簡介：第一部分IL35在原發(fā)免疫性血小板減少癥免疫失耐受中的作用研究背景原發(fā)免疫性血小板減少癥PRIMARYIMMUNETHROMBOCYTOPENIA，ITP是一種自身免疫介導的出血性疾病，由于免疫失耐受體內(nèi)產(chǎn)生針對自身血小板的抗體，導致血小板破壞過多及生成減少。IL35為IL12家族的新成員，是在機體炎癥反應(yīng)過程中由活化的天然型調(diào)節(jié)性T細胞NTREG產(chǎn)生的一種細胞因子。它能誘導效應(yīng)T細胞分化為可分泌IL35的誘導型調(diào)節(jié)性T細胞ITR35，從而形成級聯(lián)放大效應(yīng)，最終產(chǎn)生感染耐受。既往研究發(fā)現(xiàn)維持機體免疫平衡的NTREG在ITP患者外周血中存在數(shù)量減少及抑制功能的減弱，且ITP患者外周血血漿中IL35的水平顯著下調(diào)，且與血小板計數(shù)呈正相關(guān)，提示IL35可能參與了ITP的發(fā)病，但具體的機制尚不清楚。目的我們擬通過本研究闡明IL35在ITP患者中下調(diào)的原因及在免疫失耐受中的作用，同時評價體外誘導ITR35對血小板特異性自身免疫的調(diào)節(jié)作用，為基于IL35的靶向治療提供依據(jù)。方法1收集患者臨床資料2流式細胞術(shù)檢測ITP患者外周血中調(diào)節(jié)性T細胞和輔助性T細胞（TH1和TH17）及IL35刺激對后CD4、CD8和調(diào)節(jié)性T淋巴細胞的表達水平的影響3BRDU細胞摻入法檢測IL35對外周血單個核細胞PBMCS增殖的影響4ELISA方法檢測ITP患者血漿中IL35的水平以及IL35刺激前后PBMCS培養(yǎng)上清中IFNΓ、IL10、IL17和TGFΒ1的水平變化。結(jié)果1活動期ITP患者血漿中IL35的濃度明顯低于緩解期患者及正常對照組，緩解期ITP患者血漿中IL35的濃度明顯低于正常對照組。2與正常對照組相比，ITP患者外周血中NTREG的細胞比例明顯下降，TH1細胞比例明顯上調(diào)，而TH17細胞比例無統(tǒng)計學差異。3ITP患者血漿中下降的IL35表達水平與患者血小板計數(shù)、外周血NTREG的細胞比例呈正相關(guān)，與TH1細胞比例呈負相關(guān)，與TH17細胞比例無關(guān)。4外源性IL35的加入能明顯抑制活動期ITP患者PBMCS的增殖，進而行流式細胞術(shù)檢測顯示IL35能抑制CD4及CD8T細胞的增殖，但能促進NTREG的分化。5IL35促進ITP患者PBMCS產(chǎn)生更多的TGFΒ1和IL10，但卻抑制其產(chǎn)生IFNΓ和IL17。結(jié)論原發(fā)免疫性血小板減少癥患者外周血中降低的IL35可能通過調(diào)節(jié)自身T細胞及相關(guān)細胞因子參與其免疫失耐受。第二部分干擾素Α2B對原發(fā)性血小板增多癥患者異常骨髓間充質(zhì)干細胞生物學特性及功能的系統(tǒng)研究背景原發(fā)性血小板增多癥ESSENTIALTHROMBOCYTHEMIA，ET是一種費氏染色體陰性的慢性骨髓增殖性腫瘤，臨床上以出血傾向和血栓形成為特點。約55％的患者存在JAK2基因突變。以往的研究主要集中于存在突變的造血干祖細胞損傷機制方面，但因造血干祖細胞功能缺陷、體外不易擴增和易分化等缺點限制了此方面研究。最近有研究指出ET患者骨髓造血微環(huán)境可能存在缺陷。因此，研究骨髓造血微環(huán)境中的骨髓間充質(zhì)干細胞BONEMARROWMESENCHYMALSTEMCELLS，BMMSCS各種細胞成分的前體細胞的生物學特性及其功能對于ET患者發(fā)病機制的研究具有重要意義。近三十年來，干擾素Α2B（IFNΑ2B）因其抗腫瘤效應(yīng)、延緩骨髓纖維化進展以及無白血病轉(zhuǎn)化風險等特點在臨床上被廣泛應(yīng)用于ET患者的治療，但對于其作用機制目前主要集中在IFNΑ2B對惡性造血干祖細胞效應(yīng)方面的研究，其對骨髓微環(huán)境的影響目前尚不清楚。因此，深入了解IFNΑ2B對ET患者骨髓微環(huán)境的影響顯得尤為重要。目的本研究旨在系統(tǒng)、全面地比較研究ET患者和正常人BMMSCS生物學特性及功能的差異，為探討ET患者BMMSCS損傷機制提供實驗基礎(chǔ)及理論依據(jù)，同時為ET患者發(fā)病機制研究探討新思路。在證實ET患者骨髓間充質(zhì)干細胞存在缺陷的基礎(chǔ)上進一步探討IFNΑ2B對ET患者異常BMMSCS的生物學特性及功能的影響，為IFNΑ2B應(yīng)用于ET患者的臨床治療提供新的理論和實驗依據(jù)。方法1從ET患者和正常人骨髓組織中采用貼壁、傳代培養(yǎng)的方法獲取相對純化的骨髓間充質(zhì)干細胞2倒置顯微鏡觀察BMMSCS形態(tài)變化3流式細胞儀檢測BMMSCS表面標志4在誘導體系中，定向誘導BMMSCS向脂肪細胞、成骨細胞分化，用油紅O染色、茜素紅染色觀測脂滴形成、鈣鹽沉積情況，比較成脂、成骨的分化潛能5應(yīng)用CCK8試劑盒測定BMMSCS增殖情況并繪制增殖曲線6流式細胞儀方法檢測BMMSCS的細胞凋亡情況7磁珠分選臍血來源的CD34細胞，在兩種培養(yǎng)體系（LTCASSAY和MKASSAY）中共培養(yǎng)BMMSCS與CD34細胞，比較研究ET患者和正常BMMSCS擴增CD34細胞能力和促進造血克?。