETA轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子ΒΜGMICROGRAM微克UPRUNFOLDEDPROTEINRESPONSE未折疊蛋白反應(yīng)

簡(jiǎn)介：探討代謝性疾病進(jìn)展過程中趨化因子對(duì)MSCS的作用及機(jī)制，可以加深我們對(duì)代謝性疾病的認(rèn)識(shí)。阿司匹林可以改善機(jī)體的炎癥環(huán)境，因此明確炎癥環(huán)境的改善對(duì)MSCS生物學(xué)特性的影響，將為深入了解代謝性疾病的發(fā)病機(jī)理提供新思路，為臨床診療工作提供新的理論依據(jù)。研究目的1明確高熱量攝入對(duì)大鼠骨髓來源MSCSBMSCS生物學(xué)特性的影響2探討趨化因子CINC3對(duì)BMSCS生物學(xué)特性的影響及其調(diào)控機(jī)制3明確阿司匹林對(duì)高熱量攝入誘導(dǎo)的炎癥環(huán)境的改善及BMSCS生物學(xué)特性的作用研究方法1不同飲食模式喂養(yǎng)的SPRAGUEDAWLEYSD大鼠模型的建立與鑒定6周齡的SD大鼠隨機(jī)分為三組，正常飲食組NMALDIET，ND大鼠飼喂基礎(chǔ)飼料，高熱量飲食組（HIGHFATDIET，HFD）大鼠飼喂定制的高熱量飼料（基礎(chǔ)飼料60％，添加10％蔗糖、20％豬油、10％蛋黃粉），重建飲食組2GC大鼠首先飼喂高熱量飼料2個(gè)月后，改喂基礎(chǔ)飼料，在喂養(yǎng)的不同時(shí)間點(diǎn)監(jiān)測(cè)大鼠體重、體長(zhǎng)及血清總膽固醇、空腹血糖、胰島素耐量等生理生化指標(biāo)，同時(shí)切取大鼠肝臟、脂肪及骨組織進(jìn)行組織病理學(xué)觀察。2高熱量攝入對(duì)大鼠BMSCS生物學(xué)特性的影響采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法獲取大鼠BMSCS，倒置顯微鏡下觀察不同飲食模式喂養(yǎng)的大鼠BMSCS的細(xì)胞形態(tài)通過MTS法檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖能力并通過MUSE細(xì)胞狀態(tài)分析儀對(duì)各組細(xì)胞的周期及凋亡水平進(jìn)行檢測(cè)利用TRANSWELL法檢測(cè)BMSCS的遷移能力選用P3代大鼠BMSCS，分別向成脂成骨方向進(jìn)行誘導(dǎo)分化，通過組化染色及REALTIMEPCR檢測(cè)成脂成骨分化標(biāo)志基因的表達(dá)，明確高熱量攝入對(duì)BMSCS定向分化能力的影響通過SAΒGAL染色對(duì)不同飲食模式喂養(yǎng)的各組大鼠BMSCS老化程度進(jìn)行評(píng)價(jià)，利用MITOSOXTM熒光染色檢測(cè)活細(xì)胞線粒體超氧化物含量，流式分析法檢測(cè)BMSCS過氧亞硝酸鹽含量，并利用REALTIMEPCR檢測(cè)BMSCS端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶TERT、組蛋白去乙?；窼IRT1的表達(dá)水平，探討高熱量攝入導(dǎo)致BMSCS老化程度增加的機(jī)制。3高熱量攝入誘導(dǎo)的趨化因子CINC3對(duì)BMSCS生物學(xué)特性的作用不同飲食模式飼喂6個(gè)月大鼠，空腹12小時(shí)后，大鼠尾靜脈取血并分離血清，采用細(xì)胞因子抗體芯片RAYBIORRATCYTOKINEANTIBODYARRAYGSERIES2檢測(cè)大鼠血清中相關(guān)細(xì)胞因子含量，分析高熱量攝入對(duì)大鼠血清細(xì)胞因子的影響。為探討高熱量攝入誘導(dǎo)的CINC3對(duì)BMSCS生物學(xué)特性的作用，在BMSCS體外培養(yǎng)基中添加CINC3，研究方法同前，檢測(cè)BMSCS的增殖能力、細(xì)胞周期及凋亡、遷移能力、并對(duì)其老化及機(jī)制進(jìn)行探討。在體外誘導(dǎo)培養(yǎng)基中添加CINC3，不同時(shí)間點(diǎn)通過組化染色及REALTIMEPCR檢測(cè)成臘成骨分化標(biāo)志基因的表達(dá)，明確高熱量攝入誘導(dǎo)的CINC3的增加對(duì)BMSCS定向分化能力的影響。