二十二碳六烯酸-磷脂生物活性的研究.pdf

1、二十二碳六烯酸(DocosahexaenoicAcid)-磷脂主要存在于烏賊的肌肉和卵中，是一種新型的天然產(chǎn)物。磷脂是動(dòng)植物體內(nèi)細(xì)胞膜的骨架成分，其雙分子層結(jié)構(gòu)維持著膜內(nèi)外物質(zhì)和信息的傳遞。DHA具有廣泛的生理活性，如降血脂、預(yù)防動(dòng)脈硬化、抑制腫瘤生長(zhǎng)和免疫調(diào)節(jié)等作用。目前已證實(shí)，磷脂酰膽堿(Phosphatidylcholine PC)在Sn-2上位結(jié)合DHA后能夠顯示更好的生理活性。本文利用從鳶烏賊卵中提取制備的DHA-磷脂(其中P

2、C含量為64.4％，脂肪酸組成中DHA占30％-40％)，探討了DHA-PC的抗腫瘤活性及其作用機(jī)制；DHA-PC的免疫調(diào)節(jié)作用；DHA-PC對(duì)小鼠智力的影響以及對(duì)正常小鼠脂質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)作用。主要研究結(jié)果如下： 以肝癌細(xì)胞HepG-2為研究對(duì)象，研究了DHA-PC的體外抗腫瘤作用。采用MTT法證明了DHA-PC能夠顯著抑制HepG-2細(xì)胞的增殖(P<0.05，P<0.01)，具有顯著的時(shí)效和量效關(guān)系；采用AO/EB染色法證明DH

3、A-PC能夠誘導(dǎo)細(xì)胞出現(xiàn)明顯的凋亡形態(tài)；采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)證明DHA-PC可以改變細(xì)胞的周期，使細(xì)胞停滯在G1/G0期。提示DHA-PC對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)有明顯的抑制作用，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞G1/G0期阻滯是其主要機(jī)制。采用細(xì)胞-基質(zhì)粘附實(shí)驗(yàn)法、劃痕實(shí)驗(yàn)法、Transwell小室重建基底膜侵襲實(shí)驗(yàn)、雞胚尿囊膜實(shí)驗(yàn)以及Western-blotting法分別檢測(cè)腫瘤細(xì)胞粘附、遷移、侵襲、血管新生以及腫瘤細(xì)胞VEGF的表達(dá)等能力，探討了DHA-

4、PC的體外抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用。結(jié)果表明：DHA-PC作用HepG-2細(xì)胞48h后，減弱了細(xì)胞與基質(zhì)的粘附作用，其效應(yīng)呈濃度依賴性(P<0.05，P<0.01)，顯著抑制HepG-2細(xì)胞的遷移能力(P<0.05)，降低HepG-2細(xì)胞的侵襲能力(P<0.05，P<0.01)，顯著抑制血管的新生，呈現(xiàn)濃度依賴效應(yīng)，下調(diào)腫瘤細(xì)胞血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(Vascular EndothelialGrowth Factor，VEGF)的表達(dá)。提示DHA-

5、PC能夠抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，其作用機(jī)制可能與降低腫瘤細(xì)胞的粘附、遷移、侵襲能力、抑制腫瘤血管新生以及腫瘤細(xì)胞VEGF的表達(dá)有關(guān)。 利用S180建立移植性腫瘤小鼠模型，研究了DHA-PC的體內(nèi)抗腫瘤作用。采用不同劑量(50、200mg/kg.bw)的DHA-PC灌胃荷瘤小鼠14d，結(jié)果表明：DHA-PC可明顯抑制小鼠腫瘤的生長(zhǎng)，其平均抑瘤率為38.06％，能夠提高腫瘤小鼠血清和肝臟中抗氧化酶GST、GSH-PX(P<0.05，P<

6、0.01)活力和GSH(P<0.05，P<0.01)的含量。腫瘤組織HE染色發(fā)現(xiàn)，DHA-PC組癌細(xì)胞出現(xiàn)明顯褪變；免疫組化染色表明，DHA-PC組腫瘤血管密度顯著低于模型組(P<0.05)。提示DHA-PC能夠抑制小鼠體內(nèi)腫瘤的生長(zhǎng)，其作用機(jī)制與提高體內(nèi)的抗氧化水平，降低腫瘤血管密度，抑制腫瘤血管的新生有關(guān)。 探討了DHA-PC對(duì)荷瘤小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用。結(jié)果表明：不同劑量(67、134和268mg/kg.bw)的DHA-PC能

7、夠提高小鼠脾指數(shù)(P<0.05)；顯著提高荷瘤小鼠血清溶血素含量(P<0.01)；提高遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(P<0.05，P<0.01)；促進(jìn)巨噬細(xì)胞的吞噬能力(P<0.01)。提示DHA-PC能全面調(diào)節(jié)機(jī)體的特異性和非特異性免疫功能。 利用腹腔注射東莨菪堿的方法建立實(shí)驗(yàn)性癡呆小鼠模型，灌胃不同劑量(50、100和200 mg/kg.bw)的DHA-PC，觀察了其對(duì)小鼠智力發(fā)育的影響。結(jié)果表明：與模型對(duì)照組比較，DHA-PC能夠顯著降

8、低大腦中MAO(P<0.01)、TChE(P<0.01)活力，提高SOD(P<0.05，P<0.01)活力，增加大腦組織中DHA的含量，降低n-6/n-3 PUFAs的比例。提示DHA-PC能夠改善模型小鼠的智力。 研究了DHA-PC對(duì)正常小鼠脂質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)作用。利用試劑盒法分別檢測(cè)了血清和肝臟中TC、TG含量，利用氣相分析法檢測(cè)了肝臟中主要脂肪酸的組成。結(jié)果表明：與正常對(duì)照組比較，DHA-PC可以顯著降低小鼠血清和肝臟中的TC

9、、TG含量(P<0.01)，提高肝臟組織中DHA含量(P<0.01)；與大豆磷脂對(duì)照組比較，可以顯著降低小鼠血清中TC、TG含量(P<0.01)，肝臟中TC、TG含量(P<0.05，P<0.01)，提高肝臟組織中DHA含量(P<0.01)；與DHA對(duì)照組比較，DHA-PC能夠提高血清中HDL-C含量(P<0.05)，顯著降低肝臟中TG含量(P<0.05)。提示DHA-PC可以有效改善正常小鼠的脂質(zhì)代謝水平，且作用效果要優(yōu)于單獨(dú)的DHA和