–FUG、CFUM、CFUGM、CFUMIX、BFUE和CFUMK）形成的能力同時比較兩種BMMSCS表達造血生長因子（SCF、IL6和VEGF）的異同。8建立BMMSCS和正常來源的外周血單個核細胞PBMCS共培養(yǎng)體系，比較兩種BMMSCS對活化后的PBMCS增殖及促進PBMCS向TREG細胞分化能力的差異。9若與正常來源的BMMSCS相比，ET患者來源的BMMSCS在上述生物學和功能檢測中存在異常，則利用上述方法檢測IFNΑ2B對ET患者來源的異常BMMSCS的生物學特性及功能的影響。結(jié)果1成功培養(yǎng)并獲取高純度的ET患者和正常人來源的BMMSCS2在倒置顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，ET患者BMMSCS與正常BMMSCS形態(tài)無明顯差異，二者BMMSCS細胞均纖細、呈長梭形，規(guī)則排列生長。3二者BMMSCS均高表達CD90、CD73、CD105，且表達情況無顯著差別。二者均不表達造血細胞標志CD11A、CD14、CD19、CD34、CD45及MHCⅡ類分子HLADR。4在誘導培養(yǎng)體系下，二者BMMSCS均有向成骨細胞、脂肪細胞分化的能力。與正常BMMSCS相比，ET患者BMMSCS分化為脂肪細胞的能力無明顯變化，但分化為成骨細胞的能力減弱。5ET患者BMMSCS增殖能力明顯強于正常BMMSCS。6ET患者BMMSCS較正常人BMMSCS的細胞凋亡明顯減少。7與臍血來源的CD34細胞共培養(yǎng)后，ET患者BMMSCS擴增CD34細胞能力和促進造血克隆形成能力（尤其是支持長期造血能力和巨核細胞系造血能力）較正常BMMSCS顯著減弱。兩種BMMSCS均表達SCF、IL6和VEGF，但ET患者來源的BMMSCS上述細胞因子表達水平低于正常來源的BMMSCS。8與正常來源的PBMCS共培養(yǎng)結(jié)果顯示，ET患者BMMSCS抑制PBMCS增殖能力減弱但促進PBMCS向調(diào)節(jié)性T細胞分化的能力有增強趨勢，但尚無統(tǒng)計學差異。9ET患者來源的BMMSCS形態(tài)和表面標志不受IFNΑ2B的影響，但IFNΑ2B可使ET患者的BMMSCS向成骨細胞、脂肪細胞定向誘導時鈣鹽沉積和脂滴形成明顯減少，抑制其成骨、成脂分化潛能。IFNΑ2B可抑制ET患者來源的BMMSCS的增殖，增加其凋亡和增強其支持造血的能力。IFNΑ2B可促進ET患者的BMMSCS表達SCF、IL6和VEGF。另外，IFNΑ2B還可增強ET患者的BMMSCS對PBMCS的抑制作用及促進PBMCS向調(diào)節(jié)性T細胞分化的能力。結(jié)論1原發(fā)性血小板增多癥患者骨髓間充質(zhì)干細胞存在多方面、多層次的缺陷。2原發(fā)性血小板增多癥患者BMMSCS存在多種生物學特性異常，包括增殖能力增強、多向分化能力異常（不易向成骨細胞方向分化）、細胞凋亡減少。3原發(fā)性血小板增多癥患者BMMSCS支持造血能力（尤其支持長期造血能力和巨核細胞系造血能力）減弱。4原發(fā)性血小板增多癥患者BMMSCS抑制正常來源的外周血單個核細胞增殖能力減弱，但可促進外周血單個核細胞向調(diào)節(jié)性T細胞分化。5IFNΑ2B可影響原發(fā)性血小板增多癥患者BMMSCS多種生物學特性及功能，包括增殖、凋亡、分化、支持造血及免疫調(diào)節(jié)等多個方面。

簡介：點擊查看更多胰島素樣生長因子-I、堿性成纖維細胞生長因子和透明質(zhì)酸鈉對藻酸鈣載體-關(guān)節(jié)軟骨細胞復合物的生物學效應(yīng).pdf精彩內(nèi)容。

簡介：【研究背景】近年來，鑒于脂肪干細胞ADIPOSEDIREVEDSTEMCELLSADSCS在獲取、應(yīng)用方面的諸多優(yōu)點，如何有效運用其修復損傷組織已成為外科學領(lǐng)域，特別是燒傷、整形外學的研究熱點。然而迄今為止，ADSCS參與組織修復的確切機制并不清楚。目前絕大部分研究主要集中在ADSCS細胞分化方面，近來越來越多的實驗表明尚具有一個重要的功能，即旁分泌功能。有關(guān)ADSCS旁分泌功能參與組織修復的生物學效應(yīng)尚不清楚。此外，胰島素作為人體重要的促合成代謝激素，除能調(diào)節(jié)糖、脂肪、蛋白質(zhì)三大營養(yǎng)代謝外，是否具有調(diào)節(jié)ADSCS旁分泌功能，進而更有效促進ADSCS的組織創(chuàng)面修復功能，目前尚未見報道?！狙芯磕康摹?研究ADSCS旁分泌因子對修復細胞HACAT細胞生物學作用，初步探討ADSCS促創(chuàng)面愈合的旁分泌機制。2研究胰島素對ADSCS旁分泌功能的影響，以期尋求一種促ADSCS旁分泌的有效增敏劑。