4高熱量攝入誘導(dǎo)的趨化因子CINC3對(duì)BMSCS遷移及分化能力的作用機(jī)制BMSCS體外培養(yǎng)過程中加入不同濃度的CINC3進(jìn)行刺激，通過WESTERNBLOT和GLISA的方法檢測(cè)相關(guān)蛋白ELMO1及ACTIVERAC1的表達(dá)并通過功能性封閉抗體ANTICINC3ANTIBODY進(jìn)一步驗(yàn)證高熱量攝入誘導(dǎo)的CINC3對(duì)ELMO1及ACTIVERAC1的活化通過MTS法檢測(cè)ACTIVERAC1的抑制劑NSC23766對(duì)BMSCS增殖能力的影響，并利用組化染色和REALTIMEPCR檢測(cè)成脂分化標(biāo)志基因的表達(dá)，明確CINC3抑制BMSCS成脂分化的作用機(jī)制最后通過SIRNA敲減實(shí)驗(yàn)，敲低BMSCS中ELMO1的表達(dá)，探討CINC3影響B(tài)MSCS遷移能力的作用機(jī)制。5阿司匹林對(duì)改善高熱量攝入誘導(dǎo)的炎癥環(huán)境及BMSCS生物學(xué)特性的作用研究6周齡的SD大鼠隨機(jī)分為四組ND組大鼠飼喂基礎(chǔ)飼料，HFD組大鼠飼喂定制的高熱量飼料2GC組大鼠首先飼喂高熱量飼料2個(gè)月后，改喂基礎(chǔ)飼料重建飲食合并阿司匹林治療組2GCASPIRIN在飼喂高熱量飼料2個(gè)月后，改喂基礎(chǔ)飼料的同時(shí)添加阿司匹林進(jìn)行抗炎治療。在喂養(yǎng)的不同時(shí)間點(diǎn)監(jiān)測(cè)大鼠生理生化指標(biāo)，并切取大鼠部分組織器官進(jìn)行組織病理學(xué)觀察。采用蛋白質(zhì)芯片檢測(cè)上述四組大鼠飼喂6個(gè)月血清中細(xì)胞因子水平的變化并對(duì)各組大鼠BMSCS的生物學(xué)特性進(jìn)行檢測(cè)，研究方法同前，探討阿司匹林對(duì)高熱量攝入誘導(dǎo)的炎癥環(huán)境的改善及對(duì)BMSCS生物學(xué)特性的影響。研究結(jié)果1不同飲食模式喂養(yǎng)的SD大鼠模型的建立與鑒定HFD組大鼠隨喂養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，體型增大，體重和LEES指數(shù)增加，血清總膽固醇、空腹血糖含量升高，且組織胰島素敏感性降低2GC組大鼠在改變飲食后，血清總膽固醇迅速恢復(fù)正常，胰島素耐量在改變飲食后4個(gè)月2G4C恢復(fù)正常。HFD組大鼠喂養(yǎng)6個(gè)月6MG肝臟、脂肪及骨組織存在明顯的病理學(xué)改變，肝臟組織表現(xiàn)明顯的脂肪變現(xiàn)象，腹腔大網(wǎng)膜處的脂肪組織細(xì)胞橫截面直徑增加，骨組織中破骨細(xì)胞數(shù)目增多重建飲食組2G4C大鼠的組織器官病理學(xué)與正常飲食組6MC無明顯差異。2高熱量攝入對(duì)大鼠BMSCS生物學(xué)特性的影響與6MC組BMSCS相比，6MG組大鼠BMSCS體外增殖能力降低，G0G1期細(xì)胞比例增加，凋亡無明顯變化2G4C組大鼠BMSCS增殖能力、細(xì)胞周期及凋亡水平無明顯差異。而6MG組和2G4C組大鼠BMSCS體外遷移能力增加，成脂、成骨分化能力降低BMSCS老化現(xiàn)象明顯，線粒體中超氧化物、過氧亞硝酸鹽含量增加，端粒酶催化亞基TERT、組蛋白去乙?；窼IRT1表達(dá)水平降低。3高熱量攝入誘導(dǎo)的趨化因子CINC3對(duì)BMSCS生物學(xué)特性的作用細(xì)胞因子蛋白質(zhì)芯片檢測(cè)結(jié)果顯示，6MG組大鼠血清中趨化因子CINC3、CX3CL1、LIX的水平比6MC組高出20％以上2G4C組大鼠血清中CINC3、LIX仍舊高于6MC組。ELISA結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)，2G4C組大鼠血清中CINC3含量高于6MC組，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。體外添加CINC3對(duì)BMSCS的增殖無顯著作用，但可促進(jìn)BMSCS的遷移和老化，并下調(diào)BMSCS成脂分化相關(guān)基因CEBPΑ和PPARΓ的表達(dá)，抑制BMSCS成脂分化。4高熱量攝入誘導(dǎo)的趨化因子CINC3對(duì)BMSCS遷移及分化能力的作用機(jī)制體外添加CINC3，BMSCS中趨化因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)蛋白ELMO1及ACTIVERAC1的表達(dá)增加，ANTICINC3中和抗體可特異性抑制CINC3誘導(dǎo)的BMSCS中ELMO1和ACTIVERAC1的活化體外添加ACTIVERAC1的抑制劑NSC23766不影響B(tài)MSCS的增殖，但可在一定程度上逆轉(zhuǎn)ACTIVERAC1的激活對(duì)BMSCS成脂分化的抑制敲減ELMO1后BMSCS遷移能力降低。