二十二碳六烯酸對人膽囊癌GBC-SD細(xì)胞增殖凋亡的影響.pdf

1、目的: 探討二十二碳六烯酸（DHA）對體外培養(yǎng)的人膽囊癌GBC-SD細(xì)胞增殖凋亡及Bcl-2表達(dá)、Caspase9活性的影響。
　　 方法: 采用體外細(xì)胞培養(yǎng)的方法,在處于指數(shù)生長期的GBC-SD細(xì)胞培養(yǎng)劑RPMI1640中分別添加終濃度為12.5ug/ml、25ug/ml、50ug/ml的DHA，培養(yǎng)24-72小時(shí)后，采用噻唑藍(lán)法（MTT法）檢測GBC-SD細(xì)胞的增殖情況，光鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化。在處于指數(shù)生長期的GBC-SD

2、細(xì)胞培養(yǎng)劑RPMI1640中分別添加終濃度為25ug/ml、50ug/ml的DHA，培養(yǎng)24小時(shí)后，采用DNA瓊脂糖凝膠電泳、Annexin V-FITC／PI雙標(biāo)流式細(xì)胞儀測定、熒光顯微鏡觀察細(xì)胞凋亡情況，免疫組化法檢測Bcl-2表達(dá)情況，酶標(biāo)儀法檢測Caspase9活性。
　　 結(jié)果: 經(jīng) 12.5ug/ml的DHA作用24-72小時(shí)后GBC-SD細(xì)胞的A值（0.598±0.044、0.784±0.052、0.833±0.0

3、73）與對照組（0.594±0.030、0.777±0.033、0.828±0.027）比較差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＞0.05），光鏡下細(xì)胞形態(tài)無明顯改變。經(jīng)25ug/ml的DHA作用24-72小時(shí)后GBC-SD細(xì)胞的A值(0.514±0.032、0.570±0.022、0.601±0.042)與對照組（0.594±0.030、0.777±0.033、0.828±0.027）比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05)，光鏡下見細(xì)胞皺縮、核染色質(zhì)凝

4、聚、邊集。經(jīng)50ug/ml的DHA作用24-72小時(shí)后GBC-SD細(xì)胞的A值(0.324±0.053、0.329±0.015、0.486±0.015)與對照組（0.594±0.030、0.777±0.033、0.828±0.027）比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05)，光鏡下見細(xì)胞皺縮、核染色質(zhì)凝聚、邊集。GBC-SD細(xì)胞經(jīng)25ug/ml、50 ug/ml的DHA作用24小時(shí)后，DNA瓊脂糖凝膠電泳顯示DNA裂解片段出現(xiàn)階梯狀條帶，經(jīng)A

5、nnexin V-FITC/PI雙標(biāo)流式細(xì)胞儀測定GBC-SD細(xì)胞的凋亡率（14.1±1.38 ％、25.5±8.6 ％）與對照組（4.90±0.89 ％）比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05)，熒光顯微鏡下觀察與對照組比較見較多綠色熒光，Bcl-2陽性細(xì)胞百分率（39.88±3.05％、27.48±4.64％）與對照組（55.94±3.21％）比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05)，Caspase9活性（1.695±0.154、2.126