3研究胰島素干預前后ADSCS旁分泌對HACAT細胞的生物學作用，進一步探討利用胰島素調(diào)節(jié)ADSCS旁分泌作用，以促進組織創(chuàng)面修復的有效性及相關(guān)機制?！狙芯績?nèi)容】1ADSCS旁分泌功能對HACAT細胞的生物學作用。2胰島素對ADSCS旁分泌功能的生物學影響。3胰島素干預ADSCS后其分泌因子對HACAT細胞的生物學作用?！狙芯拷Y(jié)果】1ADSCS旁分泌因子能明顯促進HACAT細胞增殖、遷移和抑制凋亡。2108～107MOLL濃度的胰島素具有顯著促進ADSCS分泌生長因子的功能。3胰島素干預前后ADSCS旁分泌功能均能顯著促進HACAT細胞增殖、遷移和抑制凋亡，且胰島素干預后作用更顯著。【研究結(jié)論】1ADSCS旁分泌功能參與組織損傷修復。2胰島素可有效促進ADSCS的旁分泌功能。3胰島素可通過干預ADSCS分泌功能來促進皮膚創(chuàng)面修復細胞增殖、遷移和抑制凋亡，進而促進創(chuàng)面愈合。4通過旁分泌功能促進創(chuàng)面愈合，可能是ADSCS參與創(chuàng)面愈合的又一重要潛在機制。5合理、有效地運用ADSCS的旁分泌功能，為創(chuàng)面愈合的研究與治療開辟了新思路。

簡介：分類號密級UDC學號104110110011南昌大學博士研究生學位論文SPOP通過調(diào)控通過調(diào)控HHGLI信號通路影響胃癌細胞信號通路影響胃癌細胞生物學行為的研究生物學行為的研究SPOPAFFECTSTHEBIOLOGICALBEHAVIOFGASTRICCANCERCELLSBYREGULATINGHHGLISIGNALINGPATHWAY曾春艷培養(yǎng)單位（院、系）南昌大學第一附屬醫(yī)院指導教師姓名、職稱羅時文教授申請學位的學科門類醫(yī)學學科專業(yè)名稱內(nèi)科學（消化系?。┱撐拇疝q日期2014年6月答辯委員會主席評閱人2014年6月摘要II摘要第一部分第一部分SPOP在人胃癌組織中的表達及其與臨床在人胃癌組織中的表達及其與臨床病理特征的關(guān)系病理特征的關(guān)系目的目的探討SPOP在人胃癌細胞系、人胃癌組織中的表達及臨床意義。方法方法免疫組織化學方法檢測101例胃癌組織及相應(yīng)癌旁組織的SPOP的表達，統(tǒng)計分析其與臨床病理特征的關(guān)系；WESTERNBLOT方法檢測4例胃癌組織及癌旁組織的SPOP的表達；WESTERNBLOT方法檢測4株胃癌及1株永生化正常胃黏膜上皮細胞株細胞中的SPOP的表達。結(jié)果結(jié)果1、101例胃癌組織中，88例癌組織中的SPOP的表達低于相應(yīng)的癌旁組織，兩者差異具有統(tǒng)計學意義（P005）。SPOP在癌組織中的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移成正相關(guān)（R0225，P005），與腫瘤分化程度（R－0232，P005）及TNM分期（R－0375，P001）成負相關(guān)，但與患者的年齡、性別均不相關(guān)；2、WESTERNBLOT檢測4例癌組織中SPOP表達均低于相應(yīng)的癌旁組織；3、在人永生化胃粘膜上皮細胞系GES1及四株胃癌細胞株AGS，SGC7901，MKN28，MKN45中均有表達。結(jié)論結(jié)論1、SPOP在胃癌組織中表達下調(diào)，與癌旁組織中的表達比較存在統(tǒng)計學差異（P005）；2、SPOP表達與患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度及TNM分期相關(guān)，但與患者性別、年齡均不相關(guān)。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞胃癌；免疫組化；SPOP；臨床病理特征。第二部分第二部分SPOP基因表達質(zhì)粒和基因表達質(zhì)粒和SPOPSHRNA質(zhì)粒質(zhì)粒構(gòu)建及胃癌細胞模型的篩選與鑒定構(gòu)建及胃癌細胞模型的篩選與鑒定目的目的為了進一步研究SPOP在胃癌中的作用機制，我們構(gòu)建SPOP基因表達質(zhì)粒SPOPV5HIS和干擾質(zhì)粒SPOPSHRNA質(zhì)粒，并構(gòu)建SPOP高低表達胃癌細胞模型。

簡介：CD133膽囊癌膽囊癌GBCSD細胞細胞的分離的分離及其生物學特性的研究及其生物學特性的研究STUDYONBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFCD133CELLSSEPARATEDFROMAGALLBLADDERCANCERCELLLINEGBCSD論文類別學術(shù)研究型論文類別學術(shù)研究型作者姓名俞遠林指導教師姓名指導教師姓名俞繼衛(wèi)申請學位級申請學位級別碩士學位授予單位學位授予單位蚌埠醫(yī)學院蚌埠醫(yī)學院學科專業(yè)外科學研究方向腹部腹部腫瘤腫瘤論文答辯時間論文答辯時間2012014年5月學位授予日期學位授予日期2012014年6月答辯委員會主席答辯委員會主席論文評閱人人2012014年4月分類號密級學校代碼10367UDC編號學號20117031133學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明本人所呈交的學位論文是本人在導師指導下獨立進行實驗研究工作所取得的成果，本論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或已經(jīng)獲取得的研究成果。