簡介：目的研究大鼠間質(zhì)干細胞體內(nèi)致瘤模型及致瘤后獲得單克隆腫瘤細胞株K3的生物學(xué)特性；建立K3腫瘤干細胞K3SP分離、鑒定的方法；初步采用細胞生物學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)等探討K3腫瘤干細胞與非腫瘤干細胞的生物學(xué)特性及基因表達；探討無血清培養(yǎng)對K3腫瘤干細胞的富集作用。方法采用生長曲線、流式表面標記、PCR、免疫組化等技術(shù)來研究K3細胞的生物學(xué)特性。制備K3細胞懸液，經(jīng)過HOECHST33342熒光染料染色，流式細胞儀分析并分選出SP亞群。采用五種培養(yǎng)方法培養(yǎng)K35％FBS、10％FBS、無血清、無血清加三種生長因子培養(yǎng)K3及K3細胞BALBC裸鼠皮下致瘤。獲得足夠量的K3細胞后，取瘤組織過400目銅網(wǎng)得到單細胞懸液。單細胞懸液經(jīng)過HOECHST33342熒光染料染色，使用流式細胞儀分選出K3SP細胞和K3NSP細胞。分選得到的K3SP細胞和K3NSP細胞進行BALBC裸鼠皮下致瘤實驗并觀察比較瘤體積的大小。使用晶芯R大鼠全基因組寡核苷酸微陣列芯片比較K3SPK3NSP細胞基因表達差異，使用熒光實時定量RTPCR驗證差異表達基因。比較K3SP致瘤組織和K3SP致瘤組織ABCG2、OCT4、PCNA、P53的免疫組化結(jié)果。利用無血清培養(yǎng)以富集K3SP細胞。結(jié)果K3腫瘤細胞表達大鼠間質(zhì)干細胞相似的表面抗原如CD29CD44CD90弱表達CD45；K3腫瘤細胞具有一般腫瘤細胞表達基因與生長特性，能夠在BALBC裸鼠致瘤；K3腫瘤細胞具有異質(zhì)性，同時含有少量的腫瘤干細胞。不同胎牛血清濃度培養(yǎng)下，K3細胞中K3SP細胞含量有差異，5％FBS培養(yǎng)與10％FBS培養(yǎng)分析得K3SP含量分別為101％和073％。K3SP較K3NSPBLABC裸鼠致瘤率明顯增強，5103K3SP細胞即可裸鼠致瘤，其組織類型為纖維肉瘤?；蛐酒治鲲@示，K3SP與K3NSP差異表達基因56個，其中上調(diào)40個，下調(diào)16個，REALTIMEPCR驗證了TBX3、MAFB、PLK2等上調(diào)基因和VEGF一個下調(diào)基因。免疫組化顯示K3SP致瘤組織為P53、PCNA、ABCG2、OCT4陽性，而K3NSP致瘤組織為陰性。K3細胞在含有BFGF、EGF、LIF三種因子的無血清培養(yǎng)基與不含三種因子的培養(yǎng)基中均呈懸浮球狀生長，REALTIMEPCR顯示OCT4在兩種無血清培養(yǎng)基中表達均有差異。無血清加三種因子培養(yǎng)基中培養(yǎng)15天后，SP含量達到773％，具有明顯的富集K3SP的作用。結(jié)論K3腫瘤細胞源于骨髓MSC突變致瘤，其中含有K3SP細胞，K3SP細胞與K3NSP細胞在致瘤性、基因表達等方面存在明顯的差異，K3SP細胞具有較強的致瘤能力。無血清加因子培養(yǎng)能夠明顯的富集K3SP，這些研究為尋找K3SP細胞的特異性分子標志和K3SP的深入研究提供實驗依據(jù)。

簡介：目的建立小鼠臍帶來源的間質(zhì)干細胞MOUSEUMBILICALCDDERIVEDMESENCHYMALSTEMCELLS，MUCMSCS的分離培養(yǎng)方法，分析其生物學(xué)特性，并比較其與小鼠骨髓來源的間質(zhì)干細胞MOUSEBONEMARROWDERIVEDMESENCHYMALSTEMCELLSMBMMSCS的差異，初步探討TOLL樣受體3TLR3對MUCMSCS特性的影響。方法采用改良組織塊貼壁法分離培養(yǎng)MUCMSCS，在含有15％胎牛血清的F12DMEM培養(yǎng)基中連續(xù)培養(yǎng)、純化及傳代擴增。采用全骨髓貼壁法分離獲得MBMMSCS。通過細胞形態(tài)觀察、生長曲線繪制、流式細胞術(shù)檢測及成脂成骨誘導(dǎo)實驗，分別對MUCMSCS和MBMMSCS進行形態(tài)學(xué)、生長特性、細胞周期、免疫表型CD29、CD34、CD45、CD44和CD11B和多向分化潛能的比較分析采用WESTERNBLOT檢測長期培養(yǎng)中MUCMSCS干性相關(guān)蛋白OCT4、SOX2、SALL4和NANOG表達水平的改變，并比較MUCMSCS和MBMMSCS中干性相關(guān)蛋白（OCT4、SOX2、SALL4、NANOG和ΒCATENIN）表達的差異QRTPCR分析兩者間9種炎癥相關(guān)因子、成脂分化相關(guān)分子ADIPONECTIN和成骨分化相關(guān)分子RUNX2的基因表達差異。