5阿司匹林對(duì)改善高熱量攝入誘導(dǎo)的炎癥環(huán)境及BMSCS生物學(xué)特性的作用研究2GCASPIRIN組大鼠的體重、LEES指數(shù)及空腹血糖一直維持在較穩(wěn)定水平，其血清中總膽固醇在改喂正常飲食并抗炎治療后1個(gè)月恢復(fù)正常胰島素耐量在改喂正常飲食并抗炎治療后3個(gè)月恢復(fù)正常2G4CASPIRIN組大鼠血清中絕大部分細(xì)胞因子恢復(fù)正常，CICN3、IL1Α水平仍高于6MC組2G4CASPIRIN組大鼠BMSCS成脂分化能力及老化程度雖未恢復(fù)正常，但較2G4C組有所改善。研究結(jié)論1本研究構(gòu)建了高熱量飲食及重建飲食SD大鼠動(dòng)物模型，發(fā)現(xiàn)大鼠重建飲食4個(gè)月2G4C后生理生化指標(biāo)恢復(fù)正常，但其BMSCS與正常飲食組6MCBMSCS相比，老化現(xiàn)象仍然明顯，遷移能力增加，成脂、成骨定向分化能力降低。同時(shí)，蛋白質(zhì)芯片及ELISA對(duì)大鼠血清中細(xì)胞因子的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，2G4C組大鼠趨化因子CINC3水平亦未恢復(fù)正常，提示高熱量攝入誘導(dǎo)大鼠血清CICN3的升高可能與BMSCS生物學(xué)特性的變化有關(guān)。2體外添加CINC3對(duì)BMSCS的增殖無顯著作用，但可促進(jìn)BMSCS的遷移和老化，并抑制BMSCS成脂分化。進(jìn)一步證實(shí)CINC3與BMSCS生物學(xué)特性的相關(guān)性。3體外添加CINC3可促進(jìn)CHEMOKINE信號(hào)通路中ELMO1及ACTIVERAC1的活化，而ANTICINC3中和抗體抑制其激活敲減ELMO1降低BMSCS的遷移能力體外添加ACTIVERAC1的抑制劑NSC23766可在一定程度逆轉(zhuǎn)ACTIVERAC1的激活對(duì)BMSCS成脂分化的抑制。說明CHEMOKINE信號(hào)通路中ELMO1和ACTIVERAC1參與調(diào)控BMSCS的遷移及分化。4重建飲食同時(shí)添加阿司匹林治療組2G4CASPIRIN大鼠血清中絕大多數(shù)細(xì)胞因子均可恢復(fù)到正常水平，雖然趨化因子CINC3未完全恢復(fù)正常，但其BMSCS老化程度及成脂分化能力均較2G4C組有所改善，說明阿司匹林可在一定程度上改善高熱量攝入誘導(dǎo)的炎癥環(huán)境及其對(duì)BMSCS生物學(xué)特性的影響。

簡(jiǎn)介：碩士學(xué)位論文論文題目SPATA5L1基因在KB細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化中的生物學(xué)意義研究生姓名樊辰指導(dǎo)教師姓名許玉杰專業(yè)名稱放射醫(yī)學(xué)研究方向分子核醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)論文提交日期2015年4月II

簡(jiǎn)介：目的探討MIR21在大鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞衰老過程中的生物學(xué)作用；探討MIR21是否通過調(diào)控靶基因HMGA2而實(shí)現(xiàn)其在EPCS中生物學(xué)作用。方法1密度梯度離心法獲取SD大鼠骨髓來源的單核細(xì)胞（BMMNCS），借助差速貼壁法和EPCS專用培養(yǎng)基定向誘導(dǎo)培養(yǎng)EPCS并培養(yǎng)1428天，光學(xué)顯微鏡下觀察EPCS的細(xì)胞形態(tài)變化，CCK8法分析EPCS的增殖情況、繪制生長(zhǎng)曲線，應(yīng)用流式細(xì)胞儀、乙酰低密度脂蛋白、與荊豆凝集素吞噬實(shí)驗(yàn)鑒定細(xì)胞表型，用MATRIGEL成管試驗(yàn)檢測(cè)成血管能力；2MIR21的模擬物和抑制物轉(zhuǎn)染P10代EPCS，檢測(cè)MIR21對(duì)EPCS增殖情況、運(yùn)動(dòng)遷移能力、成血管能力的影響，用細(xì)胞衰老Β半乳糖苷酶染色檢測(cè)MIR21對(duì)EPCS衰老的影響；3探查MIR21的可能靶基因HMGA2，PCR技術(shù)檢測(cè)MRNA的表達(dá)；WESTERNBLOT檢測(cè)靶蛋白的表達(dá)變化。結(jié)果1密度梯度離心法獲得SD大鼠MNCS經(jīng)體外培養(yǎng)后，表達(dá)相應(yīng)的內(nèi)皮細(xì)胞特異抗原，包括CD133、CD34以及VEGFR2，能夠吞噬DILACLDL與UEA1結(jié)合，具有增殖和成血管能力，細(xì)胞純度較高；2使用MIR21模擬物和抑制物轉(zhuǎn)染EPCS48小時(shí)后，證實(shí)MIR21的抑制物能夠促進(jìn)EPCS的增殖能力（P結(jié)論MIR21表達(dá)下調(diào)能夠抑制EPCS的衰老，并促進(jìn)EPCS的增殖、遷移、成血管能力，HMGA2可能是MIR21的靶基因。

