簡(jiǎn)介：作者姓名學(xué)科專業(yè)導(dǎo)師指導(dǎo)教師張曉梅消化系病楊云生郭明洲裴雪濤／答辯委員會(huì)主席釤＼，教授研究員論文答辯日期二。一。年五月十九日院校地址北京市復(fù)興路28號(hào)郵政編碼100853軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院。Y1111111111171111911171111161117111161111研究生學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明秉承我院“敬業(yè)、勤奮、求實(shí)、創(chuàng)新”的學(xué)風(fēng)，本人聲明所呈交的論文是我本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不含為獲得我院或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位及證書而使用過(guò)的材料，對(duì)本文的研究作出貢獻(xiàn)的個(gè)人或集體，均已在文中做了明確的說(shuō)明并表示謝意。申請(qǐng)學(xué)位論文與資料若有不實(shí)之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。論文作者簽名；‘嚎坰同期XZ年戶月哆日指導(dǎo)教師簽冬J≥銘日期糾暉J明少日軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院研究生學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人保證畢業(yè)離院后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時(shí)署名單位為軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院或解放軍總醫(yī)院。學(xué)院有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文原件、復(fù)印件和電子版本，可以采用影印、縮印、掃描或其它手段保存論文以供被查閱和借閱。學(xué)院可以公布學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容保密內(nèi)容除外。論文作者簽名；髟同期。『O每，爿羅日指剝幣簽螄期如年弓矽日

簡(jiǎn)介：蘇州大學(xué)碩士學(xué)位論文INV16急性髓細(xì)胞白血病的分子細(xì)胞遺傳學(xué)研究姓名李明申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)血液內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師薛永權(quán)20030501LNV16急中_衄細(xì)胞由L札塒的分R圳胞遺傳學(xué)LJF究INV16AML的價(jià)值③為提高INV16的檢出率，對(duì)所有AML均應(yīng)采用FISH和／或RTPCR進(jìn)行篩選，而不論其是否伴有骨髓嗜酸性粒細(xì)胞異常。關(guān)鍵詞白血病，髓細(xì)胞，急性；16號(hào)染色體倒位；熒光原位雜交；細(xì)胞遺傳學(xué)；CBFL3／MYHLL融合基因；逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)著絲粒探針碩士研究生李明指導(dǎo)教師薛永僅

簡(jiǎn)介：目的手足縱向括弧型骨骺LONGITUDINALEPIPHYSEALBRACKETLEB是一種罕見(jiàn)的導(dǎo)致手指或足趾畸形的遺傳病。本實(shí)驗(yàn)研究通過(guò)隨訪一個(gè)遺傳家系，用染色體核型分析及比較基因組雜交對(duì)LEB進(jìn)行遺傳學(xué)初步研究。方法通過(guò)隨訪先證者，調(diào)查一個(gè)手足縱向括弧型骨骺遺傳家系，繪制遺傳圖譜。經(jīng)家庭成員知情同意后，抽取該家系成員三代6人3名患者外周血備用。對(duì)所獲取標(biāo)本進(jìn)行如下處理1提取外周血中血細(xì)胞，采用常規(guī)方法，經(jīng)植物凝集素PHA及秋水仙素處理后，行染色體核型分析。2用試劑盒提取外周血DNA，用紫外分光光度計(jì)對(duì)DNA樣本進(jìn)行檢測(cè)，樣本濃度及純度OD260280達(dá)標(biāo)后，DNA樣本在遺傳學(xué)專業(yè)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行比較基因組雜交實(shí)驗(yàn)COMPARATIVEGENOMEHYBRIDIZATIONCGH。3用試劑盒提取外周血DNA，經(jīng)質(zhì)量檢測(cè)所提取DNA樣本濃度及純度OD260280達(dá)標(biāo)后，進(jìn)一步運(yùn)用基因芯片技術(shù)如單核苷酸多態(tài)性SINGLENUCLEOTIDEPOLYMPHISMSNP、全基因組外顯子測(cè)序等，尋找并定位候選致病基因。結(jié)果成功繪制出該家系系譜分析圖染色體核型分析發(fā)現(xiàn)染色體數(shù)目無(wú)明顯異常，無(wú)染色體易位、倒位等異常，比較基因組雜交實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示未發(fā)現(xiàn)染色體片段的重復(fù)與缺失，單核苷酸多態(tài)性檢查結(jié)果尚未得出。結(jié)論根據(jù)家系系譜圖及既往文獻(xiàn)報(bào)道，LEB可能為常染色體隱性遺傳，根據(jù)染色體核型分析及比較基因組雜交結(jié)果，未發(fā)現(xiàn)染色體數(shù)目變異，未發(fā)現(xiàn)染色體易位、倒位等異常，未發(fā)現(xiàn)染色體片段的重復(fù)與缺失。為進(jìn)一步揭示LEB遺傳機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多系統(tǒng)性紅斑狼瘡的遺傳流行病學(xué)研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：最近十幾年血壓研究中采用遙控測(cè)壓技術(shù)是一個(gè)重要進(jìn)展。該技術(shù)現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于幾乎所有的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。美國(guó)心臟學(xué)會(huì)AHA在2005年的動(dòng)物血壓測(cè)量指南中明確推薦遙控測(cè)壓方法適用于血壓波動(dòng)性測(cè)量。我們的實(shí)驗(yàn)中也采用遙控測(cè)壓技術(shù)來(lái)獲取血壓波動(dòng)性表型數(shù)據(jù)。遙控測(cè)壓探頭作為該技術(shù)的核心元件其穩(wěn)定性是否可靠對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果至關(guān)重要。在實(shí)驗(yàn)中觀察到隨時(shí)間推移遙控測(cè)壓探頭定標(biāo)參數(shù)零點(diǎn)漂移值OFFSET和壓力敏感度SCALE會(huì)發(fā)生變化為了準(zhǔn)確校正數(shù)據(jù)在每次植入實(shí)驗(yàn)前和取出測(cè)壓探頭后應(yīng)立即對(duì)測(cè)壓探頭進(jìn)行定標(biāo)。同時(shí)在實(shí)驗(yàn)中VANVLIET等發(fā)現(xiàn)環(huán)境溫度對(duì)測(cè)壓探頭定標(biāo)參數(shù)有影響。通常將遙控測(cè)壓探頭導(dǎo)管植入大鼠腹主動(dòng)脈術(shù)后大鼠恢復(fù)到正常狀態(tài)所需時(shí)間取決于麻醉的種類、手術(shù)的程度和大鼠品系利用不同的評(píng)估指標(biāo)確定SPRAGUEDAWLEY大鼠完全恢復(fù)所需時(shí)間為3到12天。盡管已發(fā)現(xiàn)溫度可影響測(cè)壓探頭的定標(biāo)但是測(cè)壓探頭的零點(diǎn)漂移值和壓力敏感度在常溫25℃和接近生理溫度的37℃下的具體變化情況還未見(jiàn)報(bào)道。此外現(xiàn)在還沒(méi)有自發(fā)性高血壓大鼠SHR測(cè)壓探頭植入術(shù)后恢復(fù)時(shí)間的研究報(bào)道。