在本論文撰寫中所引用其他研究者的研究內(nèi)容和成果時已在論文中給予特別標注和明確說明。對本論文的實驗研究以及論文撰寫過程中給予幫助和建議等貢獻的其他人士，也已作了致謝說明。本人完全理解本聲明的法律責任，以及所涉及的結(jié)果將由本人承擔。學位論文作者簽名日期年月日關(guān)于學位論文著作權(quán)的共享聲明根據(jù)中華人民共和國著作權(quán)法和高等院校知識產(chǎn)權(quán)管理條例，本學位論文，題目CD133膽囊癌GBCSD細胞的分離及其生物學特性的研究，是研究生在導師指導下完成的職務(wù)作品，得到蚌埠醫(yī)學院相關(guān)部門科室的物質(zhì)技術(shù)和經(jīng)費支持，因此，本學位論文的著作權(quán)由研究生，導師和蚌埠醫(yī)學院三方共同享有，均享有署名權(quán)和使用權(quán)等權(quán)益；本學位論文成果歸屬蚌埠醫(yī)學院。根據(jù)國家學位授予條例，學校對本學位論文有使用權(quán)，包括保存本學位論文；因教學和科研的目的，保留在圖書館被查閱或借閱；學?？筛鶕?jù)國家規(guī)定將本學位論文送交國家有部門保留和使用。學校在公布本學位論文的全部或部分內(nèi)容時，應(yīng)保障研究生和導師的署名權(quán)等權(quán)益。研究生和導師在公開發(fā)表本學位論文的全部或部分內(nèi)容時必須保障學校的署名權(quán)等權(quán)益，即在發(fā)表論文時蚌埠醫(yī)學院及相關(guān)部門科室應(yīng)署名為作者單位。聲明人完全理解本聲明的法律責任。研究生簽名導師簽名日期年月日

簡介：福建醫(yī)科大學碩士學位論文1分類號分類號參照中國圖書館分類法參照中國圖書館分類法學校代碼學校代碼1039210392學科專業(yè)代碼學科專業(yè)代碼100210100210學號212100342121003457密級級（注明密級與保密期限）（注明密級與保密期限）碩士學位學位論文論文CDH17調(diào)控肝細胞癌的生物學機制的研究調(diào)控肝細胞癌的生物學機制的研究THEBIOLOGICALMECHANISMRESEARCHOFCDH17REGULATIONHEPATOMACARCINOMACELL學位類型型科研碩士科研碩士所在學院院省立省立臨床臨床醫(yī)學院學院申請人姓名申請人姓名王飛王飛學科學科、專業(yè)專業(yè)外科學普外科外科學普外科導師師李建國李建國教授教授研究起止日期研究起止日期20132013年6月至月至20142014年6月答辯委員會主席答辯委員會主席尹震宇教授教授答辯日期期20152015年0606月0303日福建醫(yī)科大學碩士學位論文3目錄目錄附錄附錄1中文摘要中文摘要2英文摘要英文摘要3前言前言5材料和方法材料和方法81實驗使用儀器、耗材、試劑82常用試劑與配方113細胞處理124實驗方法135統(tǒng)計學方法24結(jié)果結(jié)果241篩選高表達CDH17基因的肝癌細胞株242DNA測序鑒定質(zhì)粒構(gòu)建成功263沉默CDH17基因高表達的MHCC97H細胞株274沉默MHCC97H細胞CDH17的細胞功能實驗29討論討論32結(jié)論36參考文獻參考文獻37綜述綜述38致謝致謝45

簡介：華中科技大學碩士學位論文RNAI沉默ADAMS家族基因?qū)δ[瘤細胞生物學活性的影響姓名豐菁申請學位級別碩士專業(yè)醫(yī)學遺傳學指導教師唐艷平20090501華中科技大學碩士學位論文5SHRNA）對N2A細胞中目的基因的沉默效應(yīng)，即是否能抑制靶基因在哺乳動物腫瘤細胞中目的基因的表達，為進一步利用RNA干擾技術(shù)對抗腫瘤的基因治療提供新的依據(jù)和手段。方法方法利用DNA重組技術(shù)針對ADAM10和PC7基因的SHRNA序列克隆到PGENSIL1中，構(gòu)建SHRNA真核表達載體，通過酶切和測序等方法進行鑒定。用脂質(zhì)體介導法將已構(gòu)建好的重組干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入小鼠神經(jīng)母細胞瘤N2A細胞株，免疫熒光檢測轉(zhuǎn)染效率，采用半定量RTPCR和WESTERN免疫印跡法分別從MRNA和蛋白質(zhì)水平檢測轉(zhuǎn)染前后目的基因的表達，以及小鼠腦內(nèi)注射重組干擾質(zhì)粒PGENSIL1PC7后，在體觀察局部轉(zhuǎn)染后綠色熒光的表達，以了解RNA干擾效果。