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簡介：新疆醫(yī)科大學碩士學位論文成人急性髓性白血病細胞遺傳學和分子生物學表達的初步研究姓名王蕾申請學位級別碩士專業(yè)內科學指導教師哈力達亞森200909新疆醫(yī)科大學醫(yī)學碩士學位論文２MOLECULARCYTOGEICABNMALITIESINADULTPATIENTSWITHACUTEMYELOIDLEUKEMIAPOSTGRADUATEWANGLEISUPERVISHALIDAYASENPARAPROFESSABSTRACTOBJECTIVETHEINCIDENCEDEVELOPMENTOFTUMSWHICHMAYBECLOSELYRELATEDTOCYTOGEICABNMALITIESACUTEMYELOIDLEUKEMIAAMLISAMALIGNANTTUMOFHEMOPOIETICSYSTEMITHASBEENSTUDIEDTHATTHEMAJITYOFPATIENTSWITHLEUKEMIAHAVENONROMCHROMOSOMEABERRATIONSFUSIONGENEWHICHMAYPROVIDEIMPTANTINFMATIONFTYPINGPROGNOSTICEVALUATIONOPTIONSOFTREATMENTEVENTHERESEARCHESOFPATHOGENESISTHEPURPOSEOFTHISARTICLEISTOSTUDYTHEDISTRIBUTIONOFKARYOTYPETHERELATIONSHIPBETWEENCHROMOSOMEABNMALITIESPROGNOSTICINAMLACCDINGTOKNOWNDOMESTICINTERNATIONALHIERARCHICALCYTOGEICCLASSIFICATIONMETHODSCYTOGEICEXAMINATIONOFBONEMARROWCELLSWASPERFMEDBYSHTTURNCULTUREMETHODGBINGTECHNIQUEWASUSEDFKARYOTYPEANALYSISAML1ETOFUSIONGENEPMLRARAALPHAFUSIONGENEWEREANALYZEDRESPECTIVELYBYRQPCRIN95AMLPATIENTS64PATIENTSACCEPTEDTHETWOCOURSEOFTREATMENTTHEIRRESPONSESURVIVALRATEWEREANALYZEDRESULTSKARYOTYPICABNMALITIESWEREDETECTEDIN50OF95PATIENTS526THEEXPRESSIONRATEINFABSUBTYPESWEREM3923M2447M4214M150M51676CASESWERENUMERICALABNMALITIES24CASESWITHVARIANTOFT15；1715CASESWITHVARIANTOFT8；12WEREDETECTEDDMANTVARIANCETRANSLOCATIONSWEREFOUNDWHENAPPLYINGRQPCRTECHNIQUETODETECTAML1ETOFUSIONGENEPMLRARAFUSIONGENEWHICHWEREASSOCIATEDWITHFABSUBTYPESM2M3TOANALYZETHEREMISSIONRATEACCEPTEDTHETWOCOURSEOFTREATMENTABOUTTHE64PATIENTSEXCEPTM3ITCLASSIFYTHREEGROUPSACCDINGTOCYTOGEICSTHEHIGHRISKGROUPWAS50MEDIATERISKGROUPWAS745LOWRISKWAS889THEREMISSIONRATEWERESTATISTICALLYDIFFERENCE（P005）INTHREEGROUPSCONCLUSIONCHROMOSOMEANALYSISDETECTIONOFFUSIONGENESAREHELPFULINTHEDIAGNOSISOFAMLTHEDIFFERENTIATIONOFAMLSUBTYPETREATMENTGEICABNMALITYISAFACTINFLUENCESTHETREATMENTRESPONSEOFACUTELEUKEMIAKEYWDSACUTEMYELOIDLEUKEMIA；CHROMOSOME；FUSIONGENES；PROGNOSIS