血壓波動(dòng)性BLOODPRESSUREVARIABILITYBPV是隨血壓動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)技術(shù)發(fā)展應(yīng)運(yùn)而生的新概念。含義是血壓不是恒定的而是連續(xù)可變的這種變化程度稱為BPV。初期小規(guī)模臨床觀察顯示血壓和BPV均與高血壓患者的器官損傷相關(guān)均可預(yù)測(cè)高血壓患者的器官損傷。在自發(fā)性高血壓大鼠SPONTANEOUSLYHYPERTENSIVERATSSHR研究中證實(shí)了這一現(xiàn)象。隨后在確認(rèn)去竇弓神經(jīng)大鼠為單純性BPV升高不伴有持續(xù)高血壓動(dòng)物模型基礎(chǔ)上展開(kāi)研究。直接證明BPV升高即血壓不穩(wěn)定可導(dǎo)致心、腎、腦、血管等多個(gè)終末器官損傷。首次發(fā)現(xiàn)高BPV因素與高血壓因素的敏感器官可以不同BPV的較敏感器官為主動(dòng)脈等大血管高血壓的較敏感器官為左心室和組織內(nèi)小血管從而明確指出高BPV是心血管損傷的獨(dú)立危險(xiǎn)因素不依賴于高血壓因素。在一項(xiàng)研究中闡明高BPV在心血管損傷中的意義至少和高血壓同等重要。同時(shí)幾項(xiàng)大規(guī)模臨床研究結(jié)論與我們實(shí)驗(yàn)室的研究結(jié)果不謀而合。例如1542例總體人群85年的隨訪研究表明BPV是總體人群心血管死亡的獨(dú)立預(yù)測(cè)指標(biāo)BPV升高可使總體人群心血管死亡可能性增加23倍。以上我們實(shí)驗(yàn)室的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究和國(guó)外大規(guī)模臨床研究均提示BPV升高是獨(dú)立而重要的心血管危險(xiǎn)因子。鑒于此我們提出降低BPV即穩(wěn)定血壓可作為心血管疾病防治新策略。那么如何降低BPV重要的途徑是發(fā)展能降低BPV的藥物。但是這是一項(xiàng)艱巨的任務(wù)因?yàn)锽PV的分子基礎(chǔ)目前不清楚。因此為了發(fā)展本身能降低BPV的藥物需要研究BPV的基因調(diào)控機(jī)制。研究策略之一就是通過(guò)對(duì)BPV表型遺傳研究篩選相關(guān)調(diào)控染色體部位確認(rèn)調(diào)控基因以及功能作用途徑。本課題主要開(kāi)展了以下研究1首先研究了測(cè)壓探頭在25℃和37℃兩個(gè)溫度下定標(biāo)情況并在SHR及其正常對(duì)照WKY大鼠上比較了探頭植入術(shù)后7天與14天的血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)和活動(dòng)度以確定SHR術(shù)后恢復(fù)時(shí)間。2采用雜交動(dòng)物模型在親本W(wǎng)KYSHR、F1、F2子代大鼠上測(cè)量BPV表型計(jì)算BPV表型遺傳決定度估算影響B(tài)PV的基因座數(shù)目。3對(duì)大鼠左右心室分別稱重計(jì)算心室肥厚指數(shù)與所得血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)進(jìn)行兩兩相關(guān)分析和多元回歸分析。第一部分大鼠遙控測(cè)壓技術(shù)應(yīng)用實(shí)驗(yàn)一在一年期間內(nèi)測(cè)定了探頭在25℃和37℃時(shí)零點(diǎn)漂移值和壓力敏感度。在兩個(gè)不同溫度下開(kāi)始時(shí)測(cè)壓探頭的零點(diǎn)漂移值之間差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義而壓力敏感度之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；一年后測(cè)壓探頭的零點(diǎn)漂移值之間、壓力敏感度之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。一年中隨著使用時(shí)間和次數(shù)增加測(cè)壓探頭的零點(diǎn)漂移值向負(fù)值發(fā)展從80±13MMHG到148±16MMHG壓力敏感度變化不大從244±03％到184±02％。實(shí)驗(yàn)二SHR及其正常對(duì)照WISTARKYOTOWKY大鼠在探頭植入術(shù)后第7天和第14天分別記錄22小時(shí)血流動(dòng)力學(xué)和活動(dòng)度指標(biāo)。WKY、SHR的活動(dòng)度和晝夜活動(dòng)度差值在第14天與第7天之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義但收縮壓、舒張壓和平均動(dòng)脈壓在第14天的測(cè)量值高于第7天有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；SHR的收縮壓波動(dòng)性、舒張壓波動(dòng)性、晝夜心率差值在第14天的測(cè)量值高于第7天有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義而WKY的這些指標(biāo)在第14天與第7天之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。第二部分大鼠血壓波動(dòng)性遺傳學(xué)研究實(shí)驗(yàn)一遺傳學(xué)研究動(dòng)物選用。已知自發(fā)性高血壓大鼠SHR與WISTARKYOTO大鼠WKY的血壓波動(dòng)性表型差異明顯。因此本研究以SHR和WKY大鼠作為研究親代動(dòng)物。1214周齡親代動(dòng)物血壓選擇標(biāo)準(zhǔn)為收縮壓SHR150MMHGWKY150MMHG。雜交動(dòng)物繁殖。雄性SHR與雌性WKY大鼠12交配獲得F1子代F1子代雄性與雌性隨機(jī)兄妹交配產(chǎn)生F2子代。交配周齡均為1214周每窩數(shù)量在1115只的動(dòng)物方用于繁殖子代。采用2630周齡雄性動(dòng)物進(jìn)行血壓波動(dòng)性表型測(cè)量。最終所得樣本量為17例SHR、19例WKY、29例F1、167例F2。實(shí)驗(yàn)二血壓波動(dòng)性表型測(cè)量。采用目前最先進(jìn)的血壓遙控測(cè)量技術(shù)在清醒自由活動(dòng)大鼠上記錄28小時(shí)表型值。所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在環(huán)境控制室23±1℃光照黑暗12小時(shí)12小時(shí)濕度50±5％預(yù)適應(yīng)2周再進(jìn)行血壓波動(dòng)性表型測(cè)量。廣義遺傳決定程度DEGREEOFGEICDETERMINATIONDGD計(jì)算公式DGDVTVEVT其中VT代表環(huán)境變異加上遺傳變異即F2子代表型總變異；VE代表環(huán)境變異即親本SHR、WKY與F1子代表型變異平均值。分別計(jì)算出BPV和其他血流動(dòng)力學(xué)表型的遺傳決定程度。收縮壓波動(dòng)性、舒張壓波動(dòng)性、平均動(dòng)脈壓波動(dòng)性、脈壓波動(dòng)性的遺傳決定度分別為50％、57％、60％、48％理論推測(cè)影響B(tài)PV的數(shù)量性狀基因座QTL數(shù)目分別為12、05、07、06收縮壓、舒張壓、平均動(dòng)脈壓、脈壓的遺傳決定度分別為52％、34％、46％、62％QTL數(shù)目分別為30、34、32、14。進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究包括基因型檢測(cè)和遺傳關(guān)聯(lián)分析正在與美國(guó)合作尋找調(diào)控BPV的QTL。第三部分大鼠左心室肥厚指數(shù)與血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)相關(guān)分析。所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在表型測(cè)量后麻醉處死取出心臟放入中性甲醛溶液保存。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)對(duì)左右心室分別進(jìn)行稱重。包括血壓波動(dòng)性在內(nèi)的所有血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)與左心室肥厚指數(shù)左心室重體重進(jìn)行單因素回歸分析和多元回歸分析。