結(jié)果結(jié)果成功構(gòu)建了真核干擾載體PGENSIL1ADAM10，PGENSIL1PC7；免疫熒光結(jié)果顯示外源性干擾質(zhì)粒在神經(jīng)母細胞瘤N2A細胞中獲得瞬時表達，基因轉(zhuǎn)染和表達率可達90；兩目的基因MRNA相對水平（與內(nèi)參的灰度比值）空白對照組分別為135009、139005，陰性對照轉(zhuǎn)染組分別為125007、127008，SHRNA重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組分別為035003、062005，可見SHRNA重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組較其他兩組明顯降低（P001）。細胞中目的基因的蛋白水平變化趨勢與MRNA表達相似。灰度掃描曝光檢測顯示實驗組重組干擾質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)染入小鼠體內(nèi)有較強綠色熒光的表達，與對照組具有顯著差異性。結(jié)論結(jié)論我們構(gòu)建的SHRNA干擾載體能有效沉默小鼠N2A細胞中靶基因的轉(zhuǎn)錄和表達，從而可能抑制腫瘤細胞的增殖促其凋亡，為下一步在動物體內(nèi)利用重組干擾質(zhì)粒沉默目的基因的表達提供實驗基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞短發(fā)夾狀RNA；ADAM10；N2A細胞株；基因干擾綜上所述，研究證實應(yīng)用短發(fā)夾狀RNA介導的干擾技術(shù)對腫瘤細胞可以取得明顯干涉效果，進一步完善RNA干擾實驗來抑制腫瘤細胞生長是存在可能的。由于ADAM家族基因（ADAM17，ADAM10，PC7）在腫瘤細胞中可能均具有顯著的抑制效應(yīng)，但作用機制尚不明確。因此將有可能成為腫瘤治療潛在的分子靶點，為進一步進行相關(guān)的實驗研究打下基礎(chǔ)。

簡介：中山大學碩士學位論文干擾EIF4E基因?qū)θ幦橄侔┘毎飳W行為與化療敏感性的影響姓名周菲菲申請學位級別碩士專業(yè)腫瘤學指導教師夏良平20100515C扣山人學碩J二論文干擾ELF4E基岡對三陰乳腺癌細胞生物學行為與化療敏感性的影響結(jié)果成功構(gòu)建并篩選了穩(wěn)定表達SHRNAELF4E的三陰乳腺癌MDAOMB23L細胞，瞬時轉(zhuǎn)染SIRNA_EIF4E三陰乳腺癌MDAMB23I和MDAMB435細胞，兩種方法均可明顯抑制上述細胞中ELF4E蛋白的表達；克隆形成實驗及流式細胞術(shù)表明干擾ELF4E表達使MDAMB一23L細胞阻滯在G1期，細胞處于增生不活躍狀態(tài)，明顯抑制細胞增殖；TRANSWELL實驗顯示干擾ELF4E表達可能導致三陰乳腺癌MDAMB23L細胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力下降；MTT法表明降低ELF4E表達可增強包括順鉑、紫杉醇、阿霉素、多西他賽等化療藥物對三陰乳腺癌MDAMB23L細胞的敏感性WESTERNBLOTTING法顯示干擾MDAMB23L細胞中ELF4E表達誘導P53和P21的表達上調(diào)，同時明顯增加促凋亡蛋白BAX蛋白表達，而顯著減少抗凋亡蛋白BCL一2蛋白表達，即凋亡相關(guān)蛋白BAX／BCL2比例明顯升高。結(jié)論L、成功構(gòu)建ELF4E靶向SHRNA表達質(zhì)粒，應(yīng)用此質(zhì)粒轉(zhuǎn)染三陰乳腺癌MDAMB23L細胞；瞬時ELF4ERNAI轉(zhuǎn)染三陰乳腺癌MDAMB23L及MDAMB435細胞；兩種方法均有效抑制ELF4E基因蛋自水平表達，為后續(xù)的研究提供了有力的工具。2、干擾ELF4E基因表達使三陰乳腺癌細胞阻滯在GL期，細胞處于增生不活躍狀態(tài)，可顯著地抑制細胞增殖和細胞侵襲轉(zhuǎn)移能力。3、干擾ELF4E基因表達可增強包括順鉑、紫杉醇、阿霉素、多西他賽等化療藥物對三陰乳腺癌細胞的敏感性，其機制可能是誘導P53和P21的表達、調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)蛋白BAX／BCL一2而實現(xiàn)的。關(guān)鍵詞三陰乳腺癌；ELF4E；MDAMB23L細胞株；化療敏感性H

簡介：重慶醫(yī)科大學碩士學位論文超聲聯(lián)合微泡造影劑對人肝癌細胞株HEPG2生物學效應(yīng)實驗研究姓名聶剛申請學位級別碩士專業(yè)內(nèi)科學（消化系?。