以POLYI∶C作為TLR3的激動劑，綜合運用WESTERNBLOT、細胞平板克隆實驗、液相芯片LUMINEX分析和QRTPCR評價POLYI∶C預(yù)處理對MUCMSCS的干性蛋白表達、克隆增殖能力、細胞因子分泌及其基因水平表達的影響。結(jié)果MUCMSCS原代培養(yǎng)612天進行首次傳代，傳至第5至第7代時純化，形態(tài)均一，呈長梭形，至20代時細胞形態(tài)無明顯改變。MUCMSCS在長達60次的傳代培養(yǎng)中，其4種干性相關(guān)蛋白（OCT4、SOX2、SALL4和NANOG）的表達呈一致性的先升高后降低的趨勢，30代以內(nèi)細胞的細胞周期無明顯改變，依然維持較高的增殖潛能。MUCMSCS與MBMMSCS形態(tài)相似，而前者更易純化生長曲線和細胞周期的檢測顯示MUCMSCS的增殖能力低于MBMMSCS流式分析表明，兩者均表達干細胞標記CD29和CD44，不表達造血標記CD34、CD45和單核巨噬細胞標記CD11B兩者均具有成脂和成骨分化潛能，且MUCMSCS的分化效率明顯低于MBMMSCSMUCMSCS中OCT4、SOX2、NANOG和SALL4的蛋白表達顯著強于MBMMSCS，與ΒCATENIN的表達相反MBMMSCS中IL6、IL1Β、TNFΑ、COX2、INOS和CCL5的基因表達都明顯高于MUCMSCS。MUCMSCS經(jīng)POLYI∶C預(yù)處理后，其干性蛋白表達和克隆增殖能力均增強，IL6、IL8、CCL5和CXCL10的基因表達顯著增強，且IL6、CXCL10和MCP1的分泌增加。結(jié)論成功建立了MUCMSCS的分離培養(yǎng)方法，獲得的細胞具備間質(zhì)干細胞的特性，并且能夠長期穩(wěn)定地傳代培養(yǎng)，為小鼠模型中的細胞移植提供新的細胞源。MUCMSCS與MBMMSCS在細胞形態(tài)和免疫表型上具有相似性，而在純化時間、增殖能力、多向分化潛能、干性相關(guān)蛋白和炎癥相關(guān)因子表達上差異明顯，提示在實驗研究中，應(yīng)結(jié)合模型的特點和細胞自身的優(yōu)勢合理選擇細胞源。TLR3活化能夠改善MUCMSCS的相關(guān)特性，將為MUCMSCS的體外優(yōu)化提供新的思路和實驗依據(jù)。

簡介：南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文芹菜素對肝癌細胞生物學(xué)活性的影響及機制研究姓名蔡婧申請學(xué)位級別碩士專業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師劉安文20100601摘要成，細胞周期及細胞凋亡。2、研究芹菜素在體內(nèi)對肝細胞癌HUH7移植瘤生長的抑制作用。方法L、MTT法繪制生長曲線，觀察不同濃度芹菜素對HUH一7細胞生長的影響。2、通過平板克隆形成實驗檢測不同濃度芹菜素對HUH一7細胞克隆形成能力的影響。3、采用PI染色法，流式細胞術(shù)檢測不同濃度芹菜素對HUH7細胞周期分布的影響。4、采用ANNEXINVFITC／PI染色法，流式細胞術(shù)檢測不同濃度芹菜素對HUH一7細胞凋亡狀態(tài)的影響。5、通過動物模型觀察芹菜素對裸鼠人HUH7移植瘤腫瘤體積的影響并通過HE染色在顯微鏡下觀察其病理學(xué)變化。結(jié)果1、從生長曲線可以看出，芹菜素對HUH一7細胞的生長有顯著的抑制作用，并隨著藥物濃度的增加，其抑制作用顯著增強，各組間的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義PO．05。2、平板克隆形成實驗顯示不論從克隆的大小還是克隆的數(shù)目，芹菜素處理組均較對照組明顯下降，差異具有顯著性P0．001。3、芹菜素處理HUH7細胞后細胞周期分布發(fā)生改變，主要表現(xiàn)在G2／M期細胞增加、GO／G1期細胞減少，細胞周期阻滯于G2／M期，隨著藥物濃度的增加，這種周期阻滯作用越顯著，各組間的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義P0．05。4、凋亡檢測實驗發(fā)現(xiàn)芹菜素可誘導(dǎo)細胞凋亡，并呈劑量依賴性，各組間的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義PO．05。5、芹菜素處理的裸鼠腫瘤體積較未用芹菜素處理組明顯縮小PO．05，HE染色可見芹菜素處理組裸鼠腫瘤組織明顯的壞死。結(jié)論芹菜素通過阻滯細胞周期于G2／M期、降低GO／G1期細胞比例以及誘導(dǎo)細胞凋亡而抑制體內(nèi)體外肝細胞癌HUH一7的生長。第二部分芹菜素抑制肝細胞癌HUH．7作用的分子機制研究