多元回歸顯示只有血壓因素對(duì)左心室肥厚有顯著影響在F1子代大鼠上舒張壓對(duì)左心室肥厚指數(shù)提供351％的影響；在F2子代大鼠上收縮壓對(duì)左心室肥厚指數(shù)提供283％的影響。結(jié)論1為了獲得準(zhǔn)確可靠的SHR血壓數(shù)據(jù)需要對(duì)遙控測(cè)壓探頭進(jìn)行定標(biāo)而且應(yīng)該在接近生理溫度的37℃下進(jìn)行定標(biāo)。SHR在術(shù)后第14天時(shí)恢復(fù)得更好在此時(shí)測(cè)量血流動(dòng)力學(xué)比較合適。2BPV的遺傳決定度高于BP而可能影響B(tài)PV的QTL數(shù)少于BP。收縮壓波動(dòng)性、舒張壓波動(dòng)性、平均動(dòng)脈壓波動(dòng)性、脈壓波動(dòng)性的遺傳決定度分別為50％、57％、60％、48％理論推測(cè)QTL數(shù)分別為12、05、07、06。收縮壓、舒張壓、平均動(dòng)脈壓、脈壓的遺傳決定度分別為52％、34％、46％、62％QTL數(shù)分別為30、34、32、14。3大樣本實(shí)驗(yàn)證實(shí)左心室肥厚的主要決定因素為血壓。在F1大鼠上左心室肥厚指數(shù)的變異中有351％可由DBP來(lái)解釋P001在F2大鼠上左心室肥厚指數(shù)有283％可由SBP來(lái)解釋P0001。

簡(jiǎn)介：石河子大學(xué)碩士學(xué)位論文腎細(xì)胞癌的臨床病理與分子遺傳學(xué)研究姓名鄒泓申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師李鋒20070501學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人所呈交的學(xué)位論文是在我導(dǎo)師的指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含其他個(gè)人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。研究生簽名名P；H時(shí)間如1年6月憎日學(xué)位論文版權(quán)授權(quán)書本人完全了解石河子大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文并向國(guó)家主管部門或指定機(jī)構(gòu)送交論文的電子版和紙質(zhì)版。有權(quán)將學(xué)位論文用于贏利目的的少量復(fù)制并允許論文進(jìn)入學(xué)校圖書館被查閱。有權(quán)將學(xué)位論文的內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行檢索。有權(quán)將學(xué)位論文的標(biāo)題和摘要匯編出版。保密的學(xué)位論文在解密后適用本規(guī)定。研究生簽名≥侈乃H時(shí)間加7年6月／甲日】。專毫辛導(dǎo)師簽名1時(shí)間軸7年。月伸8

簡(jiǎn)介：青島大學(xué)博士學(xué)位論文EB病毒相關(guān)胃癌腫瘤相關(guān)基因表現(xiàn)遺傳學(xué)調(diào)節(jié)機(jī)制的研究姓名劉霞申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)神經(jīng)生物學(xué)指導(dǎo)教師羅兵20120602意義WNT5AML／M2∥3．500，P0．061；WNT5AM3／M4F一2．286，P0．131。④QPCR檢測(cè)結(jié)果顯示，去甲基化藥物AZA作用EBV陽(yáng)性胃癌細(xì)胞系SUN719可以重新激活WNT5A，恢復(fù)其表達(dá)。⑤重組質(zhì)粒PCDNA3．1．WNT5A轉(zhuǎn)染EBV陽(yáng)性胃癌細(xì)胞系SNU719，WESTERNBLOTTING結(jié)果顯示，外源性WNT5A表達(dá)可以顯著抑制WNT／13．CATENIN信號(hào)通路中13CATENIN表達(dá)。⑥與質(zhì)粒對(duì)照組及變異型WNT5A重組質(zhì)粒組比較，轉(zhuǎn)染野生型WNT5A重組質(zhì)粒的SUN719細(xì)胞C．JUN和C．MYC表達(dá)水平?jīng)]有發(fā)生顯著變化；而JUNB表達(dá)明顯升高，ATF2和EGFR轉(zhuǎn)錄表達(dá)顯著降低，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義PO．05。⑦EBVAAC和EBVNGC組織中I曲基因啟動(dòng)子甲基化檢出率分別為80．O％24／30和50．O％19／38，差異有顯著性F6．490，P0．011；EBVAGC和EBVNGC組織中TGF．131啟動(dòng)子基因甲基化檢出率分別為50．O％，15／30和36．8％，14／38，差異無(wú)顯著性薩1．187，P0．276。EBVAGC和EBVNGC組織中RB蛋白表達(dá)率分別為43．3％13／30和63．2％24／38，TGF．131蛋白表達(dá)率分別為56．7％17／30和63．2％24／38，差異均無(wú)顯著性R．B2．656，P0．103TGF．B1FO．295，P0．587。胃癌組織中RB和TGF．131啟動(dòng)子基因甲基化與其蛋白表達(dá)無(wú)明顯負(fù)相關(guān)RB2．943，P0．086，R0．208；TGF一131F3．051，P0．081，R0．212。胃癌組織中RB啟動(dòng)子基因甲基化、RB蛋白表達(dá)缺失以及TGF．131蛋白表達(dá)與病人年齡、性別、分化程度和腫瘤部位無(wú)相關(guān)性，但與腫瘤浸潤(rùn)深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)滬均0．05；TGF．P1啟動(dòng)子基因甲基化與病人年齡、性別、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)相關(guān)性，但與腫瘤浸潤(rùn)深度和腫瘤部位相關(guān)尸均0．05。⑨與未轉(zhuǎn)染組和轉(zhuǎn)染脂質(zhì)體組比較，SIRNA．LMPL和SIRNA．I。MPITGF．P1轉(zhuǎn)染EBV陽(yáng)性細(xì)胞GT38，均可導(dǎo)致GT38細(xì)胞MMP9，SURVIVIN和ICAML表達(dá)降低，而CDK4表達(dá)升高，差異均有顯著性尸均0．05；SIRNALMPITGF．131轉(zhuǎn)染組EGFR表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組尸O．05，而SIRNA．LMPL組與對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異。⑩與對(duì)照組比較，TGF．B1作用可導(dǎo)致EBV陽(yáng)性GT38細(xì)胞ICAM．1的表達(dá)顯著降低，差異有顯著性P0．05，而在EBV陽(yáng)性細(xì)胞系SNU719和EBV陰性細(xì)胞系SGC7901和HGC．27ICAM．1的表達(dá)無(wú)顯著差異；TGF．131作用對(duì)4種細(xì)胞系MMP9．SURVIVIN．CDK4和EGFRMRNA的轉(zhuǎn)錄表達(dá)無(wú)明顯影響。結(jié)論①EBV陰性細(xì)胞系中WNT5A的表達(dá)較為普遍，而在EBV陽(yáng)性細(xì)胞系中則表達(dá)缺失或下調(diào)，去甲基化試劑處理可誘使EBV陽(yáng)性細(xì)胞系WNT5A的重新表達(dá)，WNT5A編碼基因啟動(dòng)子區(qū)高甲基化是EBV陽(yáng)性細(xì)胞系WNT5A表達(dá)缺失或下調(diào)的重要機(jī)制。②EBVAGC組織中WNT5A編碼基因啟動(dòng)子區(qū)呈高甲基化狀態(tài)，且其甲基化狀態(tài)明顯高于EBVNGC，提示W(wǎng)NT5A參與EBVAGC的發(fā)生發(fā)展，可能是EBVAGC重要的表觀遺傳學(xué)標(biāo)志。③外源性WNT5A的表達(dá)可誘導(dǎo)EBV陽(yáng)性細(xì)胞系SNU719中某蝗細(xì)胞因子，如13CATENIN、JUNB、ATF2、EGFR表達(dá)水平的變化，這些變化可以抑制細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，提示W(wǎng)NT5A在EBVAGC發(fā)