簡(jiǎn)介：背景與目的膿毒癥是嚴(yán)重感染、創(chuàng)傷、燒傷、外科大手術(shù)患者常見的并發(fā)癥，進(jìn)一步發(fā)展可導(dǎo)致膿毒癥休克和多器官功能障礙綜合征MODS，是臨床危重患者死亡的最主要原因之一。全球膿毒癥患者總病例數(shù)約為1800萬年，美國(guó)患病人數(shù)為75萬年，歐洲為135萬年。全世界死亡人數(shù)超過14萬天，美國(guó)215萬年，并成為美國(guó)非心臟ICU死亡的主因。目前對(duì)膿毒癥的認(rèn)識(shí)及治療措施有所改進(jìn)，但膿毒癥的病死率仍然居高不下，已成為現(xiàn)代危重病醫(yī)學(xué)面臨的突出難題。根本原因源于膿毒癥的根本發(fā)病環(huán)節(jié)及作用機(jī)制尚未充分闡明，故而缺乏早期有效的預(yù)防與治療措施。失控的全身炎癥反應(yīng)是膿毒癥預(yù)后不良的重要原因之一。固有免疫細(xì)胞是炎癥反應(yīng)的重要參與者，其異?；罨蓪?dǎo)致失控炎癥反應(yīng)的發(fā)生。感染相關(guān)的噬血細(xì)胞綜合征IAHS及重癥急性呼吸道綜合征SARS、重癥H1N1等高致死性流行病毒感染性疾病，其病理生理特點(diǎn)亦為失控的全身炎癥反應(yīng)綜合征。以上疾病存在著固有免疫細(xì)胞的異?；罨?，是疾病發(fā)生的重要原因之一，但對(duì)于何種原因?qū)е鹿逃忻庖呒?xì)胞的異?；罨枰M(jìn)一步研究。近年的研究顯示了固有免疫細(xì)胞與適應(yīng)性免疫細(xì)胞在炎癥反應(yīng)中相互作用的復(fù)雜性。我們的前期研究顯示T細(xì)胞缺陷裸鼠感染呼吸道合胞病毒RSV后，炎癥反應(yīng)重于野生型小鼠，提示T細(xì)胞可能抑制炎癥反應(yīng)發(fā)生。KIM的研究顯示炎癥早期，淋巴細(xì)胞可抑制固有免疫細(xì)胞活化。由此，我們推測(cè)，膿毒癥，IAHS及SARS等的發(fā)生可能與機(jī)體體內(nèi)淋巴細(xì)胞不同程度功能缺陷導(dǎo)致固有免疫細(xì)胞異?；罨嚓P(guān)。若能對(duì)淋巴細(xì)胞缺陷動(dòng)物膿毒癥中固有免疫細(xì)胞活化及功能特征進(jìn)行研究，也許能為以上疾病的發(fā)病環(huán)節(jié)及作用機(jī)制研究提供新的思路。內(nèi)毒素在革蘭陰性細(xì)菌感染所致膿毒癥的發(fā)病機(jī)制中扮演重要作用，甚至細(xì)菌血培養(yǎng)陰性時(shí)，也存在內(nèi)毒素血癥，提示內(nèi)毒素血癥可是膿毒血癥的單獨(dú)致病因素。內(nèi)毒素具有極廣泛而又復(fù)雜的生物學(xué)效應(yīng)，膿毒癥病理過程中出現(xiàn)的失控炎癥反應(yīng)、免疫機(jī)能紊亂、高代謝狀態(tài)及多臟器功能損害均可由內(nèi)毒素直接或間接觸發(fā)。淋巴細(xì)胞缺陷的重癥聯(lián)合免疫缺陷SCID小鼠革蘭陰性細(xì)菌感染模型的病理性免疫反應(yīng)炎癥反應(yīng)取決于細(xì)菌的持續(xù)繁殖擴(kuò)散和宿主的免疫反應(yīng)。這一模型給研究單一免疫反應(yīng)帶來困難。為避免此類情況的發(fā)生，我們擬采用脂多糖LPS腹腔注射誘導(dǎo)T、B細(xì)胞缺陷重癥聯(lián)合免疫缺陷小鼠內(nèi)毒素血癥，通過觀察SCID小鼠巨噬細(xì)胞生物學(xué)特性，從而揭示淋巴細(xì)胞缺陷對(duì)炎癥反應(yīng)的影響以及對(duì)巨噬細(xì)胞活化的調(diào)控作用及其作用可能的分子機(jī)制，為膿毒癥的防治提供新的方向和理論依據(jù)。第一部分、脂多糖誘導(dǎo)的BALBC小鼠與SCID小鼠內(nèi)毒素血癥炎癥反應(yīng)的比較目的在LPS誘導(dǎo)的BALBC小鼠和SCID小鼠內(nèi)毒素血癥模型基礎(chǔ)上，比較兩種小鼠炎癥反應(yīng)的差異，觀察淋巴細(xì)胞缺陷對(duì)固有免疫應(yīng)答及炎癥反應(yīng)的影響。