簡介：為進一步探討ACEI和ATRA及其聯(lián)合應用對于心血管疾病的作用及其作用機理我們采用培養(yǎng)的人血管內皮細胞細胞株ECV304作為研究對象觀察兩種藥物及其聯(lián)合應用對于AMGII作用下導致的血管內皮細胞變化的作用和影響從而在細胞和分子生物學水平上探討藥物卡托普利和氯沙坦聯(lián)合應用對于內皮細胞保護作用以及對于心血管疾病治療作用的可能機制1、培養(yǎng)條件下的血管內皮細胞在ANGII作用下細胞凋亡率明顯增加且在一定的范圍內呈現(xiàn)明顯的劑量依賴性和時間依賴性同時細胞凋亡調控基因、多種細胞因子MRNA的表達、細胞RASRA、ANGII、ALD的表達也發(fā)生了明顯的變化并與ANGII的濃度和作用時間均有一定的關系2、ACEI和ATLRA兩類藥物單獨應用及合用時對內皮細胞因ANGII刺激導致的凋亡、凋亡調控基因、多種細胞因子MRNA表達及細胞RAS表達的變化有較好的干預作用而且卡托普利和氯沙坦合用的作用效果明顯好于兩種藥物的單獨應用在相同劑量下卡托普利的作用強于氯沙坦3、兩藥合用在較小的劑量下即可發(fā)揮較強的作用提示兩藥合用的小劑量原則這樣既可發(fā)揮良好的治療效果又可減少藥物的不良反應

簡介：復旦大學博士學位論文幕上星形膠質細胞瘤MR表現(xiàn)的分子生物學相關因素的研究姓名張輝申請學位級別博士專業(yè)影像醫(yī)學與核醫(yī)學指導教師周康榮2002426第二部分幕上星形膠質細胞瘤胍征象與微血管密度的相關性研究，目的探討星形膠質細胞瘤MR影像學特征與腫瘤微血管密度的相關性，研究MRI對該腫瘤生物學行為及惡性程度的評估價值OF’，材料與方法對88例術前MR檢查及術后病理證實的幕上星形膠質細胞瘤標本進行免疫組化染色，測定微血管密度MICROVESSELDENSITY，MVD。按照WHO腦腫瘤分類標準將星形膠質細胞瘤分為三組低級別星形細胞瘤LGA49例、間變性星形細胞瘤AA23例和多形性膠質母細胞瘤GBM16例。LO例正常成人腦組織作為對照組。磁共振常規(guī)頭顱掃描后行DDDTPA增強掃描。在MR圖像上測量腫瘤大小、形狀、囊變壞死、信號均勻性、穿越中線、占位效應、邊緣界線、出血、瘤周水腫范圍及強化程度。結果星形膠質細胞瘤MVD平均值為35731565，正常對照組MVD值為1410527，兩組間比較差異顯著P001。星形膠質細胞瘤大小、形狀與MVD比較，無統(tǒng)計學差異P005。隨著腫瘤病理級別的增高，微血管形態(tài)由以竇狀擴張為主，逐漸轉變成以芽狀或細索狀血管為主，部分出現(xiàn)球狀血管叢。MVD值亦隨之增大，GBM組MVD明顯高于AA、LGA組，三組之間比較差異顯著PO01。MR圖像中，星形膠質細胞瘤壞死、出血、信號不均勻、穿越中緣關系密切P005，P001。聲一一萬結論星形膠質細胞瘤MVD除了與腫瘤大瘤周水腫及占位效應、強化程度與MVD小、形態(tài)無關聯(lián)外，與腫瘤的囊變壞死、意義。粼詞唾篡鬻渾移螂度免疫組化技術廠相關性研究，1／

簡介：背景和目的急性血栓性肺栓塞是臨床常見病嚴重威脅著患者的健康和生命提高該病的治愈率改善患者的預后是臨床工作者面臨的重大問題臨床研究發(fā)現(xiàn)雖經積極的抗凝和溶栓治療部分肺栓塞患者肺動脈內的栓子仍未能完全溶解以至發(fā)生慢性血栓栓塞性肺動脈高壓嚴重降低患者的生活質量乃至危及生命因此探討影響肺動脈內血栓溶解的因素顯得尤為重要研究發(fā)現(xiàn)深部靜脈血栓和肺栓塞的栓子本身具有溶栓抵制的特性主要是基于栓子內RAI1水平的升高另一方面栓塞局部環(huán)境內凝血和纖溶因素的變化可能對栓子的溶解也起著一定作用該研究從凝血系統(tǒng)的啟動因素組織因子TF及其抑制物TFPI以及纖維系統(tǒng)中主要的纖溶酶原激活物TPA及其抑制物PAI1著手研究栓塞肺動脈組織內各因子MRNA的表達水平探討栓塞局部環(huán)境凝血和纖溶的變化及該變化對血栓轉歸的影響同時研究肺栓塞對全身其它組織凝血和纖溶帶來的變化為臨床治療提供參考

簡介：中國醫(yī)科大學博士學位論文特異性下調內質網分子伴侶GRP94對人大腸癌細胞生物學特性影響的研究姓名陳瑤申請學位級別博士專業(yè)細胞生物學指導教師宋今丹200331功能，還有助于理解UPR通路的變化。基于此，我們選擇了人大腸癌細胞株CCL229作為研究對象，通過特異性核酶打靶的方式，下調細胞中GRP94的表達水平，觀察其對人大腸癌細胞某些生物學特性及UPR通路的影響，加深對GRP94、UPR和腫瘤這三者間關系的了解。方法1穩(wěn)定下調GRP94的人大腸癌細胞克隆株的構建1分別對含有特異性打靶GRP94核酶的質粒PRE／RSVRIBOL和對照組質粒PRE／RSV進行小量提取、PVULI酶切鑒定。‘2測定PRC／RSVRIBOL和PRE／RSV的基因序列，以質粒DNA大量提純方法獲得純化的質粒。3按照FUGENE?！?TRANSFECTIONREAGENT說明書分別用兩種質粒轉染人大腸癌細胞CCL229。4分別通過RTPER方法和WESTERNBLOT方法從MRNA和蛋白水平檢測GRP94的表達情況，以此鑒定轉染成功的陽性克隆株。2檢測GRP94表達水平下降對人大腸癌細胞生物學特性的影響1光鏡下觀察細胞的形態(tài)、貼壁狀態(tài)、聚集生長能力和生長速度。2繪制細胞生長曲線，計算細胞群體倍增時間。3檢測細胞聚集能力，計算細胞的聚集度。4流式細胞儀檢測細胞周期分布。3檢測GRP94表達水平下降對相關分子伴侶GRP78和PDI的影響1分別通過RTPER方法和WESTERNBLOT方法從MRNA和蛋白水平檢測分子伴侶GRF78的表達情況。2分別通過LITPER方法和WESTERNBLOT方法從MRNA和蛋白水平檢測折疊酶PDI的表達情況。4檢測GRP94表達水平下降對UPR中CHOP通路的影響1利用WESTERNBLOT和免疫細胞化學方法檢測UPR通路特異的，與程序性死亡密切相關的CHOP蛋白表達水平。5檢測穩(wěn)定下調GRP94表達水平的細胞株對化療藥物的敏感性2