簡(jiǎn)介：第一部分重慶地區(qū)2型糖尿病家系代謝綜合征及相關(guān)指標(biāo)的遺傳度分析目的了解2型糖尿病T2DM家系中T2DM患者和非糖尿病DM一級(jí)親屬代謝綜合征MS及主要組分的患病率，并采用遺傳度分析，了解各種代謝指標(biāo)受遺傳因素影響的程度。方法1選取重慶地區(qū)漢族人群中符合入選條件的T2DM家系。共納入247個(gè)家系，1312名研究對(duì)象，其中男587名，女725名。家系組共1178名，配偶組134名。研究對(duì)象測(cè)定人體測(cè)量學(xué)參數(shù)、血壓、血脂譜、超敏C反應(yīng)蛋白HSCRP、非酯化脂肪酸NEFA等，行口服葡萄糖耐量試驗(yàn)OGTT。分別采用IDF和NCEPATPⅢ根據(jù)亞洲人群腰圍切點(diǎn)修正標(biāo)準(zhǔn)診斷MS。2去除家系組中的二級(jí)親、配偶組中有DM家族史和患有T2DM者，將剩余成員分為T2DM組、一級(jí)親屬FDR組和對(duì)照組三組。比較三組人體測(cè)量學(xué)參數(shù)、血壓、血糖、血脂、胰島素、HSCRP、NEFA等指標(biāo)的差別；比較三組MS及主要成分的患病率。3采用SAGE軟件，計(jì)算各項(xiàng)代謝指標(biāo)在T2DM家系的遺傳度。結(jié)果在校正年齡因素后，F(xiàn)DR組腰圍WAIST和腰臀比WHR顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P005。FDR組糖調(diào)節(jié)受損IGR、肥胖、腹型肥胖、高血壓、高TG血癥、低HDLC血癥、MSIDF標(biāo)準(zhǔn)和MSNCEPATPⅢ標(biāo)準(zhǔn)的患病率分別為449％、333％、341％、211％、282％、301％、208％和192％。在校正年齡、性別影響后，F(xiàn)DR組患IGR的風(fēng)險(xiǎn)是對(duì)照組的132倍95％CI591～2946，肥胖、腹型肥胖和低HDLC血癥的風(fēng)險(xiǎn)分別是對(duì)照組的213倍95％CI123～368、192倍95％CI114～321和173倍95％CI101～298，MS患病風(fēng)險(xiǎn)是對(duì)照組的257倍IDF標(biāo)準(zhǔn)，95％CI114～321或235倍NCEPATPⅢ標(biāo)準(zhǔn)，95％CI117～471。T2DM患者各種代謝紊亂的發(fā)生更為明顯。肥胖、腹型肥胖、高血壓風(fēng)險(xiǎn)是對(duì)照組的381倍95％CI222～656、391倍95％CI234～651和382倍95％CI217～674，MS風(fēng)險(xiǎn)是對(duì)照組的796倍IDF標(biāo)準(zhǔn)，95％CI403～1574或1213倍NCEPATPⅢ標(biāo)準(zhǔn)，95％CI614～2396，高TG血癥和低HDLC血癥的患病風(fēng)險(xiǎn)分別是251倍95％CI153～411和231倍95％CI138～389。遺傳度分析顯示空腹血糖、空腹胰島素和HOMAΒ的遺傳度最高，分別為071、068和068；HOMAΒ的遺傳度068高于HOMAIR054；BMI、腰圍和HSCRP的遺傳度045左右；血脂譜中TC、HDLC遺傳度較高，分別為051和055，TG稍低，為032；所有指標(biāo)中，SBP和DBP的遺傳度最低，分別為025和028。結(jié)論T2DM及相關(guān)的代謝代謝疾病如肥胖、高血壓、脂代謝紊亂等有明顯的家族聚集性。T2DM家系中非DM一級(jí)親屬已表現(xiàn)出程度不同的代謝紊亂。各種代謝指標(biāo)在T2DM家系中具有中等程度的遺傳度，提示相關(guān)代謝指標(biāo)受遺傳因素和環(huán)境因素的共同作用。第二部分PGC1Β基因單核普酸多態(tài)性與2型糖尿病及相關(guān)代謝疾病的關(guān)聯(lián)分析目的研究過(guò)氧化物酶體增殖活化受體Γ共活化因子1ΒPGC1Β基因單核苷酸多態(tài)性SNPS與T2DM和相關(guān)代謝疾病的關(guān)聯(lián)。方法1選擇無(wú)親緣關(guān)系的18例正常人，39例T2DM患者。PCR擴(kuò)增PGC1Β基因12個(gè)外顯子及側(cè)翼序列和啟動(dòng)子上游16KB，經(jīng)變性高效液相色譜DHPLC結(jié)合測(cè)序技術(shù)篩查SNPS位點(diǎn)，估計(jì)變異位點(diǎn)之間的連鎖不平衡LD。2選擇重慶地區(qū)474例T2DM患者，313例對(duì)照，對(duì)篩查到的編碼區(qū)SNPS行病例一對(duì)照分析。結(jié)果在PGC1Β基因共發(fā)現(xiàn)9個(gè)SNPS，5個(gè)位于編碼區(qū)，其中4個(gè)為錯(cuò)義突變ALA203PRO、ARG265GLN、VAL279ILE、ARG292SER、1個(gè)為同義突變LEU42LEU，啟動(dòng)子區(qū)2個(gè)1263GA、985CT，其余2個(gè)位于內(nèi)含子區(qū)域IVS2132GA和IVS931GC。4個(gè)錯(cuò)義突變呈強(qiáng)LD，位于同一單倍域內(nèi)，其中ALA203PRO和VAL279ILE完全相關(guān)。4個(gè)錯(cuò)義突變相距僅268BP，采用直接測(cè)序技術(shù)進(jìn)行基因型鑒定。對(duì)ALA203PRO、ARG265GLN和ARG292SER位點(diǎn)的病例一對(duì)照研究提示這3個(gè)SNPS均與T2DM無(wú)顯著關(guān)聯(lián)P005。病例一對(duì)照研究提示ARG265GLN與肥胖的發(fā)生有關(guān)，與GG基因型個(gè)體相比，GA或從基因型的個(gè)體對(duì)肥胖的易感性顯著增加ADDITIVE模式1436，95％CI1079～1921，P0013；DOMINANT模式1424，95％CI1029～1970，P0033；RECESSIVE模式2648，95％CI1008～6961，P0048。ARG265GLN與肥胖的關(guān)聯(lián)受性別影響。在男性，與GG型比較，GAAA型的BMI、腰圍、腰臀比和DBP均顯著增加P005。4個(gè)錯(cuò)義突變共構(gòu)成3種常見(jiàn)單倍型，占所有單倍型的953％。3種單倍型與T2DM均無(wú)顯著關(guān)聯(lián)P005。肥胖者H3單倍型的頻率高于對(duì)照組166％VS128％，P0039。結(jié)論P(yáng)GC1Β基因SNPS與中國(guó)重慶地區(qū)T2DM無(wú)明顯關(guān)聯(lián)。但ARG265GLN及一個(gè)常見(jiàn)單倍型可能與肥胖的發(fā)生有關(guān)，具有A等位基因的265GLN可能作為危險(xiǎn)因子參與肥胖發(fā)生的病理過(guò)程。ARG265GLN與肥胖的關(guān)聯(lián)在男性更明顯。第三部分PGCLAPGCIP和PPARY基因交互作用與2型糖尿病及相關(guān)代謝疾病的關(guān)系目的研究過(guò)氧化物酶體增殖活化受體Β共活化因子1ΑPGC1Α和過(guò)氧化物酶體增殖活化受體ΓPPAR?；騍NPS與T2DM和肥胖的關(guān)系。并研究PGC1Α、PGC1Β和PPARΓ三個(gè)基因SNPS交互作用對(duì)T2DM和肥胖的影響。方法RFLP技術(shù)鑒定基因型。分析PGC1Α基因GLY482SER和THR394THR位點(diǎn)、PPARΓ基因PRO12ALA和C161T位點(diǎn)與T2DM和肥胖的關(guān)聯(lián)。采用多因素維度降低法MDR法和LOGISTIC回歸，研究PPARΓ、PGC1Α和PGC1Β基因多個(gè)位點(diǎn)之間的交互作用對(duì)T2DM和相關(guān)疾病的影響。結(jié)果PPAR?；騊RO12ALA和C161T位點(diǎn)，PGC1Α基因GLY482SER和THR394THR位點(diǎn)均與T2DM無(wú)顯著相關(guān)。除DOMINANT模式下PGC1ΑTHR394THR與肥胖關(guān)聯(lián)0697，95％CI0497～0977，P0036，其余三個(gè)SNPS與肥胖均無(wú)顯著關(guān)聯(lián)。PPAR?；駽161T位點(diǎn)可能和LR的發(fā)生有關(guān)，CTTT基因型與CC基因型比較，空腹胰島素和HOMAIR顯著增加分別為1113±536MULVS983±550MUL，P0030和247±123VS218±130，P0033。本組人群中，PPARΓ、PGC1Α和PGC1Β3個(gè)基因交互作用與T2DM的發(fā)病無(wú)關(guān)。通過(guò)MDR法，在3個(gè)基因5個(gè)位點(diǎn)中建立了與肥胖關(guān)聯(lián)的2位點(diǎn)交互模型，PGC1Α基因GLY482SER和PGC1Β基因ARG265GLN對(duì)肥胖的發(fā)生有交互作用。該模型的交叉確認(rèn)一致性最高1010，檢驗(yàn)正確率為05432P00010?；蛐徒M合高危組較低危組發(fā)生肥胖的風(fēng)險(xiǎn)增加，為1603495％CI05493～46804，X77275，P00054，經(jīng)LOGISTIC回歸驗(yàn)證的結(jié)果與MDR法一致。結(jié)論P(yáng)PAR?；騊RO12ALA和C161T位點(diǎn)，PGC1Α基因GLY482SER和THR394THR位點(diǎn)與重慶地區(qū)T2DM不相關(guān)，但PPARΓC161T位點(diǎn)可能參與IR的發(fā)生，PGC1ΑTHR394THR位點(diǎn)可能與肥胖有關(guān)。MDR法建立了與肥胖關(guān)聯(lián)的2位點(diǎn)交互模式，PGC1Α基因GLY482SER和PGC1Α基因ARG265GLN對(duì)肥胖的發(fā)生有交互作用。MDR法可作為研究多基因交互關(guān)系的有力工具。