簡介：分類號R65111密級一般UDC616006編號2012213593廣州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文廣州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文SIRNA沉默沉默YAP1基因?qū)驅(qū)87MG膠質(zhì)瘤細胞生物學(xué)行為影響及其機制研究膠質(zhì)瘤細胞生物學(xué)行為影響及其機制研究MECHANISMEFFECTOFSILENCINGYAP1GENEEXPRESSIONBYSIRNAONACTERISTICSOFBRAINGLIOMACELLSU87MG研究生熊博韜導(dǎo)師蔣太鵬教授申請學(xué)位級別醫(yī)學(xué)碩士年級2012級學(xué)科專業(yè)外科學(xué)研究方向腦腫瘤基礎(chǔ)與臨床論文提交日期2015年5月論文答辯日期2015年5月學(xué)位類型醫(yī)學(xué)專業(yè)學(xué)位學(xué)位授予單位廣州醫(yī)科大學(xué)答辯委員會主席評議人研究生熊博韜導(dǎo)師蔣太鵬教授申請學(xué)位級別醫(yī)學(xué)碩士年級2012級學(xué)科專業(yè)外科學(xué)研究方向腦腫瘤基礎(chǔ)與臨床論文提交日期2015年5月論文答辯日期2015年5月學(xué)位類型醫(yī)學(xué)專業(yè)學(xué)位學(xué)位授予單位廣州醫(yī)科大學(xué)答辯委員會主席評議人目錄目錄中英對照中英對照1中文摘要中文摘要2英文摘要英文摘要3前言前言4材料與方法材料與方法8結(jié)果結(jié)果15討論討論18全文總結(jié)全文總結(jié)21參考文獻參考文獻22綜述綜述24致謝致謝29原創(chuàng)性聲明原創(chuàng)性聲明30

簡介：第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文EPHA2基因表達及其對人腦星形膠質(zhì)細胞瘤生物學(xué)特性的影響姓名李俠申請學(xué)位級別博士專業(yè)外科學(xué)（神外）指導(dǎo)教師章翔20070501第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文IRSIMMUNOREACTIVITYSCORE免疫反應(yīng)評分KBKILOBASEPAIRS千堿基對LBLURIABERTANIMEDIUMLB培養(yǎng)基MINMINUTE分鐘MTMMPMEMBRANETYPEMATRIXMETALLOPROTEINASE膜型基質(zhì)金屬蛋白酶MRNAMESSENGERRIBONUCLEICACID信使核糖核酸NTNUCLEOTIDE核苷酸PAGEPOLACRYLAMINEGELELECTROPHORESIS聚丙烯酰胺凝膠電泳PBSPHOSPHATEBUFFEREDSALINE磷酸鹽緩沖生理鹽水PCRPOLYMERASECHAINREACTION聚合酶鏈反應(yīng)PDGFRPLATELETDERIVEDGROWTHFACTORRECEPTOR血小板源性生長因子受體PIPROLIFERATIVEINDEX增殖指數(shù)RNAIRNAINTERFERENCERNA干涉RPMROUNDPERMINUTE轉(zhuǎn)每分鐘RTKRECEPTORTYROSINEKINASE受體型酪氨酸激酶RTPCRREVERSETRANSCRIPTIONPCR反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)SECSECOND秒SABCSTREPTAVIDINBIOTINPEROXIDASECOMPLEX鏈霉親和素生物素過氧化物酶復(fù)合物SDSSODIUMDODECOYLSALINE十二烷基磺酸鈉SIRNASMALLINTERFERINGRNA小干涉RNASPSSSTATISTICSPACKAGEFORSOCIALSCIENCE社會科學(xué)統(tǒng)計學(xué)軟件包2

簡介：點擊查看更多病毒抗原蛋白的B細胞表位生物學(xué)研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：目的探討利用大鼠成骨細胞在體外構(gòu)建具有一定機械強度細胞膜片的可行性；探討構(gòu)建膜片對成骨細胞生物學(xué)活性和成骨性的影響。為無支架細胞膜片骨組織工程研究提供一定實驗基礎(chǔ)。方法原代培養(yǎng)大鼠成骨細胞，通過形態(tài)學(xué)觀察，堿性磷酸酶染色，茜素紅染色進行成骨細胞鑒定；在50ΜLML抗壞血酸的培養(yǎng)基中，高密度連續(xù)培養(yǎng)，構(gòu)建成骨細胞膜片；倒置顯微鏡、HE染色、掃描電鏡進行形態(tài)學(xué)觀察檢測；成骨細胞接種后，實驗組培養(yǎng)基中添加50ΜLML抗壞血酸，對照組常規(guī)培養(yǎng)，分別于1周，2周，3周行MTT檢測，組織學(xué)厚度測量分析，堿性磷酸酶ALP活性測定，REALTIMEPCR檢測成骨相關(guān)基因COL、OCN表達情況，對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析，A005P結(jié)果原代培養(yǎng)的成骨細胞形態(tài)觀察、堿性磷酸酶、茜素紅染色鑒定符合成骨細胞特性。