簡介：原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究所取得的成果。除文中己經注明引用的內容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本文的研究作出重要貢獻的個人和集體，均己在文中以明確方式標明。本人完全意識到本聲明的法律責任由本人承擔。論文作者簽名單塹止日期砂華沙、，‘關于學位論文使用授權的聲明本人完全了解山東大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留或向國家有關部門或機構送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱本人授權山東大學可以將本學位論文的全部或部分內容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或其他復制手段保存論文和匯編本學位論文。保密論文在解密后應遵守此規(guī)定論文作者簽名導師簽名工嘎級日期WQS山東大學博士論文兒于出生時留取臍血檢測HBVDNA。入選研究的孕婦，均符合2000年全國肝炎會議擬定的無癥狀乙肝病毒攜帶者診斷標準。早產兒、低體重兒、窒息兒及有妊娠期出血史產婦所分娩的新生兒排除本研究。孕婦外周血和新生兒臍血血清中HBVDNA均陽性者作為研究組，孕婦外周血HBVDNA陽性但新生兒臍血血清中HBVDNA陰性者作為對照組，用PCR微板核酸雜交一ELISA法行HBV基因分型。所有新生兒于出生后12小時內及第14天各注射乙肝免疫球蛋白HBIG200U，出生24小時內、1月及6月齡共接種3次乙肝疫苗，對新生兒及嬰兒進行前瞻性隨訪研究，由產婦自愿選擇母乳喂養(yǎng)或人工喂養(yǎng)，分別于嬰兒7月及12個月時隨訪，檢測嬰兒外周靜脈血HBVDNA及乙肝血清標志物，同時詢問嬰兒喂養(yǎng)方法，母乳喂養(yǎng)1個月以上者為母乳喂養(yǎng)組，從未行母乳喂養(yǎng)的為人工喂養(yǎng)組，母乳喂養(yǎng)少于1月者排除本研究。嬰兒7月時未感染乙肝但抗一HBS陰性者給予乙肝疫苗5119加強注射。結果1乙肝血清學標志物HBSAGHBEAG及抗一HB。均陽性孕婦血清中HBVDNA均陽性，陽性率為1004949HBSAG與HBEAG陽性者HBVDNA陽性率亦為100A1616HBSAG及抗一HBC陽性者，HBVDNA陽性率為54171324HBSAG、抗一HBE及抗一HBC陽性者HBVDNA陽性率較低，僅為4173N2。單純HBSAG陽性和HBSAG及抗一HBE陽性孕婦無1例HBVDNA陽性。2HBSAGHBEAG及抗一HBC均陽性孕婦所生的新生兒臍血HBVDNA陽性率最高，為1837949HBSAG與HBEAG陽性及HBSAG與抗一HBC陽性者次之，分別為1250216及12503124HBSAG、抗一HBE及抗一HBC陽性者為133175。單純HBSAG陽性和HBSAG及抗一HBE陽性孕婦無1例新生兒臍血陽性。HBSAGHBEAG及抗一HBC均陽性孕婦所生的新生兒臍血HBVDNA陽性率與HBSAG、抗一HBE及抗一HBC陽性者有統(tǒng)計學意義Z29415P0002HBSAG與抗一HBC陽性孕婦所生的新生兒臍血HBVDNA陽性率與HBSAG、抗一HBE及抗一HBC陽性孕婦所生的新生兒臍血HBVDNA陽性率有統(tǒng)計學意義P0043其余各組對比無統(tǒng)計學意義。315例臍血HBVDNA陽性的新生兒11例發(fā)生于HBEAG陽性的孕婦，陽性率為16921165，僅4例發(fā)生于HBEAG陰性的孕婦，陽性率為377O3774106HBEAG陽性與HBEAG陰性孕婦所生新生兒臍血HBVDNA陽性率有統(tǒng)計學意義X28706P0003。