簡(jiǎn)介：分類號(hào)R3943密級(jí)⑧厶單位代碼10422學(xué)號(hào)201013069菇辦孑碩士學(xué)位論文論文題目?jī)蓚€(gè)神經(jīng)系統(tǒng)遺傳病家系致病基因的分子遺傳學(xué)研究TITLEIDENTIFICATIONOFTHECAUSATIVEMUTATIONFORTWOFAMILIESWITHHEREDITARYNEUROMUSCULARRAREDISEASES作者姓名學(xué)院名稱專業(yè)學(xué)位名稱指導(dǎo)教師合作導(dǎo)師馮亞佩醫(yī)學(xué)院遺傳學(xué)劉奇跡教授2013年5月15日論文目錄中文摘要1英文摘要6符號(hào)說(shuō)明12第一部分一個(gè)X連鎖腓骨肌萎縮癥家系致病基因的突變分析14材料和方法16結(jié)果22討論29小結(jié)32第二部分一常染色體顯性遺傳性痙攣性截癱家系致病基因的鑒定33材料和方法35結(jié)果52討侖63小結(jié)66參考文獻(xiàn)67致謝73攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄74

簡(jiǎn)介：第一部分研究目的研究原發(fā)性骨髓增生異常綜合征MDS患者染色體核型特征。研究方法對(duì)染色體核型可供分析的351例成人原發(fā)MDS患者進(jìn)行回顧性分析。結(jié)果染色體核型異常者237例675％。其中僅有染色體數(shù)目異常者99例417％，僅有染色體結(jié)構(gòu)異常者70例295％，同時(shí)有數(shù)目與結(jié)構(gòu)異常者68例288％；單一異常130例548％，2種異常54例228％，復(fù)雜異常3種53例224％。整倍體數(shù)目改變有多倍體4例17％；非整倍體及染色體臂的異?？梢?jiàn)于所有染色體，常見(jiàn)的依次有8、2020Q、77Q、55Q、18、1111Q、21、Y、21、10、16、22、9、DEL12P12。55Q51％的發(fā)生率低于西方國(guó)家87％234％，5Q綜合征的發(fā)生率極低03％，8191％和2020Q94％發(fā)生率高于西方國(guó)家分別為12％70％和20％35％。237例染色體核型異常的患者中染色體易位有31例131％，其中12種染色體易位在MDS中迄今尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道。I17Q10有9例38％，其中6例667％為單一異常。染色體重復(fù)有7例30％，主要累及1號(hào)染色體4例。按IPSS染色體核型分組，預(yù)后差的染色體核型檢出率在RA、RARS、5Q綜合征組，RCMD、RCMDRS組，RAEBⅠ組，RAEBⅡ組依次升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義X22854，P005。累及7號(hào)染色體異常的24例患者M(jìn)S為1095％CI4～16個(gè)月，較其他核型異常的患者M(jìn)S分別為5195％CI30～72個(gè)月明顯縮短P0001。按WPSS評(píng)分，極低危組、低危組、中危組、高危組和極高危組的2年P(guān)S率分別為100％、96％、81％、38％和14％，5年P(guān)S率分別為100％、83％、54％、20％和0，LOGRANK檢驗(yàn)各組總體生存OS率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P0001。結(jié)論染色體核型分析是MDS患者預(yù)后分層實(shí)現(xiàn)個(gè)體化治療的重要依據(jù)。與WHO分型相適應(yīng)的WPSS適合用于判斷我國(guó)MDS患者的預(yù)后。

簡(jiǎn)介：山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文先天性肌營(yíng)養(yǎng)不良的臨床、分子病理與分子遺傳學(xué)研究姓名羅靜申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)兒科學(xué)指導(dǎo)教師郝青英熊暉20080320山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文MRI示腦白質(zhì)信號(hào)異常。6例患者肌肉活檢病理診斷符合肌營(yíng)養(yǎng)不良。采用特異抗體行活檢肌肉免疫組織化學(xué)染色，顯示均為MEROSIN染色陰性，ADG、J3DG、DYSC呈陽(yáng)性表達(dá)。另外6例患兒缺少病理資料，但臨床表現(xiàn)與輔助檢查結(jié)果與以上6例患兒完全相似。2、3例肌眼腦病患兒中有2例進(jìn)行了肌肉活檢，臨床均表現(xiàn)為生后～1個(gè)月內(nèi)發(fā)病，智力落后、運(yùn)動(dòng)發(fā)育里程碑延遲以及肌營(yíng)養(yǎng)不良表現(xiàn)肌力、肌張力低下、關(guān)節(jié)攣縮、腱反射消失。輔助檢查均表現(xiàn)為血清CK水平顯著增高，EMG呈肌源性損害。特征性表現(xiàn)均存在眼部異常及腦畸形，包括注視差、對(duì)光反應(yīng)遲鈍、視神經(jīng)萎縮，以及頭顱MRI顯示小腦多發(fā)小囊灶、腦干發(fā)育不良。2例患兒肌肉活檢病理診斷符合肌營(yíng)養(yǎng)不良，采用特異抗體進(jìn)行活檢肌肉免疫組織化學(xué)染色，顯示均為抗ⅡDG糖鏈抗體IIH6染色陰性，3DG、MEROSIN、DYSC呈陽(yáng)性表達(dá)，提示存在ADG糖基化缺陷，支持了抗肌萎縮相關(guān)糖蛋白病的診斷。另外1例患兒缺少病理資料，但臨床表現(xiàn)與輔助檢查結(jié)果與以上2例患兒完全相似。3例患兒均進(jìn)行了肌眼腦病致病基因POMGNTL、FKRP、FCMD、POMT2突變分析，基因篩查發(fā)現(xiàn)了31個(gè)單核苷酸多態(tài)SINGLENUCLEOTIDEPOLYMORPHISMS，SNPS及5個(gè)同義突變SAMESENSEMUTATION，4個(gè)基因均未發(fā)現(xiàn)編碼區(qū)的致病突變。結(jié)論我們?cè)趪?guó)內(nèi)首次從臨床及分子病理水平確診了6例MDCLA和2例抗肌萎縮相關(guān)糖蛋白病患兒；初步明確了我國(guó)MDCIA患兒的臨床特點(diǎn)；在國(guó)內(nèi)首次建立了部分先天性肌營(yíng)養(yǎng)不良的臨床、分子病理及分子遺傳學(xué)診斷方法。關(guān)鍵詞先天性肌營(yíng)養(yǎng)不良，層粘連蛋白，A抗肌萎縮相關(guān)糖蛋白，免疫組織化學(xué)，基因突變