┲笇Ы處熋氛愦?0060501重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文英文縮寫A0CASPDNADABDMSOEDL’AEBHKHZRPMPBSPCNAVEGFSCGELMANMAODMTTS英漢縮略語名詞對照英文全稱ACRIDINEORANGE中文全稱吖啶橙COMETASSAYSOFTWAREPROJECT慧星分析軟件DEOXYRIBONUCLEICACID脫氧核糖核酸DIAMINOBENZIDINEDIETHYLSULFOXIDE二氨基聯(lián)苯胺二甲基亞砜ETHYLENEDIAMINETETRAACETICACID乙二胺四乙酸ETHIDIUMBROMIDE溴化乙啶HOURKILOHERTZROLLSPERMINUTE小時千赫茲每分鐘轉(zhuǎn)數(shù)PHOSPHATEBUFFERSOLUTION磷酸鹽緩沖液PROLIFERATINGCELLNUCLEARANTIGEN增殖細胞核抗原VASCULARENDOTHELIALGROWTHFACTOR血管內(nèi)皮生長因子SINGLECELLGELELECTROPHORESIS單細胞凝膠電泳LOWMELTINGPOINTAGAR低熔點瓊脂糖NORMALMELTINGPOINTAGAR正常熔點瓊脂糖OPTICALDENSITY3一4，5一DIMETHYTHIAZOL一2一Y1一2，5DIPHENYLTETRAZOLIUMBROMIDESECONDL光密度四甲基偶氮唑鹽秒

簡介：背景骨髓間充質(zhì)干細胞HUMANBONEMESENCHYMALSTEMCELLSHMSC是一類具有自我更新能力和多向分化潛能的成體干細胞目前已有越來越多的國內(nèi)外研究證明從骨髓組織中提取的間充質(zhì)干細胞在不同體外環(huán)境誘導下可以向其他多種組織細胞分化可以分化為具有中胚層12、外胚層34和內(nèi)胚層5特點的細胞包括成骨細胞6、軟骨細胞7、心肌細胞8、以及神經(jīng)細胞910等。盡管目前對HMSC的分化機制的研究尚未有定論但是已有足夠相關(guān)研究證明HMSC還能跨胚層向表皮細胞11和內(nèi)皮細胞12等來源于其它胚層的細胞分化。這也擴展了HMSC在醫(yī)學和研究領(lǐng)域的應(yīng)用前景。除此以外HMSC還具有多方面的效能包括調(diào)節(jié)造血功能在創(chuàng)面愈合過程中分泌因子抑制細胞凋亡并激活內(nèi)源性細胞的修復作用以及控制炎癥和免疫反應(yīng)等13。因此HMSC的研究是近年來基礎(chǔ)醫(yī)學和臨床醫(yī)學研究關(guān)注的熱點。然而目前在HMSC相關(guān)研究中仍存在許多重要的科學問題亟待解決。特別是HMSC在體外的生物學特性研究至關(guān)重要是其基礎(chǔ)和應(yīng)用研究的前提。蛻皮甾酮ECDYSTERONEBECDYSONEEDS亦稱Β蛻皮激素簡稱蛻皮素屬于昆蟲生長代謝調(diào)節(jié)激素最早為昆蟲學家所研究。昆蟲、甲殼動物及其它節(jié)肢動物具有韌硬的角質(zhì)層外殼定期分泌蛻皮激素將角質(zhì)層外殼淘汰并代之以新的一層這個過程就謂之蛻皮或蛻皮作用。但人們發(fā)現(xiàn)蛻皮激素在植物界的分布不僅較動物界廣而且含量較高資源豐富迄今還不斷地在植物界發(fā)現(xiàn)昆蟲蛻皮甾酮類物質(zhì)這類植物源蛻皮甾酮已近160個。目前蛻皮激素的應(yīng)用仍依賴于從植物中提取。蛻皮甾酮在脊椎動物中也是必需的物質(zhì)。其對機體以下功能影響較大目前所知其作用機理主要為1、促進蛋白質(zhì)合成；2、調(diào)節(jié)糖代謝；3、調(diào)節(jié)脂代謝；4、調(diào)節(jié)基因表達；5、改善免疫功能6、中樞神經(jīng)系統(tǒng)作用；7、作用于心血管系統(tǒng)；8、促進愈合作用等14。體外培養(yǎng)的研究表明EDS能促進人表皮細胞的分化15而其同為類固醇的地塞米松已被證實可促進MSC分化為骨組織。在本課題組的前期研究中發(fā)現(xiàn)蛻皮甾酮有刺激人奇靜脈內(nèi)皮細胞的增殖和分裂16降低肺血管通透性17和有效促進兔皮膚缺損創(chuàng)傷愈合過程18促進表皮干細胞19的增殖等作用。同時其有刺激細胞增殖對抗炎性反應(yīng)的作用。因其在自然界中的廣泛存在它是中藥牛膝等植物的重要組成易于分離提取。蛻皮甾酮的生物多效性提示其對促進細胞的增殖以及干細胞誘導分化等方面有一定的影響進行此項研究具有廣泛的應(yīng)用前景。第一部分人骨髓間充質(zhì)干細胞的體外分離培養(yǎng)和鑒定目的分離培養(yǎng)并鑒定人骨髓間充質(zhì)干細胞。為實驗的后續(xù)步驟提供種子細胞。方法采用密度梯度離心法分離含有間充質(zhì)干細胞的人骨髓細胞懸液獲得人骨髓間充質(zhì)干細胞。免疫細胞化學法檢測第2代培養(yǎng)的細胞CD44、CD105、CD34及CD29的表達以鑒定其為HMSC。流式細胞儀檢測第3代HMSC細胞表面標記CD44、CD105和CD34。培養(yǎng)擴增。經(jīng)傳代、擴增、純化取第3、5、10、代HMSC細胞觀察細胞生長特性并記錄HMSCS生長曲線。結(jié)果1骨髓間充質(zhì)干細胞的形態(tài)學觀察倒置顯微鏡下骨髓間充質(zhì)干細胞接種12H即貼壁原代和傳代細胞呈梭形外觀去除懸浮細胞后繼續(xù)培養(yǎng)3D貼壁細胞開始增殖伸展為短梭型、多角型及不規(guī)則型等。培養(yǎng)78D形成集落的數(shù)目、大小明顯增加細胞排列有一定的方向性至14D細胞密集在集落中心基本鋪滿瓶底。2免疫組化細胞表面標記物CD44、CD29CD105陽性CD34陰性。3流式細胞儀檢測CD34陽性率為164％、CD44陽性率為9261％；CD105陽性率為9177％。