方法LPS腹腔注射BALBC小鼠和SCID小鼠后，觀察小鼠的一般狀況及存活率。將32只雄性BALBC小鼠和32只雄性SCID小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組，LPS注射后3H，6H和12H組。取小鼠的血清，肝臟及肺臟組織；用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)兩種小鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶ALT、谷草轉(zhuǎn)氨酶AST及血尿素氮BUN水平；用HE染色，雙盲法評(píng)估肝臟，肺臟的炎癥病理?yè)p傷；用流式細(xì)胞術(shù)微球陣列法CBA檢測(cè)兩種小鼠血清TNFΑ，IFNΓ，IL10，IL6及MCP1的水平；用ELISA檢測(cè)兩種小鼠血清IL12，IL4及IL17的水平及肝組織勻漿TNFΑ及IL10的水平。結(jié)果LPS誘導(dǎo)內(nèi)毒素血癥后，SCID小鼠于12～24H均死亡88，BALBC小鼠僅1只死亡18；LPS注射后12H，SCID小鼠血清ALT、AST均高于BALBC小鼠，兩種小鼠BUN無顯著差異；SCID小鼠肝臟、肺臟病理評(píng)分均高于BALBC小鼠LPS注射后，兩種小鼠血清TNFΑ，IFNΓ，IL10，IL6，MCP1及IL4的水平均顯著升高，且SCID小鼠以上細(xì)胞因子水平明顯高于BALBC小鼠；LPS注射后3H，SCID小鼠肝組織勻漿TNFΑ水平高于BALBC小鼠，注射后6H，IL10水平高于BALBC小鼠。結(jié)論LPS誘導(dǎo)小鼠內(nèi)毒素血癥后，與野生型BALBC小鼠比較，SCID小鼠分泌過量的炎性及抗炎細(xì)胞因子，出現(xiàn)失控的炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致嚴(yán)重的臟器損傷，是SCID小鼠死亡的重要原因。固有免疫應(yīng)答在缺乏淋巴細(xì)胞的狀態(tài)下異常增強(qiáng)，可能是發(fā)生危及生命的重癥全身炎癥反應(yīng)綜合征的重要原因。第二部分、脂多糖誘導(dǎo)的BALBC小鼠與SCID小鼠內(nèi)毒素血癥腹腔巨噬細(xì)胞活化及功能的比較目的在LPS誘導(dǎo)的BALBC小鼠和SCID小鼠內(nèi)毒素血癥模型基礎(chǔ)上，比較BALBC小鼠及SCID小鼠腹腔巨噬細(xì)胞活化及功能的差異。觀察淋巴細(xì)胞缺陷對(duì)巨噬細(xì)胞活化及功能的影響。方法將40只雄性BALBC小鼠和40只雄性SCID小鼠各自隨機(jī)分為正常對(duì)照組，LPS注射后1H，3H，6H和12H組。取小鼠的腹腔灌洗液，腹腔巨噬細(xì)胞和小鼠脾臟NK細(xì)胞；用ELISA檢測(cè)腹腔灌洗液TNFΑ和IL10的水平；用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)腹腔巨噬細(xì)胞TNFΑ和IL10MRNA表達(dá)；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)BALBC小鼠及SCID小鼠正常對(duì)照組及LPS注射后3H組腹腔巨噬細(xì)胞TLR4，MHCⅡ，CD80，CD86及CD40的表達(dá)及LPS注射后12H脾臟NK細(xì)胞胞內(nèi)細(xì)胞因子IFNΓ水平；雞紅細(xì)胞吞噬實(shí)驗(yàn)檢測(cè)兩種小鼠正常對(duì)照組腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能；并提取兩種小鼠正常對(duì)照組腹腔巨噬細(xì)胞體外LPS刺激培養(yǎng)，測(cè)定上清中TNFΑ，IL6，IL10，IL17及IFNΓ的水平。結(jié)果LPS注射后1H，SCID小鼠腹腔灌洗液TNFΑ水平高于BALBC小鼠，注射后3H，IL10水平明顯低于BALBC小鼠；正常對(duì)照組及LPS注射后3H，6H和12H組，SCID小鼠腹腔巨噬細(xì)胞TNFΑMRNA表達(dá)高于BALBC小鼠；正常對(duì)照組及LPS注射后各時(shí)間點(diǎn)，SCID小鼠腹腔巨噬細(xì)胞IL10MRNA表達(dá)均低于BALBC小鼠。