簡(jiǎn)介：分類號(hào)UDC博士學(xué)位論文密級(jí)非綜合征型先天性缺牙一家系與外胚層發(fā)育不良八家系的遺傳學(xué)分析GENETICALRESEARCHOFAFAMILYWITHNONSYNDROMICCONGENITALTOOTHAGENESISANDEIGHTFAMILIESWITHECTODERMALDYSPLASIASYNDROME作者姓名學(xué)科專業(yè)學(xué)院系、所指導(dǎo)教師副指導(dǎo)教師薛晉杰遺傳學(xué)中國(guó)醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室鄔玲仟教授梁德生教授、∥一?一一員堿中南大學(xué)2012年03月原創(chuàng)性聲明水人聲明，所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)帥指導(dǎo)下進(jìn)行的研究．【作及耿得的研究成果。盡我所知，除了論文R}1特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含≥E他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不包含為獲得中南大學(xué)或其他單位的學(xué)位或證書而使用過(guò)的材料。與我共同作的刷志對(duì)本研究所作的貢獻(xiàn)均已在論文1葉}了明確的|兌明。作者簽名窿塑臣建L{J％_2￡睦一年蚯JJ亞同學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書小人R解巾南大學(xué)柯哭1；I{留、使JTJ學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文井根據(jù)幽家或湖南省有火部門規(guī)定送交學(xué)位論義，允許學(xué)位論文被查閱和借閱；學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，I、J以采用復(fù)印、縮印或1L它手段保存學(xué)位論文。同時(shí)授權(quán)中凼科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到州國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)，并通過(guò)網(wǎng)絡(luò)向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。作者簽私{L；L毛K導(dǎo)師棼私羔￡61H蝴絲年叢J{J幺IL

簡(jiǎn)介：1研究背景細(xì)胞不斷經(jīng)受內(nèi)源性和外源性的各種應(yīng)激和損傷，體外培養(yǎng)的人成纖維細(xì)胞具有一定的增殖能力，經(jīng)過(guò)一系列傳代之后，逐漸變得衰老，即細(xì)胞復(fù)制性衰老。氧化應(yīng)激可以導(dǎo)致DNA損傷或干擾異染色質(zhì)，因而誘導(dǎo)早期傳代的細(xì)胞過(guò)早衰老，即應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞早衰。過(guò)氧化氫可短期內(nèi)作用于細(xì)胞獲得氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的早衰。細(xì)胞復(fù)制性衰老與應(yīng)激誘導(dǎo)的早衰具有相似的衰老表型，如細(xì)胞變大扁平，伴隨有核和核仁的體積增大，失去細(xì)胞與細(xì)胞間接觸，衰老相關(guān)Β半乳糖苷酶表達(dá)等等，而兩者具體的內(nèi)在調(diào)控機(jī)制可能存在差異。細(xì)胞衰老的機(jī)制可能是人類衰老及衰老相關(guān)性疾病的分子基礎(chǔ)。延緩衰老及治療衰老相關(guān)性疾病是人類最大的夢(mèng)想之一，目前對(duì)于衰老機(jī)制的認(rèn)識(shí)仍很局限。近來(lái)研究表明，表觀遺傳學(xué)，也稱外遺傳學(xué)，是研究機(jī)體發(fā)育及細(xì)胞增殖過(guò)程中基因表達(dá)調(diào)控的改變，這些改變可受環(huán)境因素的影響，其修飾的改變可能是細(xì)胞衰老一個(gè)決定性因素。表觀遺傳學(xué)修飾包括DNA甲基化和組蛋白的轉(zhuǎn)錄后修飾，即組蛋白甲基化、乙?；土姿峄揎棧珹TP依賴的染色質(zhì)結(jié)構(gòu)重塑。然而，在表觀遺傳學(xué)和細(xì)胞及器官衰老方面的研究資料尚較匱乏，這可能跟衰老本身的復(fù)雜性有關(guān)。目前有限的資料表明，DNA甲基化可能修飾一些衰老相關(guān)調(diào)控基因，隨著年齡增加，這種修飾作用減弱或增強(qiáng)，確定這些改變是隨機(jī)的或“程序性”的，及是否受環(huán)境氧化應(yīng)激的影響十分重要。組蛋白H3和H4N末端共價(jià)修飾可促進(jìn)染色質(zhì)重建，組蛋白修飾及其不同組合參與基因轉(zhuǎn)錄的活化或沉默。衰老是內(nèi)、外因素共同作用的結(jié)果，是一種多基因的復(fù)合調(diào)控過(guò)程，但衰老的始動(dòng)因素及其發(fā)生、發(fā)展機(jī)制仍有待探究。表觀遺傳學(xué)修飾可能提供了細(xì)胞衰老所需的表觀微環(huán)境，如果能通過(guò)此途徑揭示衰老的分子機(jī)制，且找到延緩衰老進(jìn)程的方法，將具有重大的生物學(xué)意義和臨床應(yīng)用前景。本研究應(yīng)用體外培養(yǎng)的人胚肺二倍體成纖維細(xì)胞為研究對(duì)象，檢測(cè)正常細(xì)胞復(fù)制性衰老及過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的細(xì)胞早衰過(guò)程中表觀遺傳學(xué)調(diào)控的作用，包括全基因組DNA甲基化、整體的組蛋白乙酰化及甲基化變化；表觀遺傳學(xué)相關(guān)酶的表達(dá)變化及其活性改變；衰老相關(guān)基因MRNA水平表達(dá)變化及其轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)域DNA甲基化改變和組蛋白修飾狀況；并尋找正常年輕細(xì)胞及復(fù)制性衰老細(xì)胞基因組轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)域未知的差異甲基化基因，為細(xì)胞衰老過(guò)程中表觀遺傳學(xué)調(diào)控作用提供理論依據(jù)。2材料與方法21建立細(xì)胞復(fù)制性衰老及過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的細(xì)胞早衰模型建立體外培養(yǎng)的正常人胚肺成纖維細(xì)胞復(fù)制性衰老模型及400ΜM過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的細(xì)胞早衰模型，觀察在細(xì)胞正常復(fù)制性衰老及早衰過(guò)程中，細(xì)胞的一般生物學(xué)特性改變，包括細(xì)胞形態(tài)，生長(zhǎng)曲線，壽命周期，細(xì)胞周期分布及衰老相關(guān)Β半乳糖苷酶表達(dá)的變化。22檢測(cè)基因組DNA甲基化調(diào)控以5甲基胞嘧啶抗體免疫熒光方法及3H甲基摻入法檢測(cè)人胚肺成纖維細(xì)胞基因組DNA整體甲基化變化趨勢(shì)；基于ELISA樣反應(yīng)方法檢測(cè)甲基轉(zhuǎn)移酶總的活性改變；并以QPCR和WESTERNBLOT方法檢測(cè)甲基轉(zhuǎn)移酶和甲基化結(jié)合蛋白MRNA和蛋白水平的表達(dá)變化，同時(shí)觀察了5氮雜胞苷對(duì)各甲基轉(zhuǎn)移酶和甲基化結(jié)合蛋白表達(dá)的影響。23組蛋白整體乙?；c甲基化調(diào)控以相應(yīng)抗體的細(xì)胞免疫熒光方法觀察組蛋白H3，H4整體乙?；厔?shì)及組蛋白H4LYS20整體甲基化趨勢(shì)的改變；基于ELISA樣反應(yīng)方法檢測(cè)組蛋白總體去乙?；傅幕钚宰兓徊⒁訯PCR方法檢測(cè)乙?；傅腗RNA表達(dá)，以QPCR方法和WESTERNBLOT方法檢測(cè)去乙?；傅腗RNA和蛋白水平的表達(dá)，同時(shí)觀察曲古霉素A對(duì)乙?；负腿ヒ阴；副磉_(dá)的影響。24檢測(cè)衰老相關(guān)基因的表達(dá)及其啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀況以QPCR方法檢測(cè)P53，PI6，IGF2，P66，F(xiàn)OXA2的MRNA表達(dá)水平；在亞硫酸氫鹽修飾基因組DNA的基礎(chǔ)上，以甲基化特異性PCR檢測(cè)上述基因啟動(dòng)子區(qū)域的甲基化狀況；同時(shí)對(duì)年輕細(xì)胞，復(fù)制性衰老細(xì)胞及早衰細(xì)胞組的P66，F(xiàn)OXA2啟動(dòng)子區(qū)域的CPG島進(jìn)行克隆測(cè)序，全面觀察其CPG島甲基化修飾狀況。25衰老相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)域的組蛋白乙?