CD133+膽囊癌GBC-SD細(xì)胞的分離及其生物學(xué)特性的研究.pdf

1、目的：建立膽囊癌CD133+細(xì)胞亞群的分離純化方法，研究膽囊癌CD133+細(xì)胞亞群與CD133-細(xì)胞亞群的生物學(xué)特性。
　　方法：利用免疫磁珠法分選出CD133+細(xì)胞亞群，流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD133+細(xì)胞亞群所占百分比，免疫熒光法定位檢測(cè) CD133蛋白表達(dá)，RT-PCR檢測(cè) CD133 mRNA表達(dá)，Western Blot檢測(cè)CD133蛋白表達(dá)，單克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察單個(gè)CD133+細(xì)胞生長(zhǎng)特性，裸鼠皮下移植瘤實(shí)驗(yàn)檢測(cè)成瘤能力。CC

2、K8法檢測(cè)增殖能力及耐藥特性，Transwell法檢測(cè)侵襲能力，RT-PCR檢測(cè)相關(guān)干細(xì)胞基因的表達(dá)。
　　結(jié)果：膽囊癌 GBC-SD、SGC996細(xì)胞中 CD133+亞群所占相對(duì)百分比為(68.5±2.9)％、(0.3±0.2)%。GBC-SD細(xì)胞CD133 mRNA相對(duì)灰度值(0.6466±0.0259)顯著高于SGC996細(xì)胞(0.2181±0.0108, P=0.002)。CD133蛋白定位于細(xì)胞膜表面。GBC-SD細(xì)胞經(jīng)

3、免疫磁珠分選后，CD133+組CD133+亞群所占比例高達(dá)[(90.2±2)%]。CD133+組 CD133 mRNA表達(dá)(0.7734±0.0217)顯著高于 CD133-組(0.2146±0.0174, P=0.001)。CD133+組 CD133蛋白表達(dá)(0.3689±0.0375)顯著高于 CD133-組(0.0345±0.0040, P=0.003)。單克隆形成實(shí)驗(yàn)示單個(gè)CD133+細(xì)胞可形成新的細(xì)胞克隆，且 CD133+組[

4、(36.25±2.99)%]細(xì)胞克隆球形成率高于 CD133-組[(4.5±1.29)%， P=0.006)]。裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)提示 CD133+組與未分選組移植成瘤率分別為100%和60%，而CD133-組不成瘤。CD133+組細(xì)胞增殖能力明顯強(qiáng)于CD133-組(P=0.005)。經(jīng)氟尿嘧啶(0.1μg/ml)和吉西他濱(1μg/ml)處理后，CD133+組抑制率均低于CD133-組(P=0.005, P<0.001)。Transwel

5、l法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，CD133+組穿膜細(xì)胞數(shù)(23.78±8.74)顯著高于CD133-組[(6.56±3.09), P=0.0007]。RT-PCR檢測(cè)示CD133+組ABCG2、CD44 mRNA相對(duì)灰度值[(0.8774±0.0191),(1.3681±0.0879)]顯著高于 CD133-組[(0.3276±0.0272), P=0.001],[(0.7891±0.0385), P=0.005]。
　　結(jié)論：免疫磁珠法可成功分離