簡介：目的研究溫針灸治療膝骨關節(jié)炎虛寒證的臨床療效、并探討其基因表達譜等方面的生物學基礎。方法1臨床證候及療效研究選取符合西醫(yī)診斷標準的膝骨關節(jié)炎，中醫(yī)辨證為虛寒證的66例患者，隨機分為33例溫針灸組與33例針刺組。取關元、氣海和足三里為主穴，膝眼、陽陵泉為配穴，治療14天。用疼痛量表和虛寒證量表對治療前后分別計量評分，以評價兩種療法的療效。2生理學研究選擇10例骨關節(jié)炎虛寒證患者與10例正常人，從植物神經系數(shù)、交感皮膚反應、體表溫度、植物神經反射等方面進行比較研究。3基因表達譜研究選取骨關節(jié)炎虛寒證患者8例與8例正常人作基因表達譜的深入研究，又從中選出3例顯效患者作治療前后的基因芯片比較?；蛐酒瑢嶒灧椒槿⊙?0ML，提取MRNA，逆轉錄為CDNA，用CY3和CY5兩種熒光物質分別標記，制備成探針，在22000點的基因芯片上進行雜交，通過計算機掃描后進行數(shù)據(jù)分析。討論本研究從臨床和基礎角度對溫針灸治療骨關節(jié)炎虛寒證的療效進行了分析和探討，溫針灸和針刺療法均能緩解膝關節(jié)炎的疼痛，改善膝關節(jié)的功能障礙，但溫針灸療效明顯優(yōu)于單純針刺，溫針灸是治療膝骨關節(jié)炎虛寒證的有效療法；生理學基礎研究提示了植物神經與骨關節(jié)炎虛寒證有一定的相關性；從微觀的差異基因表達譜探討宏觀虛寒證證候及個案的分子療效分析，提示了溫針灸治療骨關節(jié)炎虛寒證與調節(jié)免疫、代謝相關基因的異常表達有關。

簡介：重慶醫(yī)科大學碩士學位論文兩種宿主來源毛首線蟲形態(tài)學與分子生物學的分類研究姓名斯健申請學位級別碩士專業(yè)病原生物學指導教師童新華20050501重慶醫(yī)科大學碩E研究生學位論文符號說明1符號列表毫升微升兄毫克納克兆帕分鐘秒毫克／毫升攝氏度毫米微米摩爾ISB毫摩爾／升毫摩爾／升吸光度值伏轉／分鐘質量／體積分子量向Ⅲ。嘴唱‰疵L|咖℃一岬一一刪∞V呻州刪

簡介：中南大學碩士學位論文RNAI封閉內源性CMYC對鼻咽癌細胞58F生物學特性及分子機制影響的初步研究姓名牛朝霞申請學位級別碩士專業(yè)病理學與病理生理學指導教師李桂源20070501中文摘要CONTROL細胞系。通過RTPCR齊IWESTEMBLOT鑒定CMYC基因的封閉效果，結果發(fā)現(xiàn)與對照組相比，I能有效抑制CMYC的高表達，效果達70％75％；II的效果不明顯。因此我們選擇抑制效果最佳的58F／SIRNACMYCI／C3口D性單克隆細胞系進行后續(xù)實驗?！疽种艭MYC基因高表達對58F細胞超微結構的改變】將58F、58F／SIRNACONTROL和58F／SIRNACMYCI／C3進行透射電鏡掃描，結果顯示抑制CMYC表達的58F細胞表面微絨毛逐漸脫落，稀少；部分細胞結構趨于正?；?，胞漿內線粒體數(shù)量中等，結構較清晰，少量內質網；部分細胞趨于靜止狀態(tài)，胞漿內線粒體嵴丟失或呈空泡變，內質網輕度擴張?？瞻讓φ占拔刺幚?8F細胞表面微絨毛較豐富，胞漿內線粒體數(shù)量較多，結構較清晰，核漿比例嚴重失調。表明封閉CMYC的高表達有利于細胞間的緊密接觸，增強接觸抑制，不利于細胞的快速生長，從而逆轉58F細胞的惡性生物學行為?！疽种艭MYC高表達對58F細胞生長的影響】將58F、58F／SIRNACONTROL和58F／SIRNACMYCI／C3細胞分別接種200個到平板中，靜止培養(yǎng)14天左右直至肉眼可見克隆形成，終止培養(yǎng)，觀察每組細胞的克隆形成數(shù)并計算克隆形成率；分別取O5104個細胞接種于96孔板，每種細胞接種8孔，連續(xù)6天在酶聯(lián)免疫檢測儀上測定各孔吸光度值，進行MTT檢測；分別取IXL04個細胞接II

簡介：心肌肥厚是心臟對多種疾病包括高血壓、機械壓力負荷、心肌梗塞、心律失常、內分泌機能紊亂以及心肌收縮蛋白基因突變而產生的適應性病理反應。在疾病早期，因心臟作功增加可引起代償性心肌肥厚反應。持續(xù)性的心肌肥厚能夠引起擴張性心肌病、心律失常、心力衰竭甚至猝死。心肌肥厚是引起心血管疾病發(fā)病率和病死率的獨立危險因素。研究發(fā)現(xiàn)在心肌肥厚時左心室重量普遍增高，心血管事件發(fā)生率是無心肌肥厚者的24倍。心肌肥厚不僅是一個病理生理過程，而更是一個影響其短期和長期預后的失代償性變化。它的不可逆性進展可以直接導致心力衰竭。目前臨床上用于治療心肌肥厚的治療藥物主要有血管緊張素轉化酶抑制劑、血管緊張素受體拮抗劑和鈣離子通道阻滯劑，但皆因存在不同程度的副作用而使其臨床應用受到一定限制。而心肌肥厚的治療是一個長期的過程，因此尋找一些療效好而毒副作用低的藥物顯得十分必要。丹參酮ⅡA是中藥丹參的主要脂溶性成分。目前已發(fā)現(xiàn)丹參酮ⅡA可以減輕、逆轉高血壓左心室肥厚，但其具體作用機制尚未闡明。本研究擬在腹主動脈縮窄的高血壓大鼠上構建心肌肥厚模型，將丹參酮ⅡA與經典的抗心肌肥厚藥物血管緊張素1型受體拮抗劑纈沙坦比較，以探討丹參酮ⅡA逆轉心肌肥厚的分子生物學機制。目的研究丹參酮ⅡA對腹主動脈縮窄術后大鼠左室心肌肥厚的作用。方法40只健康SD大鼠，行腹主動脈縮窄術建立高血壓左室心肌肥厚模型，另取8只大鼠行假手術。術后4周將手術大鼠隨機分為心肌肥厚組、丹參酮低劑量組10MGKGD腹腔注射、丹參酮高劑量組20MGKGD腹腔注射及纈沙坦組10MGKGD灌胃。