；凹谆揎椧匀旧|(zhì)免疫沉淀結(jié)合定量PCR的方法檢測(cè)年輕細(xì)胞，中年細(xì)胞，復(fù)制性衰老細(xì)胞及早衰細(xì)胞組P53，P16，IGF2，P66，F(xiàn)OXA2基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)域的組蛋白修飾情況，包括組蛋白H3，H4乙?；揎椉敖M蛋白H3LYS4，H4LYS20的甲基化修飾狀況。26檢測(cè)年輕細(xì)胞及復(fù)制性衰老細(xì)胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)域CPG島差異表達(dá)基因以甲基化的DNA免疫沉淀結(jié)合基因芯片技術(shù)檢測(cè)年輕細(xì)胞及復(fù)制性衰老細(xì)胞啟動(dòng)子及第一外顯子區(qū)域CPG島差異表達(dá)的基因，并進(jìn)行兩組細(xì)胞差異的甲基化基因感興趣分類。3結(jié)果31細(xì)胞復(fù)制性衰老與細(xì)胞早衰具有相同的形態(tài)學(xué)特征和增殖能力體外培養(yǎng)的正常人胚肺成纖維細(xì)胞于52PDL進(jìn)入不可逆的復(fù)制性衰老狀態(tài)，依據(jù)細(xì)胞的群體倍增水平PDL，分為22PDL年輕細(xì)胞組，35PDL中年細(xì)胞組和49PDL復(fù)制性衰老細(xì)胞組。同步培養(yǎng)的22PDL人胚肺成纖維細(xì)胞，以400ΜMH2O2連續(xù)染毒4次，每天1次，每次2H，染毒后繼續(xù)培養(yǎng)7天，細(xì)胞呈現(xiàn)不可逆的早衰狀態(tài)，分為早衰起始組和早衰持續(xù)組。復(fù)制性衰老及早衰細(xì)胞處于衰老狀態(tài)后均可維持存活1個(gè)月以上，細(xì)胞變大扁平，飽和度降低。復(fù)制性衰老模型中各組細(xì)胞群體倍增時(shí)間為22PDL48H，35PDL52H，49PDL96H。細(xì)胞早衰模型中，4次染毒期間，細(xì)胞均有不同程度的增殖，染毒4次后，細(xì)胞幾乎停止增殖，處于明顯的不可逆早衰狀態(tài)。復(fù)制性衰老的細(xì)胞壽命周期為110天，早衰的為50天。細(xì)胞周期分布中G1％分別為22PDL355％，35PDL726％和49PDL895％及早衰起始組616％，早衰持續(xù)組772％細(xì)胞增殖指數(shù)隨增齡呈現(xiàn)降低的變化趨勢(shì)。衰老相關(guān)Β半乳糖苷酶染色陽(yáng)性細(xì)胞率分別為22PDL51％，35PDL157％和49PDL907％及衰老起始組438％，衰老持續(xù)組913％。32衰老的細(xì)胞呈現(xiàn)較低的基因組DNA甲基化水平，復(fù)制性衰老與早衰甲基化調(diào)控存在差異甲基化免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，細(xì)胞復(fù)制性衰老過(guò)程中，基因組DNA甲基化水平逐漸降低；染毒組細(xì)胞早衰過(guò)程中，基因組DNA甲基化水平也逐漸降低；【3H甲基摻入實(shí)驗(yàn)得到一致的結(jié)果，甲基化的CPG％分別為22PDL682％，35PDL419％和49PDL161％及早衰起始組635％，早衰持續(xù)組180％。復(fù)制性衰老及早衰的細(xì)胞都呈現(xiàn)出明顯的低甲基化水平。33衰老的細(xì)胞呈現(xiàn)整體組蛋白H3，H4低乙?；癏4K20高甲基化水平，復(fù)制性衰老與早衰組蛋白修飾調(diào)控存在差異細(xì)胞免疫熒光結(jié)果顯示，細(xì)胞衰老過(guò)程中，與年輕細(xì)胞相比，組蛋白H3，H4整體乙?；厔?shì)逐漸降低，早衰起始組略低于中年細(xì)胞組，早衰持續(xù)組同復(fù)制性衰老細(xì)胞組；組蛋白H4LYS20整體甲基化趨勢(shì)，復(fù)制性衰老細(xì)胞組升高，早衰持續(xù)組同復(fù)制性衰老細(xì)胞組。34細(xì)胞衰老相關(guān)基因表達(dá)發(fā)生改變，與其啟動(dòng)子區(qū)甲基化調(diào)控有不同程度關(guān)聯(lián)在細(xì)胞衰老過(guò)程中，與年輕細(xì)胞組MRNA表達(dá)水平相比，復(fù)制性衰老細(xì)胞組P53表達(dá)升高，中年細(xì)胞組顯著升高，而早衰持續(xù)組無(wú)明顯變化；中年細(xì)胞組P16表達(dá)降低，而復(fù)制性衰老細(xì)胞組明顯升高，早衰持續(xù)組也升高中年細(xì)胞組及復(fù)制性衰老細(xì)胞組IGF2表達(dá)升高，早衰持續(xù)組顯著升高；中年細(xì)胞組及復(fù)制性衰老細(xì)胞組P66表達(dá)升高，早衰持續(xù)組升高顯著復(fù)制性衰老細(xì)胞組及早衰持續(xù)組FOXA2表達(dá)均明顯降低。4結(jié)論41獲得人胚肺成纖維細(xì)胞體外復(fù)制性衰老模型及成功建立穩(wěn)定的過(guò)氧化氫誘導(dǎo)細(xì)胞早衰模型，細(xì)胞復(fù)制性衰老與細(xì)胞早衰具有相同的形態(tài)學(xué)特征和增殖能力。42基因組DNA低甲基化，整體組蛋白H3，H4低乙酰化和H4K20高甲基化狀態(tài)是細(xì)胞衰老發(fā)生的表觀微環(huán)境，表觀遺傳學(xué)相關(guān)酶的表達(dá)與活性改變參與其形成與維持。43在細(xì)胞衰老過(guò)程中，特異基因表達(dá)發(fā)生變化，其轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)域特定的DNA甲基化和組蛋白修飾參與基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。44細(xì)胞復(fù)制性衰老與細(xì)胞早衰的表觀遺傳學(xué)調(diào)控機(jī)制存在差異，氧化應(yīng)激可能通過(guò)表觀遺傳學(xué)修飾的變化作用于細(xì)胞早衰的發(fā)生。45獲得人胚肺成纖維細(xì)胞年輕階段及復(fù)制性衰老階段轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)域高甲基化的特異基因譜?；谏鲜鼋Y(jié)果，表觀遺傳學(xué)修飾是細(xì)胞衰老發(fā)生的重要調(diào)控機(jī)制，其作用的表觀微環(huán)境及對(duì)特異靶基因的特定修飾，是重要的表觀遺傳學(xué)改變，參與細(xì)胞衰老的發(fā)生，發(fā)展和持續(xù)，而細(xì)胞復(fù)制性衰老與細(xì)胞早衰其內(nèi)在的表觀遺傳學(xué)機(jī)制存在差異。

簡(jiǎn)介：一、2個(gè)WOLFHIRSCHHN綜合征家系的遺傳學(xué)分析目的通過(guò)2個(gè)WOLFHIRSCHHN綜合征家系的遺傳學(xué)分析，探討家系成員中4P部分單體和4P部分三體的來(lái)源及基因型與表型的關(guān)系，為患者及其家庭提供準(zhǔn)確的診斷和遺傳咨詢。方法核型分析、熒光原位雜交（FLUESCENTINSITUHYBRIDISATION，F(xiàn)ISH）、SNPARRAY全基因組拷貝數(shù)分析。結(jié)果家系1中先癥者及其妹妹為WOLFHIRSCHHN綜合征患者，4P末端缺失片段大小為2，767，380BP（NT635082830888），先癥者母親為T（4；14）（P163；P12）平衡易位攜帶者；家系2中先癥者為WOLFHIRSCHHN綜合征患者，弟弟及叔叔為4P部分三體患者，缺失和重復(fù)片段大小為5，047，291BP（NT649835112274），先癥者父親及祖母為T（4；15）（P16；P112）平衡易位攜帶者。結(jié)論本研究綜合利用核型分析、FISH、SNPARRAY技術(shù)對(duì)2個(gè)WOLFHIRSCHHOM綜合征家系中平衡易位攜帶者及4P部分單體和4P部分三體患者明確了診斷，并對(duì)重復(fù)及缺失區(qū)間進(jìn)行了精確定位，進(jìn)一步確定了基因型和表型的關(guān)系距4P末端277MB～5MB的缺失區(qū)間可能跟WHS面部特征和宮內(nèi)發(fā)育遲緩相關(guān)；距4P末端277MB的范圍內(nèi)可能存在導(dǎo)致牙齒發(fā)育不良和耳前皮贅的相關(guān)基因。二、5例瞼裂狹小綜合征患者的遺傳學(xué)分析目的通過(guò)5例瞼裂狹小綜合征患者FOXL2基因的突變分析，探討其基因型與表型的關(guān)系，為患者及其家庭提供準(zhǔn)確的診斷和遺傳咨詢。方法應(yīng)用核型分析、熒光原位雜交（FISH）、SNPARRAY技術(shù)對(duì)1例瞼裂狹小綜合征伴智力障礙患者行遺傳學(xué)分析；應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）及DNA測(cè)序技術(shù)對(duì)4例單純瞼裂狹小綜合征患者行FOXL2基因突變分析。結(jié)果瞼裂狹小伴智力障礙患者3Q221Q23存在包含F(xiàn)OXL2基因在內(nèi)約94MB的雜合性缺失；病例2和3FOXL2基因存在C704DELG雜合突變，已報(bào)道該突變病例的臨床表型為Ⅰ型BPES，但病例3臨床表現(xiàn)為Ⅱ型BPES；病例4和5未檢測(cè)到突變。結(jié)論（1）3Q221Q23存在導(dǎo)致智力障礙的相關(guān)基因；（2）FOXL2基因C704DELG雜合突變（表達(dá)截短蛋白）可導(dǎo)致Ⅰ和Ⅱ型瞼裂狹小綜合征，因此，產(chǎn)生截短蛋白的突變基因型與Ⅰ型女性患者卵巢早衰的表型之間不存在對(duì)應(yīng)關(guān)系。