BALBC小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬百分率及吞噬指數(shù)均高于SCID小鼠腹腔巨噬細(xì)胞；LPS注射后，BALBC小鼠腹腔巨噬細(xì)胞TLR4，MHCⅡ，CD80，CD86表達(dá)均明顯升高，SCID小鼠腹腔巨噬細(xì)胞TLR4，MHCⅡ，CD86表達(dá)無明顯變化，BALBC小鼠腹腔巨噬細(xì)胞CD40及SCID小鼠腹腔巨噬細(xì)胞CD80，CD40均明顯下降；SCID小鼠NK細(xì)胞胞內(nèi)IFNΓ平均熒光值高于BALBC小鼠NK細(xì)胞。體外實(shí)驗(yàn)LPS刺激20H后，SCID小鼠腹腔巨噬細(xì)胞較BALBC小鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌更多的TNFΑ，IL6，但I(xiàn)L10的分泌明顯偏少。結(jié)論與野生型BALBC小鼠比較，SCID小鼠腹腔巨噬細(xì)胞共刺激分子CD80、CD86的表達(dá)自發(fā)性增高，吞噬功能明顯下降。經(jīng)LPS刺激后，腹腔巨噬細(xì)胞TLR4和MHCⅡ和CD80、CD86分子表達(dá)無增高，但分泌的炎性細(xì)胞因子顯著增加，且NK細(xì)胞胞內(nèi)IFN水平增高。以上表現(xiàn)是SCID小鼠內(nèi)毒素血癥炎癥反應(yīng)失控的主要特點(diǎn)。第三部分、MKP1在淋巴細(xì)胞對(duì)巨噬細(xì)胞活化調(diào)控中的作用目的在LPS誘導(dǎo)的BALBC小鼠和SCID小鼠內(nèi)毒素血癥模型基礎(chǔ)上，篩選出可能參與淋巴細(xì)胞對(duì)巨噬細(xì)胞活化調(diào)控的信號(hào)分子。于體外建立單獨(dú)腹腔巨噬細(xì)胞組及腹腔巨噬細(xì)胞PANT細(xì)胞混合培養(yǎng)組模型，采用LPS刺激后，明確所篩選出分子的表達(dá)及作用。方法將40只雄性BALBC小鼠和40只雄性SCID小鼠各自隨機(jī)分為正常對(duì)照組，LPS注射后1H，3H，6H和12H組。提取腹腔巨噬細(xì)胞；采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)腹腔巨噬細(xì)胞SOCS1，SOCS3及MKP1的MRNA表達(dá)，免疫熒光檢測(cè)腹腔巨噬細(xì)胞MKP1蛋白表達(dá)。提取BALBC小鼠腹腔巨噬細(xì)胞及脾臟PANT細(xì)胞建立單獨(dú)腹腔巨噬細(xì)胞組及腹腔巨噬細(xì)胞PANT細(xì)胞混合培養(yǎng)組模型；LPS刺激后，提取貼壁腹腔巨噬細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)上清；實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)MKP1MRNA的表達(dá)；WESTERNBLOT檢測(cè)腹腔巨噬細(xì)胞MKP1蛋白表達(dá)水平；用ELISA檢測(cè)上清中TNFΑ、IL6及IL10的水平。結(jié)果在LPS注射后3H及6H，SCID小鼠腹腔巨噬細(xì)胞SOCS1MRNA表達(dá)明顯高于BALBC小鼠；在LPS注射后1H及12H，BALBC小鼠SOCS3表達(dá)明顯高于SCID小鼠。正常對(duì)照組及LPS注射后，BALBC小鼠腹腔巨噬細(xì)胞MKP1MRNA的表達(dá)均高于SCID小鼠腹腔巨噬細(xì)胞。體外實(shí)驗(yàn)，LPS刺激后，腹腔巨噬細(xì)胞與PANT細(xì)胞共培養(yǎng)細(xì)胞中腹腔巨噬細(xì)胞MKP1MRNA及蛋白表達(dá)高于單獨(dú)培養(yǎng)腹腔巨噬細(xì)胞；上清中TNFΑ、IL6水平明顯低于單獨(dú)培養(yǎng)巨噬細(xì)胞，IL10水平無顯著差異。結(jié)論內(nèi)毒素血癥小鼠淋巴細(xì)胞并非通過SOCS1和SOCS3信號(hào)分子調(diào)控巨噬細(xì)胞活化。PANT細(xì)胞可抑制LPS刺激下巨噬細(xì)胞炎性細(xì)胞因子釋放。在LPS誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)小鼠模型中淋巴細(xì)胞可能通過促進(jìn)巨噬細(xì)胞MKP1表達(dá)，抑制其炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生。

簡(jiǎn)介：碩士學(xué)位論文論文題目B7H4在腫瘤細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的生物學(xué)意義研究研究生姓名曾雙指導(dǎo)教師姓名章良專業(yè)名稱微生物與生化藥學(xué)研究方向腫瘤免疫分子的研究學(xué)號(hào)20134226004論文提交日期2016年4月