用藥8周后通過超聲心動圖測定左室后壁、室間隔的厚度及左室射血分數(shù)EF；取左心室組織檢測左心室質量指數(shù)LEFTVENTRICULARMASSINDEX，LVMI、病理切片HE染色測量心肌纖維直徑MYOCARDIALFIBERDIMENSION，MFD。結果1心肌肥厚組、丹參酮組高、低劑量的血壓顯著高于假手術組及纈沙坦組P＜001，丹參酮高、低劑量組及心肌肥厚組之間無統(tǒng)計學差異P﹥005，纈沙坦組的血壓值降至正常、但仍明顯高于假手術組P＜005。2丹參酮高、低劑量組和纈沙坦組的室間隔厚度均高于假手術組P＜005，顯著低于心肌肥厚組P＜001；丹參酮兩組的室間隔厚度無差異P﹥005，但高于纈沙坦組P＜005。3丹參酮低劑量、高劑量組及纈沙坦組之間左室后壁值數(shù)據(jù)沒有顯著性差異P005，此三組左室后壁值均明顯低于心肌肥厚組P＜001，但尚未恢復至正常水平P＜005。4所有各組的EF值均在正常值范圍60％，尚未表現(xiàn)出心功能衰竭。但心肌肥厚組的EF值小于其他各組P＜005，丹參酮組的EF也小于纈沙坦組P＜005。5丹參酮低劑量和高劑量組間LVMI和MFD沒有顯著性差異P005，纈沙坦組和丹參酮各組的LVMI、MFD均高于假手術組P＜005，顯著低于心肌肥厚組P＜001；丹參酮兩組的LVMI、MFD均高于纈沙坦組P＜005。結論丹參酮ⅡA對心肌肥厚的逆轉作用是非血壓依從性的。丹參酮ⅡA與血管緊張素Ⅱ1型受體拮抗劑纈沙坦均可阻止、逆轉高血壓心肌肥厚的發(fā)展，但其作用弱于纈沙坦。第二部分丹參酮ⅡA對腹主動脈縮窄大鼠肥厚心肌血管緊張素受體的影響目的通過研究丹參酮ⅡA對腹主動脈大鼠肥厚心肌血管緊張素受體及細胞內游離鈣離子的影響，探討丹參酮ⅡA逆轉高血壓左心室肥厚的分子生物學機制。方法取各組大鼠的左心室組織，采用逆轉錄聚合酶鏈式反應RTPCR、免疫印記法WESTERNBLOTTING分別檢測AT1、AT2受體MRNA和蛋白的表達水平。利用激光共聚焦顯微鏡測定心肌細胞內CA2濃度的變化。結果1心肌肥厚組的AT1MRNA和蛋白的表達顯著高于其他各組P＜001；丹參酮ⅡA高、低劑量組間無差異P﹥005，丹參酮ⅡA組高于纈沙坦組P＜005；丹參酮ⅡA組和纈沙坦組的AT1基因表達均未降至假手術組水平P＜005。2纈沙坦組的AT2MRNA和蛋白表達水平較其他各組升高P＜005，其他各組之間無統(tǒng)計學差異P﹥005。3心肌肥厚組細胞內CA2I明顯高于其他各組P＜001；丹參酮高劑量組與假手術組之間無統(tǒng)計學差異P﹥005；纈沙坦組和丹參酮低劑量組仍高于假手術組和丹參酮高劑量組P＜005；丹參酮低劑量組細胞內鈣濃度與纈沙坦組之間無差異P﹥005。結論丹參酮ⅡA和纈沙坦均可通過下調AT1基因表達、阻止心肌細胞的鈣離子內流發(fā)揮逆轉心肌肥厚的作用，AT2有可能參與了纈沙坦降低血壓、逆轉心肌肥厚的作用。第三部分丹參酮IIA對腹主動脈縮窄高血壓大鼠肥厚心肌一氧化氮合酶的影響目的通過研究丹參酮ⅡA對腹主動脈縮窄大鼠肥厚心肌一氧化氮合酶的影響，探討丹參酮ⅡA逆轉高血壓左心室肥厚的分子生物學機制。方法取各組大鼠的左心室組織，利用硝酸還原酶法測定心肌組織的NO含量，采用逆轉錄聚合酶鏈式反應RTPCR、免疫印記法WESTERNBLOTTING分別檢測ENOS的基因表達水平和蛋白激酶CPKC的活性。結果1假手術組的心肌組織NO含量明顯高于其他各組P＜001；丹參酮高、低劑量組與纈沙坦組之間無統(tǒng)計學差異P﹥005，但此三組的NO含量明顯高于心肌肥厚組P＜001。2心肌肥厚組的ENOSMRNA和蛋白表達水平明顯低于其他各組P＜001，纈沙坦組低于假手術組和丹參酮組P＜005，丹參酮高、低劑量組與假手術組之間無差異P﹥005。3心肌肥厚組的PKC蛋白水平明顯高于其他各組P＜001，纈沙坦組低于假手術組和丹參酮組P＜005，丹參酮高、低劑量組與假手術組之間無差異P﹥005。結論心肌局部的NONOS系統(tǒng)與心肌肥厚的病理過程密切相關。丹參酮ⅡA可能通過抑制PKC的蛋白活性、促進心肌局部ENOS的基因表達和內源性NO的產生，發(fā)揮其逆轉心肌肥厚的藥理作用。

簡介：中圖分類號UIC學校代碼10055密級公開尚媳夫溪博士學位論文重要塾痘螢麥畫拉厘絲公王生塑堂丑究GENETICBASISOFBACTERIALSURFACEANTIGENSINSALMONEHNANDFEOLI論文作者塑逵申請學位堡堂擅±學科專業(yè)邀生絲堂．答辯委員會主席撻敦LS26521指導教師王墨熬握培養(yǎng)單位生金型堂堂瞳研究方向紲董基固組堂皇遂堡堂評閱人筮建亙毖玉蠱薟熟揚遄馥王亟南開大學研究生院二OO年四月南開大學學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學位論文，是本人在導師指導下進行研究工作所取得的研究成果。除文中已經注明引用的內容外，本學位論文的研究成果不包含任何他人創(chuàng)作的、已公開發(fā)表或者沒有公開發(fā)表的作品的內容。對本論文所涉及的研究工作做出貢獻的其他個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本學位論文原創(chuàng)性聲明的法律責任由本人承擔。學位論文作者簽名胡遺2010年6月1日非公開學位論文標注說明根據(jù)南開大學有關規(guī)定，非公開學位論文須經指導教師同意、作者本人申請和相關部門批準方能標注。未經批準的均為公開學位論文，公開學位論文本說明為空白。論文題目申請密級口限制≤2年口秘密≤10年口機密420年保密期限20年月日至20年月日審批表編號批準日期20年月日限制★2年最長2年，可少于2年秘密★10年最長5年，可少于5年機密★20年最長10年，可少于10年