通過連續(xù)培養(yǎng)后機械刮取的方法獲得成骨細胞膜片。膜片測量厚度結(jié)果顯示第1周至第2周是膜片厚度增加最顯著的時間段，平均厚度可達384±21ΜM。MTT結(jié)果顯示實驗組培養(yǎng)1周，2周后，細胞增殖率明顯高于對照組，且細胞增殖率隨時間的增加而上升。3周后，實驗組細胞增值率低于對照組。ALP結(jié)果顯示實驗組ALP明顯高于對照組，第2周相對于第1周酶活性降低?；驒z測結(jié)果提示實驗組成骨細胞內(nèi)COL、OC基因表達高于對照組，實驗組間結(jié)論抗壞血酸誘導(dǎo)，高密度接種，連續(xù)培養(yǎng)可以構(gòu)建出成骨細胞膜片；抗壞酸酸促進細胞增殖，促進堿性磷酸酶分泌，促進細胞片形成；成骨細胞構(gòu)建細胞膜片后成骨性明顯提高，第1周至第2周成骨細胞膜片活性最佳；抗壞血酸上調(diào)COL、OCMRNA表達，第2周、第3周成骨細胞膜片內(nèi)細胞進入成熟階段，膜片具有成骨潛力。

簡介：東南大學(xué)碩士學(xué)位論文MTSS1在肝癌細胞系中的生物學(xué)功能的研究姓名張鳳申請學(xué)位級別碩士專業(yè)遺傳學(xué)指導(dǎo)教師樊紅20090525英文摘要英文摘要RESEARCHONTHEBIOLOGICALFUNCTIONOFMTSSLINHEPATOCEⅡULARCARCINOGENESISNAMEZHANGFENGTUTORFANHONGKEYLABORATORYOFDEVELOPMENTALANDHUMANDISEASESMINISTRYOFEDUCATIONDEPT．GENETICSDEVELOP．BIOLOGYSOUTHEASTUNIVERSITYMEDICALSCHOOLOBJECTIVETOSTUDYTHEPOTENTIALMECHANISMOFDNMT3BREGULATESMTSSLEXPRESSION，ANDEXPLORESBIOLOGICALFUNCTIONSOFMTSSLINTHEHEPATOCELLULARCARCINOGENESISCELLLINES．METHODSCHIPWASUSEDTOTESTWHETHERORNOTDNMT3BCOMBINEWITHPROMOTEROFMTSS1DIRECTLY,LUCIFERASEASSAYWASUSEDTODETECTTHISBINDINGEFFECTONTHEACTIVITYOFMTSSIPROMOTOR．STABLEMTSSLINHIBITEDCELLLINESSMMC7721，WHICHISTRANSFECTEDWITHMTSSLSIRNARECOMBINANTANDCORRESPONDINGCONTROLCELLSWERESELECTEDBYG418，RESPECTIVELY．STABLEMTSSLOVEREXPRESSIONCELLLINESQGY7703ANDNIH3T3TRANSFECTEDWITHPCDNA3．IMTSSLRECOMBINANTWEREGORENBYG418SELECTION，RESPECTIVELY．MTTWASUSEDTOEVALUATECELLGROWTHCULWEOFTHEDNMT3BINHIBITEDEELLLINESANDTHEIRCONTROLS．HOWCYTOMCTRYWASUSEDTODETECTCEHCYCLEINMTSSLDOWNEXPRESSIONANDOVCREXPRESSIONCELLLINESANDTHEIRCONTROLS，RESPECTIVELY．COLONYFORMINGASSAYSWELEUSEDTODETECTTHECOLONYFORMINGABILITYOFTHESECELLLINES．RESULTSDNMT3BCOMBINEWITHMTSSLPROMOTORAT864／645REGIONANDINHIBITTHEACTIVITYOFTHEPROMOTOR．THECELLPROLIFERATIONCAPACITYISNOSIGNIFICANTDIFFERENCESBETWEENMTSSIKNOCKDOWN／OVEREXPRESSIONCELLSANDTHEIRCONTROLPO．05．AFTERSUPPRESSINGTHEEXPRESSIONOFMTSSIINSMMC7721，THECELLSARCRELEASEDING2MPHASEQO．01．HOWEVER,UPREGULATINGTHEEXPRESSIONOFMTSSLINQGY7703，THECELLSAREARRESTEDING2MPHASE臟O．