簡(jiǎn)介：目的利用COL2A1CREERT2IHHFLFL基因工程小鼠所培育的未成熟的小鼠的肋軟骨細(xì)胞，使用周期性動(dòng)態(tài)壓縮應(yīng)力（FLEXCELL5000施加正弦波、05HZ、5KPA、1HD壓縮應(yīng)力）的方法探討條件性敲除IHH基因后的軟骨細(xì)胞立體培養(yǎng)的力學(xué)生物學(xué)特性。方法1基因工程小鼠（COL2A1CREERT2IHHFLFL和IHHFLFL）的培育及其基因鑒定。2取剛出生的基因工程小鼠（攜帶IHHFLFL純合基因并且具有COL2A1CREERT2基因）40只。隨機(jī)的分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組基因小鼠給予腹腔連續(xù)注射3天TM（TAMOXIFEN），對(duì)照組基因小鼠給予腹腔連續(xù)注射3天等量植物油，待第6天時(shí)取小鼠肋軟骨，急性消化肋軟骨細(xì)胞作為本實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞來源。3用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)來檢測(cè)IHH基因相對(duì)表達(dá)量，計(jì)算IHH基因的敲除率。4將實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組急性消化分離的細(xì)胞以2105ML的密度混于15％的海藻酸鈉凝膠中，利用模型制成海藻酸鈉細(xì)胞盤。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組各自分為兩組其中一組海藻酸鈉細(xì)胞盤用FLEXCELL5000基底加載系統(tǒng)施加動(dòng)態(tài)壓縮應(yīng)力正弦波、05HZ、5KPA、1HD7、14、21天；另一組海藻酸鈉細(xì)胞盤靜態(tài)培養(yǎng)7、14、21天。5分別在7、14、21天時(shí)在倒置顯微鏡下觀察各組軟骨細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況。6通過RTPCR技術(shù)測(cè)定同一時(shí)間點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組內(nèi)細(xì)胞盤的Ⅱ型膠原、Ⅹ型膠原、蛋白多糖（AGG）、基質(zhì)金屬蛋白酶13（MMP13）MRNA的相對(duì)表達(dá)量。7運(yùn)用半無限體細(xì)胞力學(xué)模型與微管吸吮技術(shù)相結(jié)合來測(cè)定各組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞力學(xué)特性。結(jié)果1通過RTPCR檢測(cè)IHH基因相對(duì)表達(dá)量發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組基因小鼠在腹腔注射TM（TAMOXIFEN）后與對(duì)照組相比其IHH基因相對(duì)表達(dá)量降低（P2同一時(shí)間點(diǎn)，壓縮刺激可以促進(jìn)軟骨細(xì)胞在海藻酸鈉凝膠中的增殖，倒置顯微鏡觀察細(xì)胞盤發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組內(nèi)壓縮細(xì)胞盤的細(xì)胞密度隨著壓縮刺激天數(shù)的增長(zhǎng)而增加，其密度明顯高于同組內(nèi)靜態(tài)培養(yǎng)組；實(shí)驗(yàn)組基因敲除與對(duì)照組未敲除相比敲除IHH后的軟骨細(xì)胞盤與未敲除IHH的軟骨細(xì)胞盤中的細(xì)胞密度相差不明顯。3RTPCR檢測(cè)（1）實(shí)驗(yàn)組基因敲除與對(duì)照組未敲除立體培養(yǎng)細(xì)胞盤相比、壓縮細(xì)胞盤相比7天時(shí)實(shí)驗(yàn)組的AGG、COLII相對(duì)表達(dá)量增高P4各組內(nèi)細(xì)胞瞬時(shí)模量（E0）、平衡模量（E∞）、表觀黏性（Μ）隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加而降低，其中實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組內(nèi)壓縮21天的E0、E∞、Μ明顯低于同組內(nèi)壓縮7、14天（P＜005），7天與14天之