二十二碳六烯酸對大鼠心房顫動模型心房電重構與心房纖維化的影響.pdf

1、目的：
　　探討二十二碳六烯酸（Docosahexaenoic acid，DHA）對 SD大鼠心房顫動（atrial fibrillation，AF）模型心房電重構與心房纖維化的影響及相關機制。
　　方法：
　　1.大鼠房顫模型的制備與分組 Sprague-Dawley（SD）大鼠（250~300g）適應性喂養(yǎng)一周后，篩選出對乙酰膽堿（66μg/mL）-氯化鈣（50mg/mL）混合液（0.1mL/100g）敏感的大鼠8

2、0只。將80只乙酰膽堿-氯化鈣混合液敏感的大鼠隨機分為對照組（CTL組）、對照DHA處理組（DHA組）、房顫組（AF組）和房顫DHA處理組（DHA+AF組），每組20只。CTL組和DHA組尾靜脈注射生理鹽水，AF組和DHA+AF組尾靜脈注射乙酰膽堿（66μg/mL）-氯化鈣（50mg/mL）混合液，給藥劑量均為0.1mL/100g，每天給藥1次，記錄心電圖，連續(xù)3天，建立大鼠房顫模型。從實驗第4天開始，CTL組給予生理鹽水，DHA組給予

3、DHA溶液（10mg/mL）和生理鹽水，AF組給予生理鹽水和乙酰膽堿（66μg/mL）-氯化鈣（50mg/mL）混合液，DHA+AF組給予DHA溶液（10mg/mL）和乙酰膽堿（66μg/mL）-氯化鈣（50mg/mL）混合液，給藥方式均為尾靜脈注射，給藥劑量均為0.1mL/100g，每天給藥1次，連續(xù)14天，實驗第4、10、17天記錄心電圖。
　　2.分析實驗第3、4、10、17天心電圖，觀察DHA對乙酰膽堿-氯化鈣混合液誘發(fā)的

4、房顫大鼠房顫持續(xù)時間的影響。
　　3.連續(xù)雙刺激法測定大鼠心房有效不應期（effective refractory period，ERP），全細胞膜片鉗技術記錄大鼠心房肌細胞動作電位時程（action potential duration， APD）和雙孔鉀通道TASK-1（TWIK-related acid-sensitive K+channels-1）電流，觀察DHA對房顫大鼠心房電重構的影響。
　　4.實時熒光定量PC

5、R法檢測大鼠心房組織TASK-1 mRNA的表達，Western blot法檢測大鼠心房組織TASK-1蛋白的表達，觀察DHA對TASK-1 mRNA和蛋白表達的影響。
　　5. Masson染色法觀察大鼠心房組織膠原纖維增生情況，觀察DHA對房顫大鼠心房纖維化的影響。
　　6. Western blot法檢測大鼠心房組織細胞外信號調節(jié)激酶1/2（extracellular signal-regulated kinase1/

6、2， ERK1/2）、磷酸化細胞外信號調節(jié)激酶1/2（phosphorylated extracellular signal-regulated kinase1/2，p-ERK1/2）和Ⅰ型膠原蛋白的表達，實時熒光定量PCR法檢測大鼠心房組織Ⅰ型膠原mRNA的表達，觀察DHA對ERK1/2、p-ERK1/2蛋白以及Ⅰ型膠原mRNA和蛋白表達的影響。
　　結果：
　　1. DHA對大鼠房顫持續(xù)時間的影響
　　分析實驗第3

7、、4、10、17天心電圖，結果顯示，大鼠尾靜脈注射乙酰膽堿-氯化鈣混合液后房顫持續(xù)時間隨實驗天數(shù)增加而逐漸延長，而DHA可以縮短房顫持續(xù)時間。
　　2. DHA對大鼠心房ERP和心房肌細胞APD的影響
　　與CTL組相比，AF組大鼠心房ERP明顯縮短（從79.5±5.8 ms到57.2±6.1 ms， P<0.05），DHA組和DHA+AF組明顯延長（前者從79.5±5.8 ms到99.5±8.6 ms， P<0.05；后者

