版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、B7-H4,又稱B7x和B7S1,是B7家族共刺激分子成員之一,并且能夠抑制T細胞的免疫功能。B7-H4分子 mRNA在人體外周組織中廣泛表達,而其蛋白在正常機體內則不表達或低表達,在眾多腫瘤細胞中則呈高表達。此外,研究發(fā)現 B7-H4的表達水平與疾病的惡化呈正相關。早期研究發(fā)現,B7-H4分子屬于I型跨膜糖蛋白,與淋巴細胞表面的相應受體結合,從而負性調控免疫反應。然而在一些腫瘤細胞中同樣發(fā)現了B7-H4在胞內的表達。臨床組織樣本的分析
2、結果顯示,膜表達B7-H4與腫瘤浸潤T淋巴細胞呈負相關,而胞內表達B7-H4分子與腫瘤浸潤T淋巴細胞無明顯相關性,由此可見,胞內B7-H4分子有區(qū)別于膜表達B7-H4分子的生物學功能。近期研究表明,B7-H4分子含有核定位序列,能夠穿梭于細胞核與細胞質之間;并且位于核內的B7-H4分子能夠促進細胞增殖、G1/S期的轉換。但是,對于B7-H4分子在腫瘤細胞內表達的生物學意義仍不十分清楚。本研究通過構建Flag標簽的B7-H4野生型(B7-
3、H4 WT)真核表達載體,瞬轉HEK293細胞,采用免疫共沉淀結合質譜的方法,尋找B7-H4分子在細胞內的相互作用蛋白;并通過基因芯片的方法分析構建的B7-H4野生型(B7-H4 WT)與核定位序列突變B7-H4(B7-H4 H250Q)的穩(wěn)轉細胞株,從而尋找B7-H4WT與B7-H4H250Q分子所引起的差異表達蛋白,更好地研究B7-H4在腫瘤細胞內表達的生物學意義。本研究分為兩個部分:
第一部分:免疫共沉淀結合質譜法尋找B
4、7-H4分子相互作用蛋白及其生物學功能的初步研究。
目的:尋找B7-H4分子相互作用蛋白,并對其生物學功能進行初步研究。
方法:構建Flag標簽的 B7-H4野生型真核表達載體,通過 lipofectamine2000瞬轉HEK293,24-48h提取總蛋白,免疫共沉淀法獲得與B7-H4分子相互作用的蛋白,將相互作用蛋白跑WB并銀染,差異條帶膠回收,打質譜,分析數據,尋找相互作用蛋白,免疫共沉淀驗證相互作用蛋白;以及
5、通過構建 vector/786-O、B7-H4 WT/786-O、B7-H4 H250Q/786-O以及vector/293、B7-H4 WT/293、B7-H4 H250Q/293穩(wěn)定轉染細胞株進行相應功能實驗。
結果:構建了Flag標簽的 B7-H4野生型質粒,以及 vector/786-O、B7-H4 WT/786-O、B7-H4 H250Q/786-O以及vector/293、B7-H4 WT/293、B7-H4 H2
6、50Q/293穩(wěn)定轉染細胞株;免疫共沉淀結合質譜找到了野生型B7-H4分子的相互作用蛋白,并且發(fā)現B7-H4分子對相互作用蛋白的活性有調控作用。
結論:確定了B7-H4分子的互作蛋白DNA-PKcs,并初步證實B7-H4對該蛋白的活性有調控作用。
第二部分:尋找B7-H4野生型(B7-H4 WT)及核定位序列突變型(B7-H4H250Q)在786-O細胞中的差異表達蛋白及其功能研究。
目的:尋找B7-H4分
7、子引起的差異表達蛋白,并對其生物學功能進行研究。
方法:通過基因芯片技術對上述構建的vector/786-O、B7-H4 WT/786-O、B7-H4 H250Q/786-O穩(wěn)定轉染細胞株進行分析,尋找差異表達基因,Western blot實驗驗證差異表達蛋白,MTT細胞增殖實驗比較體外細胞增殖率的差異。
結果:Western blot結果與基因芯片結果均發(fā)現一些與細胞侵襲及血管生成相關的差異表達蛋白,MTT增殖實驗
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- B7-H4在卵巢上皮性腫瘤中的表達及其意義.pdf
- B7-H4、Foxp3+Treg細胞在卵巢上皮性腫瘤中的表達及其臨床病理意義.pdf
- 鼠抗人B7-H4單克隆抗體的研制及B7-H4分子在腫瘤細胞中表達特性的分析.pdf
- B7-H4在腎透明細胞癌中的表達及其臨床意義.pdf
- 卵巢腫瘤中B7-H4分子的表達及其臨床意義.pdf
- 共刺激分子B7-H4和B7-H3在胃癌中的表達及意義.pdf
- B7-H4在胃癌細胞中表達及其表達下調誘導細胞凋亡的研究.pdf
- B7-H4在胰腺癌中的表達及其臨床意義.pdf
- B7-H4蛋白在卵巢癌組織中的表達及意義.pdf
- B7-H4在甲狀腺癌中的表達及其臨床意義.pdf
- B7-H4在肺癌和結直腸癌組織中的表達及不同腫瘤患者可溶性B7-H4的檢測.pdf
- B7家族分子B7-H3和B7-H4在肝細胞癌中的表達及臨床意義.pdf
- B7-H4在肺部和結直腸癌組織中的表達及不同腫瘤患者可溶性B7-H4的檢測.pdf
- 共刺激因子B7-H1和B7-H4在膽囊癌中的表達及意義.pdf
- B7-H4基因對卵巢癌細胞生物學習性影響的研究.pdf
- 抗B7-H4單鏈抗體的人源化改造、表達及其生物學功能鑒定.pdf
- MAGE-A4和B7-H4在食管鱗狀細胞癌中的表達及臨床意義.pdf
- 共刺激分子B7-H3、B7-H4和ILT4在非小細胞肺癌中表達的研究.pdf
- 協(xié)同刺激因子B7-H3和B7-H4在膽囊癌中的表達及其臨床意義.pdf
- Sema-3a對樹突狀細胞B7-H4表達的影響.pdf
評論
0/150
提交評論