4骨髓間充質(zhì)干細胞的生長曲線細胞傳代后3D內(nèi)處于潛伏期3D后進入生長期7D后進入平臺期。結(jié)論1、人骨髓間充質(zhì)干細胞可在體外分離、純化培養(yǎng)生長穩(wěn)定、可連續(xù)傳代。2、經(jīng)細胞免疫組化和流式細胞儀鑒定培養(yǎng)的細胞不是骨髓中的造血干細胞或骨髓基質(zhì)中的成纖維細胞是處于未分化階段的骨髓間充質(zhì)干細胞。3、人間充質(zhì)干細胞隨著傳代次數(shù)的增加增殖能力有逐漸降低的趨勢。第二部分不同濃度蛻皮甾酮對人骨髓間充質(zhì)干細胞增殖的影響目的觀察蛻皮甾酮ECDYSTERONEEDS對人骨髓間充質(zhì)干細胞HUMANMARROWMESENCHYMALSTEMCELLSHMSC增殖的影響。并明確蛻皮甾酮促HMSC增殖的最佳有效濃度。方法設(shè)定不同終濃度EDS的細胞培養(yǎng)體系10ΜGML、25ΜGML、50ΜGML、100ΜGML與對照組單純HMSC培養(yǎng)基EDS濃度0ΜGML作對比在不同的時間點用MTT比色法測定HMSC細胞的增殖活力檢測不同濃度EDS的細胞培養(yǎng)體系中HMSC的生長曲線并行流式細胞周期觀察增殖期細胞所占比例。對結(jié)果進行統(tǒng)計學分析。結(jié)果1在培養(yǎng)體系中EDS各濃度組HMSC的M1YR吸光度值與對照組均有顯著差異采用重復測量資料的方差分析P005三組相應(yīng)吸光度值較25ΜGML組稍減低但吸光度值顯著高于對照組P2HMSC生長曲線提示EDS濃度為251ΜGML時細胞的增殖能力較其他各組細胞有顯著提高而不同EDS濃度培養(yǎng)組HMSC增殖能力高于空白對照組。3流式細胞周期顯示EDS濃度為25ΜGML時HMSC培養(yǎng)體細胞S期細胞所占比例同時EDS濃度為25ΜGML時HMSC培養(yǎng)體細胞的增殖指數(shù)也顯著高于對照組。結(jié)論EDS在一定濃度范圍內(nèi)對體外培養(yǎng)條件下的HMSC具有生長促進作用該作用在EDS濃度為25GΜGML時最為顯著。但是EDS促進HMSC增殖的作用不隨劑量的增加而增加。目的觀察蛻皮甾酮ECDYSTERONEEDS對人骨髓間充質(zhì)干細胞HUMANMARROWMESENCHYMALSTEMCELLSHMSC分化的影響。方法25ΜGML濃度EDS的細胞培養(yǎng)體系HMSC培養(yǎng)基25ΜGMLEDS作為實驗組與空對照組單純HMSC培養(yǎng)基EDS濃度0UGML作對比。在培養(yǎng)20D時運用免疫組織化學方法檢測CKL9CK10。并運用流式細胞儀檢測CK19的陽性率觀察EDS對于MSC分化為表皮細胞的影響。同時在培養(yǎng)20D通過茜素紅染色觀察鈣化結(jié)節(jié)形成能力。觀察EDS對于MSC分化為成骨細胞的影響。結(jié)果1免疫組化顯示實驗組和對照組細胞表面標記物CK19CK10陰性。2流式細胞儀檢測實驗組陽性率CK19為164％、對照組CK19陽性率為9261％；3鈣化結(jié)節(jié)茜素紅染色顯示EDS實驗組骨髓間充質(zhì)干細胞形成鈣化結(jié)節(jié)而對照組并未未形成。結(jié)論125ΜGML濃度的EDS不具有使人骨髓干細胞向表皮樣細胞分化的能力。2EDS對骨髓間充質(zhì)干細胞的成骨分化具有促進作用。

簡介：點擊查看更多罕見的急性粒細胞巨核細胞白血病的生物學、臨床和血液特征.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：浙江大學博士學位論文IGFBP7在結(jié)直腸癌細胞的生物學效應(yīng)研究姓名阮文靜申請學位級別博士專業(yè)病理學與病理生理學指導教師來茂德20070401浙江大學博士學位論文LOHMAC25MAPKM一～兒VMMRMSPAGEPBSPCRPIPSFRTPCRSA陽ALSDSSLRSSHWTBETBS仃ATGF書XGALLOSSOFHETEROZYGOSITYMENINGIOMAASSOCIATEDCDNA25MITOGENACTIVATEDPROTEINKINASEMOLONEYMURINELEUKEMLIAVIRUSMISMATCH旭PAIRMASSSPECTROMETERPOLYACRYLAMIDEGELELECTROPHORESISPHOSPHATEBUFFEREDSALINEPC岫I眥糟辯CHAINREACTIONPROPIDIUMIODIDEPROSTACYCLINSTIMULAFIONFACTORREV盯辯WANSCRIPFIONPOL郴CI值ML刪ONSSENESCENCEASSOCIALECLP唱AIM懈IDA辯SODIUMDODECYLSULFATESIGNALLOGRATIOAASUPPRESSIVESUBNACTIONHYBRIDIZATIONTUMORDERIVEDADHESIONFACTORTRISBORATEEDTAELECTROPHORESISBUFFERTRISBUFIEFSALINE“FLUOROACETICACIDTRANSFORMINGGROWMFACTORII5BROMO4CHLORO3INDOLYLBDGALACTOSIDE4