8、從79.5±5.8 ms到90.2±7.4 ms，P<0.05）。與AF組相比，DHA+AF組大鼠心房ERP明顯延長（P<0.05）。
　　與CTL組相比，AF組大鼠心房肌細胞復極50％時的動作電位時程（action potential duration at50% repolarization，APD50）和復極90%時的動作電位時程（action potential duration at90%repolarization，A

9、PD90）明顯縮短（P<0.05）， DHA組和DHA+AF組明顯延長（P<0.05）。與AF組相比，DHA+AF組大鼠心房肌細胞APD50和APD90明顯延長（P<0.05）。
　　3. DHA對大鼠心房肌細胞TASK-1電流及mRNA和蛋白表達的影響
　　與CTL組相比，AF組和DHA+AF組大鼠心房肌細胞TASK-1電流密度明顯升高（+30 mV時，前者從1.65±0.14 pA/pF到2.36±0.17 pA/pF，

10、P<0.05；+30 mV時，后者從1.65±0.14 pA/pF到1.90±0.12 pA/pF，P<0.05），DHA組明顯降低（+30 mV時，從1.65±0.14 pA/pF到1.26±0.11 pA/pF，P<0.05）。與AF組相比，DHA+AF組大鼠心房肌細胞TASK-1電流密度明顯降低（P<0.05）。
　　與CTL組相比，AF組和DHA+AF組大鼠心房組織TASK-1 mRNA表達水平明顯升高（P<0.05），D

11、HA組明顯降低（P<0.05）。與AF組相比，DHA+AF組大鼠心房組織TASK-1 mRNA表達水平明顯降低（P<0.05）。
　　與CTL組相比，AF組和DHA+AF組大鼠心房組織TASK-1蛋白表達水平明顯升高（P<0.05），DHA組明顯降低（P<0.05）。與AF組相比，DHA+AF組大鼠心房組織TASK-1蛋白表達水平明顯降低（P<0.05）。
　　4. DHA對大鼠心房纖維化的影響
　　Masson染色結

12、果顯示，CTL組與 DHA組大鼠心房肌間質可見正常量的膠原纖維；AF組大鼠心房肌間質可見大量膠原纖維增生，心房纖維化程度高；DHA+AF組大鼠心房肌間質可見少量膠原纖維增生，心房纖維化程度較AF組降低。
　　5. DHA對大鼠心房組織ERK1/2和p-ERK1/2蛋白表達的影響
　　各組 ERK1/2蛋白表達無明顯變化，而 p-ERK1/2蛋白表達發(fā)生變化， p-ERK1/2蛋白與ERK1/2蛋白比值發(fā)生變化。與CTL組相比

13、，AF組大鼠心房組織p-ERK1/2/ERK1/2蛋白比值明顯升高（P<0.05），DHA組明顯降低（P<0.05）， DHA+AF組無顯著性差異（P>0.05）。與AF組相比，DHA+AF組大鼠心房組織p-ERK1/2/ERK1/2蛋白比值明顯降低（P<0.05）。
　　6. DHA對大鼠心房組織Ⅰ型膠原 mRNA和蛋白表達的影響
　　與CTL組相比，AF組和DHA+AF組大鼠心房組織Ⅰ型膠原 mRNA和蛋白表達水平明顯升

14、高（P<0.05），DHA組無顯著性差異（P>0.05）。與AF組相比， DHA+AF組大鼠心房組織Ⅰ型膠原 mRNA和蛋白表達水平明顯降低（P<0.05）。
　　結論：
　　1. DHA具有延長SD大鼠房顫模型心房肌細胞APD和心房ERP、改善心房電重構的作用，此作用與其下調心房肌TASK-1 mRNA和蛋白的表達進而降低心房肌細胞TASK-1電流密度有關。
　　2. DHA具有改善SD大鼠房顫模型心房纖維化的作用，