簡介：目的探討臨床常見曲霉菌（煙曲霉、黃曲霉、黑曲霉、土曲霉、構巢曲霉）對經典的抗真菌藥物伏立康唑、伊曲康唑、兩性霉素B和新的抗真菌藥物泊沙康唑、卡泊芬凈的體外敏感性建立應用實時熒光PCR技術將臨床常見曲霉菌鑒定至種的水平。方法對所收集的真菌通過形態(tài)學和或分子生物學鑒定，采用濃度梯度法（ETEST）測定伏立康唑、伊曲康唑、泊沙康唑、兩性霉素B及卡泊芬凈對5種曲霉菌的最低抑菌濃度（MIC）；采用液氮研磨、試劑盒純化方法提取曲霉菌細胞核DNA，普通PCR方法擴增5種（47株）曲霉菌的內轉錄間隔區(qū)（ITS），測序獲得ITS區(qū)序列，基于不同種曲霉菌的ITS區(qū)序列對種特異性探針進行驗證和改進，建立實時熒光PCR方法將常見曲霉菌通過特異性探針解鏈溫度（TM）的差異進行區(qū)分并對該方法的靈敏度、特異性及重復性進行評價。結果形態(tài)學觀察基本上能將臨床常見的5種曲霉菌鑒定到種，對于其他種屬形態(tài)學可以將其鑒定到屬的水平，但是較難鑒定到種?？ú捶覂魧熐埂ⅫS曲霉、構巢曲霉的MIC90均為0094ΜGML，對黑曲霉的MIC90為019ΜGML，在5種藥物中最低；泊沙康唑對土曲霉的MIC90最低，為0094ΜGML；對于煙曲霉和黃曲霉，MIC90由低到高依次為卡泊芬凈、泊沙康唑、伏立康唑、伊曲康唑、兩性霉素B；土曲霉對兩性霉素B的MIC均32ΜGML。MASTERPURETMYEASTDNAPURIFICATIONKIT提取的DNA量很低，固體培養(yǎng)液氮研磨方法、液體培養(yǎng)液氮研磨方法以及固體培養(yǎng)液氮研磨試劑盒純化方法提取的DNAOD260OD280的均值分別為173、196和180。煙曲霉、黃曲霉、黑曲霉、構巢曲霉種特異性探針TM值分別為614℃、574℃、677℃、658℃，土曲霉特異性探針的TM值為645℃和552℃。實時熒光PCR方法對煙曲霉、黃曲霉、黑曲霉、土曲霉、構巢曲霉的檢測下限分別為568FG、1110FG、137FG、123FG、780FG。疣狀瓶霉和小孢根霉能與煙曲霉特異性探針發(fā)生交叉反應。該方法在每次重復實驗中TM值的波動在05℃以內。結論形態(tài)學結合RDNAITS區(qū)測序對真菌種的鑒定很有幫助。ETEST法體外藥敏結果顯示，新的棘白素類抗真菌藥物卡泊芬凈對五種曲霉具有很好的體外抗菌活性，唑類藥物對于曲霉菌的體外抗菌活性優(yōu)于兩性霉素B。采用固體培養(yǎng)液氮研磨法試劑盒純化法能獲得高純度的曲霉菌DNA。實時熒光PCR方法具有很好的靈敏度、特異性和重復性，能將臨床常見的5種曲霉鑒定到種的水平。

簡介：博士學位論文學校代碼學號L0023B2009003中國地區(qū)2371例淋巴組織腫瘤分布特點的分析及原發(fā)性腸道T細胞及NK細胞淋巴瘤的臨床病理及分子生物學特點的研究所院北京協(xié)和醫(yī)院似姓名孫健指導教師陳杰導師小組崔全才，盧朝輝學科專業(yè)病理學與病理生理學臨床型研究方向淋巴瘤的臨床病理及分子生物學特點完成日期2011年5月”圜醫(yī)學科學院、北京協(xié)和醫(yī)學院博士學位論文2中文摘要第一部分中國地區(qū)2371例淋巴組織腫瘤分布特點的分析為了研究中國地區(qū)淋巴組織腫瘤的分布特征，我們收集了4家大型醫(yī)院20042008年明確診斷為淋巴組織腫瘤的2371例病例，對其按WHO組織學類型、性別、年齡及發(fā)生部位進行了詳細分類及分析。在這2371例病例中，成熟B細胞腫瘤占6820％，成熟T／NK細胞腫瘤占2117％，霍奇金淋巴瘤占742％，前驅淋巴組織腫瘤占321％。依據(jù)WHO分型，所收集的病例中最常見的組織學類型為彌漫大B細胞淋巴瘤3568％，其他常見的類型依次為結外邊緣區(qū)淋巴瘤9。62％，經典型霍奇金淋巴瘤72L％，B細胞淋巴瘤，未分類582％，外周T細胞淋巴瘤，非特殊類型553％，T／NK細胞淋巴瘤，未分類544％及結外N科T細胞淋巴瘤502％。在大多數(shù)組織學類型的腫瘤中，男性所占比例明顯較女性高。所有腫瘤總的男／女為162。大多數(shù)成熟非霍奇金淋巴瘤發(fā)生于成年人，平均年齡為522歲，而前驅淋巴組織淋巴瘤則多發(fā)生于年輕人，平均年齡為253歲。