簡介：復旦大學博士學位論文前列腺癌DU145細胞系腫瘤干細胞的分離、鑒定及其生物學特性和相關(guān)機制研究姓名陳偉申請學位級別博士專業(yè)泌尿外科指導教師王國民20070412復旦大學博士論文中文摘要人雄激素非依賴性前列腺癌DUL45細胞系腫瘤干細胞的分離、鑒定及其生物學特性和相關(guān)機制研究摘要第一部分人激素非依賴性前列腺癌DUL45細胞系腫瘤干細胞的分離與鑒定【目的L于DUL45細胞內(nèi)分選表達不同表面分子的細胞群，篩選出優(yōu)勢細胞，確定具有干細胞特性的細胞群，完成腫瘤干細胞的鑒定和腫瘤干細胞表面標記的確定?！痉椒↙應(yīng)用人雄激素非依賴性前列腺癌細胞系DUL45體外培養(yǎng)，免疫細胞化學、流式細胞術(shù)檢測DUL45細胞表面分子和分化標志的表達譜；免疫磁珠分選法結(jié)合I型膠原黏附法分選CDLL7細胞、CD34細胞和CD44整合素21CDL33細胞；應(yīng)用克隆形成實驗、免疫細胞化學、流式細胞術(shù)、CELLTITERBLUE細胞增殖活性檢測法對上述的各群細胞進行鑒定，篩選出具有自我更新、多向分化和增殖能力的細胞群。I結(jié)果】DUL45細胞表面表達CD24、CD34、CD44、CD59、CDLL7、CDL33、CKL4、CKL8；免疫磁珠MACS分選法可獲得高純度CDLL7細胞、CD34細胞、CD44整合素21CDL33細胞；DUL45細胞中CD44整合素21CDL33細胞克隆形成率CFE顯著高于其它類型細胞P005，傳代后，克隆形成率無顯著變化。CDLL7細胞、CD34細胞克隆形成能力較弱，傳代后CFE明顯下降。CD44整合素21CDL33細胞形成的克隆與其它類型細胞形成的克隆存在明顯的形態(tài)學差異。CD44整合索21CDL33細胞具有自我更新能力和多向分化潛能，CDLL7細胞、CD34細胞未表現(xiàn)這種潛能；與整合素2TCDL33。和未分選的DUL45細胞相比較，CD44整合素21CDL33細胞增殖能力更強P005【結(jié)論LCD44“整合素21CDL33細胞具有克隆形成、自我更新、多向分化和強增殖潛能，即千細胞特性。CD44、整合素21、CD133可作為DUL45細胞的腫瘤干細胞標志；CDLL7、CD34細胞在本研究中未表現(xiàn)出千細胞特性

簡介：中山大學博士學位論文中國非小細胞肺癌患者EGFR雙突變的分子流行病學及生物學特性研究姓名張國淳申請學位級別博士專業(yè)腫瘤學指導教師吳一龍20070430LL_L冉I寧竹論上。IⅢ扯小細胞種艋吉占EGFR“突變的舒F贏J抽卞，乏’L物卞持性研宄I正捕霍突變的分了流IJ病學研究，了解EGFR雙突變的分布規(guī)律并進步通過仆外實驗明確其生物學釣性以指導臨床個體化TKI治療的用藥選擇。方法1非選擇性中國人NSCLC患者肺癌組織標本的EGFR測序2004年1月至2005年7月期間，“東省人民醫(yī)院腫瘤巾心收治的非小細H色I肺癌患者，采用TRIZOL法及石蠟包埋組織DNA提取法獲得所有標本的皋岡DNA進行PCR測序。除對EGFR的18，19，21外顯F測序外，接受過GEFITMIB治療的病例還進行KRAS第2顯子及EGFR笫20外顯子的耐藥性突變榆測。2EGFR雙突變的等位基因定位實驗提取攜帶EGFR雙突變的肺癌組織的總RNA進行EGFRL821外顯F全K的RTPCR，并使用PMDL8T載體進行TA克隆測序，分析EGFR雙突變的等位毖因分卻情況。3EGFR雙突變表達載體的構(gòu)建利用STRATAGENE公司開發(fā)的QUICKCHANGEXL定點突變試劑盒將L858R定點突變劍己插入了EGFRDELE746一A750的PEDNA31一表達載體上，從而構(gòu)建EGFRDELE746A750／L858R雙突變表達載體。通過雙酶切及EGFR開放讀碼柜全長測序進行鑒定。4TKIS藥敏實驗將構(gòu)建成功的EGFR雙突變以及DELE746A750，L858R兩種單突變載體與野生型載體通過脂質(zhì)轉(zhuǎn)染的方法分別瞬時轉(zhuǎn)染至293T細胞中。轉(zhuǎn)染40小時后以分別以GEFITINIB與ERLOTINIB濃度梯度處理3小時。處理完成后以EGF刺激誘導EGFR磷酸化。收集細胞提取總蛋白進行EGFRTYRL068位點磷酸化的WESTERNBLOTTING檢測。使用QUANTITYONE光密度分析軟件對WESTERNBLOTTING的結(jié)果進行分析，獲得EGFR磷酸化被TKIS抑制程度的比值，并作圖比較。5EGFR雙突變體對P13K／AKT信號傳導通路效應(yīng)的初步研究將上述4種EGFR表達載體瞬時轉(zhuǎn)染至293T細胞中。轉(zhuǎn)染48小時后收集細胞提取總RNA行P13K及AKT兩種基因的災時熒光定量PCR，并比較4種轉(zhuǎn)染后細胞中以EGFR轉(zhuǎn)錄水平校正后的這柏種基因轉(zhuǎn)錄水平，初步了解EGFRⅡ

簡介：點擊查看更多大鼠腎移植后肝組織中凋亡相關(guān)細胞因子的分子生物學研究.pdf精彩內(nèi)容。