01．THECOLONYFORMINGABILITYOF772IMTSSIRNAICELLLINEISSTRONGERTHANTHATOFCONTROLP0．01．THECOLONYFORMINGABILITYOF7703MTSSLCELLLINEISWEAKENTHANTHATOFCONTROLO0．01．NOMORECOLONYFORMATIONISFOUNDINNIH313CELLSWHICHARETRANSFECTEDWITHPEDNA3．0MTSS1．CONCLUSIONDNMT3BBINDTOTHEPROMOTEROFMTSSLANDINHIBITITSACTIVITY．MTSSLMAYAFFECTCELLCYCLEANDTHECOLONYFORMINGABILITYINHEPATOCELLULARCARCINOGENESISANDDEVELOPMENT．KEYWORDSMTSSL；HEPATOCELLULARCARCINOMA；CHIP；DNMT3BII

簡介：天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文線粒體及雌激素在乳腺癌細胞生物學(xué)行為中的作用研究姓名孫玉蘭申請學(xué)位級別博士專業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師付麗20080501天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文缺失，和其母本MDAMB231細胞相比，RHOOMDAMB231細胞線粒體數(shù)量增多，體積增大；細胞增殖能力、細胞遷移能力和集落形成能力增強；線粒體膜電位下降；對化療藥物相對抵抗，耐藥相關(guān)蛋白表達增強。3雌激素促進MDAMB231細胞增殖，但無明顯劑量依賴性趨勢，抑韋LJRHOOMDAMB231細胞增殖，且表現(xiàn)為劑量依賴性趨勢；雌激素作用后，RHOOMDAMB231細胞呈現(xiàn)G2／M期阻滯，線粒體腫脹和髓鞘樣變，而MDAMB231細胞則積聚于S期，同時伴隨粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張，核糖體顆粒增多。4雌激素干預(yù)后，MCF7細胞MTDNA編碼ND4、ND4L及COXII基因上調(diào)表達，而MDAMB一231細胞MTDNA基因無明顯差異表達。結(jié)論1成功誘導(dǎo)建立了MTDNA缺失的人乳腺癌細胞RHOOMDAMB231。2線粒體損傷可能參與MDAMB23L細胞惡性表型和耐藥表型的形成。3雌激素除了通過核ER途徑發(fā)揮作用，可能尚有線粒體／MTDNA參與的其他信號通路存在。關(guān)鍵詞線粒體線粒體DNA；雌激素；雌激素受體乳腺癌；惡性表型；多藥耐藥

簡介：四川大學(xué)碩士學(xué)位論文口腔癌相關(guān)成纖維細胞對血管內(nèi)皮細胞生物學(xué)特性的影響姓名宋惠云申請學(xué)位級別碩士專業(yè)口腔臨床醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師周紅梅20070501四川大學(xué)華西口腔醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文EPCFNUPAENDOTHELIALPROGENITORCELLSFIBRONECTINUROKINASEPLASMINOGENACTIVATORFAPFIBROBLASTACTIVATIONPROTEINTGF13TRANSFORMINGGROWTHFACTORS13ETENDOTHELIN2內(nèi)皮祖細胞纖連蛋白尿激酶纖維蛋白溶酶原激活劑成纖維細胞活化蛋白轉(zhuǎn)化生長因子內(nèi)皮素

簡介：背景糖尿病足是指與下肢遠端神經(jīng)異常和不同程度的周圍血管病變相關(guān)的足部感染、潰瘍和或深層組織破壞。由于糖尿病足發(fā)病率高、治療費用貴、傷口難以愈合且容易復(fù)發(fā)其發(fā)病機制和治療方法一直是基礎(chǔ)與臨床研究的重點和熱點。近年來國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)基質(zhì)金屬蛋白酶9MATRIXMETALLOPROTEINASE9MMP9與糖尿病足潰瘍之間關(guān)系密切。MULLER等人發(fā)現(xiàn)糖尿病足患者潰瘍滲出液中MMP9水平較正常人升高。本課題組的前期研究也發(fā)現(xiàn)①糖尿病大鼠皮膚組織尚未受創(chuàng)時就已經(jīng)出現(xiàn)皮膚“隱性損害”而且與高水平的MMP9關(guān)系密切；②與非糖尿病大鼠相比糖尿病大鼠皮膚傷口愈合過程MMP9的水平明顯升高。