簡(jiǎn)介：近二十余年來(lái)，輔助生育技術(shù)和分子生物學(xué)技術(shù)蓬勃發(fā)展，植入前遺傳學(xué)診斷PREIMPLANTATIONGEICDIAGNOSISPGD在二者有機(jī)結(jié)合的基礎(chǔ)上應(yīng)用而生。1990年，HYSIDEAH成功地完成了世界上第一例PGD，近年來(lái)PGD自身檢測(cè)技術(shù)的不斷完善，新的分子生物學(xué)技術(shù)不斷應(yīng)用，除了聚合酶鏈反應(yīng)POLYMERASECHAINREACTION，PCR及熒光原位雜交FLUESCENCEINSITU，F(xiàn)ISH兩種技術(shù)應(yīng)用于PGD，在此基礎(chǔ)上還衍生了一些新的技術(shù)。如核轉(zhuǎn)化誘導(dǎo)的染色體進(jìn)行光譜核型分析SPECTRALKARYOTYPING，SKY或24色多色FISH技術(shù)MULTIFLUOCHROMEKARYOTYPING分析，單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增及比較基因組雜交技術(shù)COMPARATIVEGENOMICHYBRIDIZATIONCGH，引物原位標(biāo)記技術(shù)PRIMEDINSITULABELING，PRINS等，這些技術(shù)的出現(xiàn)為PGD的進(jìn)一步發(fā)展拓展了更為廣闊的空間。PGD應(yīng)用范圍不斷擴(kuò)大，除了可以進(jìn)行性連鎖疾病、單基因遺傳性疾病、染色體結(jié)構(gòu)和數(shù)目的異常的檢測(cè)，還可用于人類腫瘤易感綜合征的易感性分析及一些遲發(fā)性疾病的基因預(yù)測(cè)，以及應(yīng)用PGD技術(shù)進(jìn)行HLA配型。到2004年為止，全世界已進(jìn)行了超過(guò)6000個(gè)臨床PGD周期，誕生了1000多個(gè)健康嬰兒。染色體易位是一種常見(jiàn)的遺傳缺陷，它是指兩條及兩條以上染色體的斷裂產(chǎn)生的染色體片段位置的改變。平衡易位是最常見(jiàn)的染色體結(jié)構(gòu)異常。據(jù)報(bào)道，群體中相互易位的發(fā)生率約為1500～11000，羅式易位的發(fā)生率約為1900～11000。而在不育及反復(fù)自然流產(chǎn)患者中，易位的發(fā)生率顯著增高達(dá)1％～10％。染色體易位的攜帶者一般都沒(méi)有遺傳物質(zhì)的丟失或者是丟失不多，因而表型正常，但可將不平衡的染色體傳給子代，導(dǎo)致流產(chǎn)、死胎、畸形兒或不孕不育等。部分男性攜帶者還可能因染色體斷裂區(qū)域涉及精子發(fā)生相關(guān)基因或調(diào)控基因而伴有生精障礙導(dǎo)致不育。因此染色體結(jié)構(gòu)異常伴隨的生育障礙對(duì)患者的身體及精神方面均帶來(lái)極大的危害。對(duì)于渴望生育健康正常后代的夫婦來(lái)說(shuō)，以前所能借助的方法是在孕早期或孕中期行產(chǎn)前診斷取羊水細(xì)胞或絨毛對(duì)胎兒進(jìn)行遺傳學(xué)診斷，和借助于B超診斷胎兒有無(wú)形態(tài)學(xué)異常，但往往面臨要選擇流產(chǎn)或引產(chǎn)的難題，植入前遺傳學(xué)診斷的出現(xiàn)，為這些患者提供了除產(chǎn)前診斷以外另一種選擇，能早期同時(shí)解決生育及遺傳診斷這兩大難題，實(shí)現(xiàn)他們生育正常后代的愿望。目前對(duì)染色體異?；颊哌M(jìn)行PGD有兩種途徑，即對(duì)極體或卵裂球進(jìn)行染色體分析，最常用的分析方法是熒光原位雜交。在用FISH技術(shù)診斷染色體易位時(shí)，主要有以下幾種方法1活檢處于分裂間期的卵裂球，采用兩種易位染色體的端粒探針和其中一條染色體斷裂點(diǎn)近端探針聯(lián)合的方法進(jìn)行FISH對(duì)于羅氏易位攜帶者，采用易位的染色體的位點(diǎn)特異性探針。用卵裂球進(jìn)行PGD存在的問(wèn)題主要是難以區(qū)分正常和平衡的胚胎，不能真正實(shí)現(xiàn)優(yōu)生的目的，另外卵裂階段的胚胎嵌合體發(fā)生率很高，卵裂階段單個(gè)卵裂球的檢測(cè)并不能代表整個(gè)胚胎的狀態(tài)，可能造成漏診和誤診。2采用跨斷裂點(diǎn)探針篩選跨越或是臨近斷裂點(diǎn)的克隆，并標(biāo)記上不同的顏色，通過(guò)不同顏色信號(hào)的分離和重疊，可分辨各類染色體結(jié)構(gòu)異常，包括染色體平衡和非平衡易位、倒位、染色體內(nèi)部重組和微缺失等，但由于跨斷裂點(diǎn)探針制作周期較長(zhǎng)，費(fèi)用較高，該技術(shù)亦未能廣泛應(yīng)用于臨床。3間期核轉(zhuǎn)換，近年來(lái)有學(xué)者發(fā)展了從間期核獲得中期染色體的技術(shù)，VERLINSKY等進(jìn)一步發(fā)展了該技術(shù)并將其應(yīng)用于PGD，用活檢獲得的卵裂球與去核的鼠合子融合，得到分裂期的染色體，用全染色體涂抹探針WHOLECHROMOSOMEPAINTINGPROBWCP結(jié)合著絲粒探針CENTROMEREENUMERATIONPROBE，CEP和端粒探針，可應(yīng)用于各種染色體易位的PGD，但這種方法較為復(fù)雜，需要特殊的儀器設(shè)備如電融合儀等、顯微操作技術(shù)和中期核固定技術(shù)，耗時(shí)、費(fèi)力，有效性有限，難以臨床普遍開(kāi)展。4近年來(lái)，也有學(xué)者嘗試將比較基因組雜交應(yīng)用于染色體易位的分析，該技術(shù)不需染色體培養(yǎng)，一次雜交實(shí)驗(yàn)即可檢測(cè)出待測(cè)樣本整個(gè)基因組情況，彌補(bǔ)了FISH僅能檢測(cè)個(gè)別染色體或部分位點(diǎn)的不足，但CGH實(shí)驗(yàn)過(guò)程繁瑣，對(duì)操作人員和圖像分析系統(tǒng)要求高，且整個(gè)過(guò)程需要時(shí)間較長(zhǎng)，診斷后的胚胎需要冷凍，該技術(shù)普遍應(yīng)用于臨床尚需一段時(shí)間。5對(duì)于女方染色體易位攜帶者，還可以采用第一極體進(jìn)行分析。由于第一極體的染色體在排卵后有限的時(shí)間內(nèi)處于分裂期，可用WCP探針通過(guò)FISH方法檢測(cè)第一極體的染色體結(jié)構(gòu)來(lái)推斷卵子染色體組成。應(yīng)用第一極體進(jìn)行植入前診斷具有安全性高、避免倫理道德的沖突以及胚胎期高比例的嵌合型的影響等優(yōu)點(diǎn)，能夠區(qū)分正常和平衡易位胚胎，還能為研究卵子分離的規(guī)律提供信息。1998年MUNNé等首次應(yīng)用第一極體對(duì)女性染色體易位攜帶者進(jìn)行PGD，獲得了成功妊娠。但由于極體活檢和固定的難度高，以及極體本身一些生物學(xué)特性的限制，應(yīng)用全染色體涂抹探針對(duì)第一極體進(jìn)行FISH的研究不多，我國(guó)尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。本研究將針對(duì)染色體易位攜帶者引起的不育及反復(fù)自然流產(chǎn)等生育難題采用第一極體進(jìn)行PGD研究，包括兩部分，第一部分建立應(yīng)用WCP進(jìn)行第一極體染色體分析的方法，了解該方法對(duì)女性染色體易位攜帶者進(jìn)行PGD的可行性并探討具體操作方法；第二部分用第一極體FISH方法對(duì)染色體易位攜帶者進(jìn)行植入前遺傳學(xué)診斷，降低染色體易位患者的自然流產(chǎn)率，使其能夠生育表型和基因型均正常的健康后代。