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比較，在同一時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組立體培養(yǎng)軟骨細(xì)胞、動(dòng)態(tài)壓縮的軟骨細(xì)胞的E0、E∞、Μ均大于對(duì)照組，其中實(shí)驗(yàn)組內(nèi)壓縮21天的E0、E∞明顯高于對(duì)照組內(nèi)壓縮21天（P＜005）；實(shí)驗(yàn)組內(nèi)與對(duì)照組內(nèi)同一時(shí)間點(diǎn)的動(dòng)態(tài)壓縮軟骨細(xì)胞的E0、E∞、Μ均大于立體培養(yǎng)軟骨細(xì)胞的E0、E∞、Μ，其中實(shí)驗(yàn)組內(nèi)壓縮7天的軟骨細(xì)胞的E0、E∞明顯大于立體培養(yǎng)7天的軟骨細(xì)胞的E0、E∞（P＜005）。結(jié)論海藻酸鈉立體培養(yǎng)的條件性敲除IHH基因的小鼠肋軟骨細(xì)胞在生理性動(dòng)態(tài)壓縮刺激7天時(shí)可以有效的提高COLⅡ和AGG的表達(dá)，抑制COLⅩ和MMP13的表達(dá)，可以一定程度上改善軟骨細(xì)胞的力學(xué)性能，然而壓縮天數(shù)越長(zhǎng)軟骨細(xì)胞所分泌的基質(zhì)就越少、軟骨細(xì)胞力學(xué)特性也就隨之減弱。

簡(jiǎn)介：目的通過TRANSWELL間接共培養(yǎng)技術(shù)研究兔膝關(guān)節(jié)軟骨單位對(duì)軟骨細(xì)胞生物學(xué)特性的影響為組織工程技術(shù)修復(fù)損傷軟骨選取良好種子細(xì)胞提供依據(jù)。方法用不同消化酶將2月齡新西蘭兔膝關(guān)節(jié)軟骨分別消化成軟骨細(xì)胞和軟骨單位。按2105個(gè)細(xì)胞孔濃度接種于TRANSWELL雙層細(xì)胞培養(yǎng)板。實(shí)驗(yàn)組軟骨單位接種于上室，軟骨細(xì)胞接種于下室；對(duì)照組下室接種軟骨細(xì)胞，上室未接種。分別在2、4、6、8天提取各組TRANSWELL下室軟骨細(xì)胞進(jìn)行指標(biāo)檢測(cè)。早期凋亡率檢測(cè)ANNEXINV和7AAD標(biāo)記流式細(xì)胞儀檢測(cè)，TUNEL染色熒光顯微鏡檢測(cè)；增殖率檢測(cè)PCNA標(biāo)記流式細(xì)胞儀檢測(cè)，EDU染色熒光顯微鏡檢測(cè)；相關(guān)基因相對(duì)表達(dá)量檢測(cè)PCR技術(shù)檢測(cè)AGG、COLII、MMP13基因相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果ANNEXINV和7AAD標(biāo)記流式細(xì)胞儀檢測(cè)TRANSWELL下室軟骨細(xì)胞早期凋亡率發(fā)現(xiàn)，在實(shí)驗(yàn)早期（第2、4天）實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組TRANSWELL下室軟骨細(xì)胞早期凋亡率差異不明顯，差別沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P005）。在實(shí)驗(yàn)第6天、第8天實(shí)驗(yàn)組軟骨細(xì)胞早期凋亡率明顯低于對(duì)照組（P005）。在實(shí)驗(yàn)第6天、第8天實(shí)驗(yàn)組軟骨細(xì)胞增殖率明顯高于對(duì)照組（P005）。在實(shí)驗(yàn)后期AGG、COLII基因相對(duì)表達(dá)量在第6天、第8天時(shí)實(shí)驗(yàn)組明顯高于對(duì)照組（P結(jié)論1軟骨單位作為關(guān)節(jié)軟骨的基本功能單位，能夠更長(zhǎng)時(shí)間有效抵抗或延緩軟骨細(xì)胞凋亡、維持軟骨細(xì)胞增殖及正向調(diào)節(jié)軟骨基質(zhì)相關(guān)物質(zhì)的基因表達(dá)。2軟骨單位有望在組織工程中作為種子細(xì)胞用于骨關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)軟骨缺損的修復(fù)。本實(shí)驗(yàn)課題為國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目“軟骨單位力學(xué)生物學(xué)分析及其在關(guān)節(jié)軟骨損傷修復(fù)中的作用（項(xiàng)目編號(hào)31271033）”的子課題。