目前普遍認為高水平的MMP9主要是通過過度降解細胞外基質(zhì)、生長因子、生長因子受體、整合素及其受體以及加重傷口局部炎癥反應(yīng)等方面來減慢糖尿病足潰瘍的愈合。對于MMP9是否還可以通過影響皮膚成纖維細胞的生物學(xué)行為來影響傷口愈合目前國內(nèi)外未見相關(guān)文獻報道。皮膚成纖維細胞是傷口修復(fù)的重要效應(yīng)細胞任何能夠影響其生物學(xué)特性的因素最終都將會影響到傷口的愈合。為探討MMP9在糖尿病足傷口愈合中可能的新機制本課題選擇大鼠皮膚成纖維細胞為研究對象體外給予不同濃度的糖和同型半胱氨酸刺激制備高分泌MMP9細胞模型探討高分泌MMP9情況下皮膚成纖維細胞生物學(xué)行為的變化同時觀察通過組織金屬蛋白酶抑制劑1TIMP1抑制MMP9的活性能否改善成纖維細胞的生物學(xué)行為。本課題的研究將為探討糖尿病皮膚傷口的難愈機制提供實驗依據(jù)也將為尋找糖尿病足的治療方法提供新的思路。目的⑴建立體外高表達MMP9皮膚成纖維細胞模型為后續(xù)的研究奠定基礎(chǔ)。⑵觀察高表達MMP9皮膚成纖維細胞的生物學(xué)行為和TIMP1的干預(yù)效果以探討MMP9對大鼠皮膚成纖維細胞生物學(xué)行為的影響。方法①分別用正糖55MMOLL、高糖220MMOLL和高糖220MMOLL高同型半胱氨酸100ΜMOLL培養(yǎng)大鼠皮膚成纖維細胞檢測各組細胞MMP9MRNAREALTIMERTPCR法和蛋白ELISA法表達量以及MMP9蛋白的活性明膠酶譜法篩選出MMP9表達量及活性最高的組作為模型組進行后續(xù)實驗。②采用流式細胞術(shù)檢測細胞增殖功能；CCK8檢測細胞活力；ELISA法檢測細胞膠原羥脯氨酸分泌能力；劃痕實驗評價細胞橫向遷移能力；TRANSWELL法評價細胞縱向遷移能力。結(jié)果⑴高糖高同型半胱氨酸組MMP9MRNA的表達量705±102蛋白的表達量2069±336PGML以及MMP9蛋白活性147±013均明顯高于正糖組分別為100±000、404±59PGML、057±012和高糖組分別為283±091、737±58PGML、092±011P均005。MMP9蛋白活性043±013卻較非干預(yù)組147±013明顯降低P結(jié)論①高糖高同型半胱氨酸聯(lián)合培養(yǎng)可成功建立體外高表達MMP9皮膚成纖維細胞模型。②高表達MMP9皮膚成纖維細胞增殖減慢、活力下降、遷移和膠原分泌能力降低提示MMP9可影響成纖維細胞的生物學(xué)行為。③外源性TIMP1作用下高表達MMP9皮膚成纖維細胞生物學(xué)行為明顯改善提示抑制MMP9的活性有可能改善糖尿病足的傷口愈合。

簡介：點擊查看更多缺氧誘導(dǎo)因子-2α、VEGF與非小細胞肺癌中微血管生成及生物學(xué)轉(zhuǎn)移的關(guān)系.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：目的體外培養(yǎng)人胚胎骨髓間充質(zhì)干細胞HUMANMESENCHYMALSTEMCELL，HMSCS，通過HMSCS在精原細胞培養(yǎng)條件下的生物學(xué)特征研究，探討人骨髓間充質(zhì)干細胞誘導(dǎo)分化為精原細胞的可行性，為HMSCS作為“種子細胞”開辟新的途徑。方法1骨髓間充質(zhì)干細胞的分離純化、培養(yǎng)與鑒定無菌條件下取出脛骨，沖出骨髓液，以FICOLL密度梯度和差速貼壁相結(jié)合的方法分離、培養(yǎng)HMSCS。待細胞鋪滿瓶底面積的70％80％，即進行細胞傳代培養(yǎng)。025％胰蛋白酶002％EDTA消化，離心，重懸細胞并按13的比例進行傳代接種培養(yǎng)，并分別用P2、P3、P4等表示傳代次數(shù)。實驗結(jié)果通過下列方法鑒定1倒置顯微鏡下觀察細胞的生物學(xué)行為變化；2繪制HMSCS的生長曲線選取生長良好的第2、4、9代細胞用025％胰酶消化后以1104ML接種于96孔培養(yǎng)板內(nèi)培養(yǎng)，并從第2天起，每天在固定時間，選用5孔細胞分別加入5MGML的MTT20ΜL，混勻，孵育4H后棄培養(yǎng)液，加入150ΜL二甲基亞砜，用酶聯(lián)免疫檢測儀在490NM波長處測其OD值，取平均值，連續(xù)6D，以時間為橫軸、OD值為縱軸繪制不同代細胞的生長曲線；3組織學(xué)染色將第三代的細胞培養(yǎng)4天后經(jīng)4％多聚甲醛固定并作常規(guī)蘇木精伊紅HE染色；4CD44、CD105免疫組化檢測將第三代細胞培養(yǎng)3天后，經(jīng)4％多聚甲醛固定并檢測細胞表面特異性分子標記。2人胚胎MSCS在精原細胞培養(yǎng)條件下培養(yǎng)及檢測1人胚胎MSCS在精原細胞培養(yǎng)條件下培養(yǎng)取生長良好的第三代HMSCS，用025％的胰酶002％EDTA消化，制成單細胞懸液，將其加入24孔培養(yǎng)板中，每孔加入濃度約為4104ML的細胞懸液1ML，將其隨機分組進行培養(yǎng)。