綜上，我們的結果顯示，中國地區(qū)的淋巴組織腫瘤有著獨特的分布特點，這些特點多與西方國家不同，但與遠東地區(qū)其他國家的分布特點相類似。第二部分原發(fā)性腸道T細胞及NK細胞淋巴瘤的臨床病理及分子生物學特點在西方國家，原發(fā)性腸道T細胞及NK細胞淋巴瘤的發(fā)生多與乳糜瀉相關，稱為經典型腸病相關T細胞淋巴瘤I型EATL。乳糜瀉在亞洲地區(qū)罕見，此地區(qū)原發(fā)性腸道T細胞及NK細胞淋巴瘤見諸報道的組織學類型多為II型EARI，、原發(fā)性腸道NK細胞淋巴瘤、外周T細胞淋巴瘤等。為了研究中國地區(qū)原發(fā)性腸道T細胞及NK細胞淋巴瘤的臨床病理及分子生物學特征，我們收集了北京協(xié)和醫(yī)院病理科19992009年間原發(fā)性腸道T細胞及NK細胞淋巴瘤病例38例，通過BIOMED2TCR基因重排、EBER原位雜交、免疫組化及對相關I臨床病理特點進行評估的方法，將此38例原發(fā)性腸道T細胞及NK細胞淋巴瘤病例進行詳細分型，并比較各類型間的臨床病理差異。基于BIOMED2TCR重排檢測結果及其他指標，我們首先將38例原發(fā)性腸道T細胞及NK細胞淋巴瘤病例分為NK細胞淋巴瘤組N6及T細胞淋巴瘤組N_32。NK細胞淋巴瘤組病人的平均年齡為37歲，所有的NK細胞淋巴瘤的腫瘤細胞EBER原位雜交均彌漫陽性且BIOMED2TCR重排陰性。與T細胞淋巴瘤組病例相比，NK細胞淋巴瘤組病人總體預后明顯較差且具有統(tǒng)計學意義P00247。通過對乳糜瀉病史的采集及對腫物周邊腸黏膜是否存在腸病的組織形態(tài)的評估，32例T細胞淋巴瘤組病例被進一步細分為II型EATL117，外周T

簡介：前言阿爾茨海默病ALZHCIMERSDISEASEAD是一種以進行性癡呆為主要特征的神經退行性疾病其主要臨床表現(xiàn)為進行性記憶力減退、認知功能下降和嚴重的精神障礙。老年斑SENILEPLAQUESP、神經原纖維纏結NEUROFIBRILLARYTANGLESNFTS和神經元缺失為其主要病理特征。SP主要出現(xiàn)在大腦皮質和海馬區(qū)域其核心成分是一種由39～43個氨基酸殘基構成的小神經肽AΒAMYLOIDBETAPEPTIDEAΒAΒ由淀粉樣前體蛋白AMYLOIDPRECURSPROTEINAPP等經過Β分泌酶及Γ分泌酶水解產生并分泌至細胞外。在正常生理狀態(tài)下人腦內存在極少量納摩爾級濃度的可溶性AΒ對神經元具有神經營養(yǎng)作用。但在AD時APP經過異常剪切加工形成大量AΒ且AΒ從可溶狀態(tài)轉變?yōu)椴蝗軤顟B(tài)最終在腦部形成淀粉樣沉積是AD發(fā)病機制中的關鍵環(huán)節(jié)。TAU蛋白是一種微管相關蛋白能與成熟神經元的微管結合起到促進微管形成和穩(wěn)定微管結構的作用。TAU蛋白磷酸化對其與微管的結合至關重要。然而異常的TAU蛋白聚合成雙股螺旋絲PARIEDHELICALFILAMENTSPHFS不利于其與微管結合并導致微管網絡不穩(wěn)定和神經元死亡。NFTS的形成與TAU蛋白過度磷酸化密切相關且NFTS的數(shù)量與患者的癡呆程度呈正相關。蛋白激酶如GSK3、CDK5和MAPK在TAU蛋白磷酸化過程中起重要作用。丙戊酸鈉VALPROATEVPA是一種廣泛用于治療癲癇和情感障礙的抗驚厥藥物和情緒穩(wěn)定劑。最近的研究顯示VPA也是一種預防和治療AD的潛在藥物。VPA通過抑制GSK3Β介導的APP的Γ位點剪切減少了AD轉基因小鼠AΒ產生和SP的形成改善學習記憶損傷。但是VPA是否影響TAU蛋白磷酸化及其潛在的機制尚不清楚。本研究首先給予APPPS1轉基因小鼠VPA治療后檢測SP形成、AΒ分泌情況、APP的代謝和對TAU蛋白磷酸化過程的作用途徑及作用效果進而探討VPA對AD小鼠腦組織SP和NLFTS形成的影響為探討AD的發(fā)病機制、尋找治療AD的有效藥物提供理論依據(jù)。此外本研究通過檢測VPA對岡田酸OKADAICACIDOA刺激引起的SHSY5Y細胞TAU蛋白磷酸化的影響及相關蛋白激酶的變化進一步在細胞水平探討VPA在AD中的神經保護作用及其機制。實驗材料和方法APPPS1APPSWEPSEN1DE9轉基因小鼠購自美國JACKSON實驗室通過常規(guī)喂養(yǎng)2225℃50％濕度12H光照循環(huán)繁殖后經PCR進行基因型鑒定鑒定后的小鼠用于實驗。將20周齡的APPPS1轉基因小鼠隨機分為對照組和VPA治療組。VPA治療組小鼠腹腔注射VPA50MGKG每日1次對照組小鼠給予等量的生理鹽水。12周后小鼠經麻醉處死取材腦組織兩側半球分開右側腦組織于4％多聚甲醛中固定后石蠟包埋用于免疫組化分析左側腦組織80℃低溫冷凍保存用于生化檢測、免疫印跡、ELISA分析等。對OA處理的SHSY5Y細胞給予VPA作用24H然后應用免疫熒光和免疫印跡等方法檢測TAU蛋白磷酸化及其相關信號通路蛋白的變化。