對照組用普通培養(yǎng)基DMEM100UML青霉素100UML鏈霉素10％胎牛血清培養(yǎng)，34D換液一次，共培養(yǎng)15D；實驗組用條件培養(yǎng)基普通培養(yǎng)基中添加1％人絕經(jīng)期促性腺激素HUMANMENOPAUSALGONADOTROPIN，HMG01UML胰島素01GL維生素A01GL維生素E1％谷氨酰胺1％非必需氨基酸1％丙酮酸鈉誘導(dǎo)培養(yǎng)HMSCS，34D換液一次，共培養(yǎng)15D。2人胚胎MSCS在精原細胞培養(yǎng)條件下培養(yǎng)后結(jié)果檢測在倒置相差顯微鏡下觀察細胞的形態(tài)學(xué)變化并拍照記錄，待細胞培養(yǎng)至第15D，采用SP法進行細胞免疫組織化學(xué)檢測，并嚴格按照說明進行實驗操作，封片、鏡檢并拍照記錄。結(jié)果1原代培養(yǎng)的人胎兒骨髓MSCS在基礎(chǔ)培養(yǎng)條件下，培養(yǎng)4H后開始變形貼附，經(jīng)過約4D的靜止期后，于培養(yǎng)第5D后開始進入快速增殖階段，即對數(shù)增殖期，此時可見細胞折光性增強，呈旋渦狀或巢狀生長，細胞突起明顯增長，相互交織，培養(yǎng)至910天即可鋪滿瓶壁。待傳至第三代時，細胞形態(tài)趨于一致。此時HMSCS靜止期縮短，培養(yǎng)23D即進入快速增殖期，第5D起，細胞生長逐漸緩慢，開始進入平臺期。HE染色可見細胞呈長梭行，胞質(zhì)豐富，核大，單個，圓形或橢圓形，位于細胞中央。免疫組化檢測結(jié)果顯示CD44、CD105呈陽性表達，OCT4、CKIT呈陰性。2人胚胎MSCS在精原細胞培養(yǎng)條件下培養(yǎng)結(jié)果實驗組培養(yǎng)過程中細胞大量死亡、脫落，而存活的細胞形態(tài)逐漸發(fā)生改變，于培養(yǎng)第15天時可見細胞突起變少變短，有的甚至看不到突起，胞體由長梭形變成圓形或橢圓形。免疫組織化學(xué)顯示此時的細胞膜和細胞質(zhì)OCT4、CKIT染色呈陽性，而CD44、CD105呈陰性表達。對照組培養(yǎng)至第15天，細胞形態(tài)無明顯變化，免疫組織化學(xué)檢測OCT4、CKIT染色呈陰性，CD44和CD105呈陽性。結(jié)論1FICOLL密度梯度和差速貼壁相結(jié)合的方法可獲得純化的HMSCS，通過傳代培養(yǎng)，培養(yǎng)至第10代，細胞仍生長良好，未出現(xiàn)老化現(xiàn)象，從而成功地建立了HMSCS的體外培養(yǎng)體系；2通過不同代細胞生長曲線的研究，發(fā)現(xiàn)傳至第三代的人胚胎MSCS純度高、增殖能力強，是實驗選用的理想細胞；3倒置顯微鏡下細胞生物學(xué)行為觀察、HE染色、特異免疫組化顯示表面分子標志物CD44、CD105為陽性表達等方法有助于鑒定HMSCS；4人胚胎MSCS在精原細胞培養(yǎng)條件下誘導(dǎo)培養(yǎng)，細胞形態(tài)發(fā)生變化，細胞突起變少變短，甚至看不到突起，胞體由長梭形變成圓形或橢圓形。免疫組織化學(xué)顯示此時的細胞膜和細胞質(zhì)OCT4、CKIT染色呈陽性，而CD44、CD105呈陰性表達，表明HMSCS在一定條件下，能表現(xiàn)出精原細胞的某些生物學(xué)特征。提示HMSCS具有轉(zhuǎn)分化為生精細胞的可能性。

簡介：目的探討HMGA1SIRNA對人肝星狀細胞LX2中HMGA1、ASMA、ECAD基因的表達調(diào)控作用及增殖活性的影響并探討其可能的機制。方法1選擇體外培養(yǎng)LX2細胞作為研究對象分別設(shè)立以下六組①正常對照組②空白對照組③陰性對照組④轉(zhuǎn)染HMGA1SIRNA1⑤轉(zhuǎn)染HMGA1SIRNA2⑥轉(zhuǎn)染HMGA1SIRNA3。轉(zhuǎn)染48H后收集各組細胞。采用半定量RTPCR檢測和WESTERNBLOT印跡法檢測HMGA1的MRNA和蛋白表達篩選出干擾效果最佳的SIRNA序列。2選擇體外培養(yǎng)LX2細胞作為研究對象加入不同濃度的TGFΒ1終濃度1NGML、5NGML、10NGML孵育并配對照組。于24H后收集細胞提取LX2細胞總RNA及總蛋白。用半定量RTPCR及WESTERNBLOT印跡方法檢測TGFΒ1對LX2細胞HMGA1的MRNA和蛋白表達的影響。3采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法對LX2細胞進行HMGA1SIRNA瞬時轉(zhuǎn)染將細胞分為4組①正常對照組、②TGFΒ1刺激組、③TGFΒ1NCSIRNA組和④TGFΒ1HMGA1SIRNA組。