結果一、VPA對APPPS1轉基因小鼠腦內AΒ老年斑形成的影響1、VPA減少APPPS1轉基因小鼠腦內AΒ沉積和SP形成應用免疫組化技術觀察各組小鼠腦內SP的數(shù)量及大小結果表明VPA治療組小鼠的大腦皮層及海馬等區(qū)域出現(xiàn)的陽性SP數(shù)目與對照組相比分別顯著減少60％斑塊沉積也分別由055％降到026％、050％降到019％差異具有顯著的統(tǒng)計學意義P＜005。ELISA結果顯示VPA治療組小鼠腦內可溶性AΒ的水平由89PGMG降到77PGMG具有統(tǒng)計學意義。2、VPA對APPPS1轉基因小鼠腦內APP裂解酶蛋白表達的影響WESTERNBLOT結果分析表明與對照組相比VPA治療組APP695在蛋白水平沒有明顯變化P＞005。然后我們檢測了APP裂解酶的蛋白變化統(tǒng)計分析表明與對照組相比VPA治療組轉基因小鼠腦內APP裂解酶BACE1表達明顯減少11％P＜005而ADAM10和PS1的蛋白表達兩組比較沒有明顯差異P＞005。二、VPA對TAU蛋白磷酸化的影響一VPA對APPPS1轉基因小鼠腦內TAU蛋白磷酸化的影響1、VPA抑制APPPS1轉基因小鼠腦內TAU蛋白磷酸化應用WESTERNBLOT檢測APPPS1轉基因小鼠腦內TAU蛋白的幾個重要磷酸化位點THR205、THR231和SER396的磷酸化水平結果顯示在兩組實驗小鼠腦內總TAU蛋白表達無顯著差異的情況下VPA治療組小鼠腦內TAU蛋白的磷酸化程度明顯低于對照組降低幅度分別為65％THR205P＜00157％SER396P＜001和54％THR231P＜005。提示VPA抑制了APPPS1轉基因小鼠腦內TAU蛋白的磷酸化。2、VPA抑制APPPS1轉基因小鼠腦內CDK5和GSK3Β的活性用WESTERNBLOT檢測CDK5和GSK3磷酸化水平。與對照組相比VPA沒有明顯影響APPPS1轉基因小鼠腦內CDK5的蛋白水平但顯著降低了PCDK5TYR15的水平。定量分析表明VPA治療組小鼠腦內的PCDK5CDK5比值較對照組降低了34％P＜005。此外VPA治療組轉基因小鼠腦內PGSK3ΒSER9的表達水平明顯升高且PGSK3ΒGSK3Β比值增加了39％P＜005。但是PGSK3ΑGSK3Α比值未見明顯的變化P＞005。這些數(shù)據(jù)表明VPA治療明顯抑制了APPPS1轉基因小鼠腦內CDK5和GSK313的活性。3、VPA對APPPS1轉基因小鼠腦內P3525蛋白表達的影響由于CDK5的激活需要P35的存在P35裂解為P25可以持續(xù)激活CDK5因此我們進一步采用WESTERNBLOT檢測了P3525的蛋白表達。結果顯示P35的蛋白表達沒有明顯變化P＞005但未檢測到P25的蛋白表達。二VPA對OA處理的SHSY5Y細胞TAU蛋白磷酸化的影響1、VPA抑制OA處理的SHSY5Y細胞TAU蛋白磷酸化為了進一步在體外探討VPA對TAU蛋白磷酸化的影響我們用OA處理SHSY5Y細胞以誘導TAU蛋白磷酸化然后給予VPA作用24H觀察VPA對培養(yǎng)細胞的TAU蛋白磷酸化水平的影響。定量分析表明與對照組相比VPA處理組與對照組細胞總TAU蛋白的含量沒有明顯變化而VPA處理組細胞的TAU磷酸化水平分別降低40％THR205P＜00527％SER396P＜001和16％THR231P＜005。此外免疫熒光染色激光共聚焦掃描顯微鏡分析顯示VPA處理降低了磷酸化TAU蛋白THR231的熒光強度。上述結果表明VPA能抑制OA處理的SHSY5Y細胞TAU蛋白過度磷酸化。2、VPA抑制OA處理的SHSY5Y細胞CDK5和GSK313的活性激光共聚焦掃描顯微鏡分析結果顯示PCDK5免疫熒光強度在VPA處理的細胞中明顯降低。WESTERNBLOT結果表明與對照組相比VPA處理組PCDK5CDK5的比值顯著降低了38％。此外與OA處理的對照組細胞相比VPA處理組細胞PGSK3ΒGSK3Β的比值顯著增加了48％。CDK5的磷酸化水平與其活性成正相關而GSK3Β的磷酸化水平與其活性成負相關。因此以上數(shù)據(jù)表明VPA能抑制OA處理的SHSY5Y細胞CDK5和GSK3Β的活性。3、VPA對OA處理的SHSY5Y細胞P3525蛋白表達的影響激光共聚焦掃描顯微鏡分析結果表明VPA減少了P3525免疫熒光強度抗體可以識別P35和P25且同時伴有磷酸化TAU蛋白THR231免疫熒光強度的減弱。WESTERNBLOT結果顯示VPA處理并未改變OA處理的細胞中P35蛋白的表達水平而P25P35的比值顯著下降與對照組相比VPA處理使P25P35的比值下降了28％P＜005。結論1、VPA處理可以減少APPPS1轉基因小鼠腦內SP的形成和Β分泌酶的蛋白表達水平抑制APP的淀粉樣蛋白途徑；2、VPA處理可以抑制APPPS1轉基因小鼠腦內及OA處理的SHSY5Y細胞的TAU蛋白磷酸化；3、VPA通過抑制CDK5和GSK3的活性減少TAU蛋白的磷酸化；4、VPA可能通過CDK5P25途徑參與對TAU蛋白磷酸化的抑制。