采用半定量RTPCR及WESTERNBLOT印跡法對LX2細胞中HMGA1、ΑSMA和ECAD的MRNA及蛋白表達水平進行檢測采用MTT法對LX2細胞增殖水平進行檢測。結(jié)果1半定量RTPCR和WESTERNBLOT印跡法檢測HMGA1的表達與正常對照組、空白對照組、陰性對照組相比3個干擾組細胞HMGA1基因和蛋白表達水平均明顯降低P﹤005其中干擾組HMGA1SIRNA1的干擾效果最好P﹤001。2隨著TGFΒ1劑量加大HMGA1基因表達水平逐漸升高各組間也有顯著差異P﹤005。3TGFΒ1刺激組與TGFΒ1NCSIRNA組之間細胞增殖水平及HMGA1、ΑSMA、ECAD的基因及蛋白表達水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義P﹥005細胞增殖水平及HMGA1、ΑSMA表達均明顯高于正常對照組P﹤005ECAD表達顯著低于正常對照組P﹤005而TGFΒ1HMGA1SIRNA組細胞增殖水平及HMGA1、ΑSMA的基因及蛋白表達水平與TGFΒ1刺激組及TGFΒ1NCSIRNA組相比均顯著下降P﹤005ECAD表達水平顯著增高P﹤005。結(jié)論1靶向HMGA1的SIRNA能夠沉默人肝星狀細胞LX2中HMGA1的表達以HMGA1SIRNA序列1組沉默效果最好。2TGFΒ1作用于人肝星狀細胞LX2對HMGA1基因表達有顯著的上調(diào)作用。3干擾HMGA1基因可顯著抑制TGFΒ1對人肝星狀細胞LX2中ΑSMA基因和蛋白表達的促進作用同時也可減輕對ECAD表達的抑制作用抑制TGFΒ1誘導(dǎo)的人肝星狀細胞LX2增殖水平的升高提示其參與了TGFΒ1誘導(dǎo)的肝星狀細胞活化。

簡介：中山大學(xué)碩士學(xué)位論文AOPP對人牙齦成纖維細胞的生物學(xué)作用姓名蘇小鵬申請學(xué)位級別碩士專業(yè)口腔臨床醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師付云20080527AOPP對人牙齦成纖維細胞的生物學(xué)作用中山大學(xué)碩士學(xué)位論文的影響。④取第4代生長良好的HGF，胰酶消化后以1O105個／ML等量接種于24孔培養(yǎng)板中。當細胞長至相互融合時，分別加入含有100、50、5、05肛G／MLAOPPHSA含2％FBS的DMEM共培養(yǎng)72H后，收集各組細胞上清液，6000R／MIN，30MIN以去除細胞殘渣，用ELISA測定上清液中MMP一1的水平。結(jié)果①HGF最早在第4D從組織塊中爬出，大多呈梭形，胞漿豐滿，核仁清晰。一般10～15D長滿瓶底，可進行傳代。細胞生長曲線符合HGF生長特點，免疫組化結(jié)果顯示HGF波形絲蛋白染色陽性，角蛋白染色陰性，提示該細胞來源于中胚層，非上皮來源的細胞。AOPPHSA樣本為棕黃色，經(jīng)測定內(nèi)毒索含量均0025EU／ML，利用酸性條件下340NM處其吸光度值測得AOPPHSA濃度為48M咖L。②MTR結(jié)果顯示分別在復(fù)合培養(yǎng)的第1、2、3D，各濃度組AOPPHSA抑制HGF增殖，抑制率隨著濃度增加而升高，組間兩兩比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義尸≮O05，但50UG／ML和100UG／ML兩組抑制率在共培養(yǎng)第3D無統(tǒng)計學(xué)差異。50U∥ML和100UG／ML兩組抑制率存在時問差異性，在共培養(yǎng)的第2D達到最高氏005，而5U∥ML組抑制率隨時間變化無統(tǒng)計學(xué)差異。③加入AOPPHSA的無血清DMEM誘導(dǎo)72H后，A11ILEXINVPI雙染，流式細胞儀所形成的散點圖上實驗組比之對照組凋亡率有輕度增加，但兩者比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義胗005。④ELISA結(jié)果統(tǒng)計分析顯示AOPPHSA各濃度組HGF中MMP1的合成量都高于對照組尸005。另外，不同濃度組之間MMPL的合成量亦存在差異尸005，其合成量隨著AOPP濃度升高而增加。結(jié)論①AOPP可能通過抑制HGF增殖，影響牙周組織修復(fù)能力而促進DM時牙周病的發(fā)展。該實驗中未觀察到AOPP對HGF凋亡的影響，提示AOPP對HGF增殖的抑制作用可能是通過其它途徑或方式來實現(xiàn)的。②AOPP可能通過促進MMP1合成，導(dǎo)致膠原降解，而介導(dǎo)DM時氧化應(yīng)激所導(dǎo)致的牙周組織破壞，推測該作用可能是通過直接或間接激活單核細胞作用于HGF兩條途徑來實現(xiàn)，但具體機制尚需進一步探討。關(guān)鍵詞牙齦成纖維細胞，晚期蛋白氧化產(chǎn)物，增殖，基質(zhì)金屬蛋白酶一L