簡介：多種原因均可引起急性肝損傷的發(fā)生，急性肝損傷后的高死亡率和預(yù)后差一直是醫(yī)學(xué)界的難題。目前如何更好地治療肝損傷仍是國內(nèi)外的一個難點。嚴重的急性肝功能損傷常引起急性肝功能衰竭，致肝功能不可逆轉(zhuǎn)而危及生命。終末期肝病目前最好的治療方法為原位肝移植，但供體有限及術(shù)后免疫排斥反應(yīng)是兩個主要的障礙。卵圓細胞作為肝臟的干細胞，在肝損傷的修復(fù)中發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，卵圓細胞不同時間點其增殖率不同，于此提出卵圓細胞在各時間點增殖動力存在差異，EPCAM和PCNA共表達反應(yīng)卵圓細胞增殖活性，即各時間點EPCAM和PCNA共表達存在差異。卵圓細胞具有多向分化功能，其可分化為肝細胞、膽管細胞及肝癌細胞，甚至胰島細胞等，而在對卵圓細胞標記物的研究中發(fā)現(xiàn)膽管細胞表達CK19，肝母細胞表達AFP，可進行卵圓細胞分化方向的判斷。判斷卵圓細胞的分化研究有助于對肝臟疾病治療進行評估。近年，自噬與凋亡的研究是熱點問題。自噬是一個必不可少的，保守的通過消除蛋白質(zhì)聚集和破壞細胞器來控制胞漿性質(zhì)的溶酶體降解過程。自噬與凋亡存在密切關(guān)系，兩者相互協(xié)同而對細胞轉(zhuǎn)歸產(chǎn)生影響。而自噬與凋亡的確切關(guān)系仍存在爭議。卵圓細胞作為肝臟干細胞，參與肝臟的再生性修復(fù)及疾病演變，卵圓細胞是否存在自噬現(xiàn)象與其分化與增殖有無關(guān)聯(lián)本實驗建立了不同的急性肝損傷模型，對卵圓細胞在不同情況下增殖及分化有無差異，并對肝損傷修復(fù)中自噬及凋亡進行了初步研究。目的建立不同的肝卵圓細胞增殖模型，觀察其增殖、分化的差異及自噬的變化情況。方法①選擇健康SD大鼠隨機分為五組，分別為四氯化碳組、DGAL組、假手術(shù)組、2AAFPH組及空白對照組，建立肝損傷模型。分別于1D、7D、14D、21D處死動物取肝臟組織。②采用HEMATOXYLINEOSINSTAININGHE染色觀察大鼠肝組織病理組織學(xué)表現(xiàn)。③免疫熒光技術(shù)觀察不同時間點卵圓細胞表達，對陽性細胞進行定量技術(shù)分析。④免疫熒光雙標方法觀察卵圓細胞增殖動力變化。⑤免疫組織化學(xué)方法觀察卵圓細胞分化標記物AFP、CK19、CKIT的表達，并對其進行定量技術(shù)分析判斷其表達有無差異。⑥電鏡下觀察卵圓細胞自噬體超微結(jié)構(gòu)。⑦WESTERNBLOTTING技術(shù)觀察自噬標記蛋白LC3Ⅱ蛋白及BECLIN1蛋白表達。⑧原位缺口末端標記法TUNEL檢測凋亡有無變化。結(jié)果①與空白對照組相比，應(yīng)用四氯化碳組大鼠肝臟顏色為暗紅色，質(zhì)脆，約14天后漸恢復(fù)正常DGAL組大鼠肝臟水腫明顯，色暗紅，質(zhì)脆，約14天后漸恢復(fù)正常假手術(shù)組大鼠肝臟與之相比未見明顯差異2AAFPH組與之相比，1天肝臟呈淡紅色，質(zhì)脆，約21天后肝臟大小及顏色恢復(fù)正常。②肝臟組織HE結(jié)果顯示，與空白對照組相比，四氯化碳組、DGAL組及2AAFPH組可見肝細胞腫脹，排列紊亂，于匯管區(qū)周圍可見細胞形態(tài)小于肝細胞，核質(zhì)深染，細胞核呈卵圓形的卵圓細胞四氯化碳組和DGAL組炎癥細胞浸潤明顯比2AAFPH組少，卵圓細胞少。③血清肝功能檢測顯示，大鼠造模完成后第1天肝功能同空白對照組相比，假手術(shù)組肝功能變化無明顯差異。四氯化碳組、DGAL組及2AAFPH組大鼠天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ASPARTATEAMINOTRANSFERASE，AST）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALANINEAMINOTRANSFERASE，ALT）及堿性磷酸酶ALKALINEPHOSPHATASE，ALP水平明顯升高（AST13397±1435ULVS8247±2186ULP＜00534617±975ULVS8247±2186UL，P＜00555797±1285ULVS8247±2186UL，P＜005ALT47±935ULVS4197±664UL，P＜00510244±504ULVS4197±664UL，P＜0052491±1971ULVS4197±664ULP＜005ALP27033±3609UVS5327±850U，P＜00537933±2155UVS5327±850UP＜00552067±3302UVS5327±850UP＜005），白蛋白ALBUMIN，ALB水平明顯下降（2337±221GLVS3213±373GL，P＜005229±250GLVS3213±373GL，P＜005239±106GLVS3213±373GL，P＜005）。四氯化碳組、DGAL組及2AAFPH組之間比較，2AAFPH組肝功能變化較大。④免疫熒光檢測小鼠抗大鼠OV6抗體表達顯示四氯化碳組、DGAL組及2AAFPH組對OV6抗體表達均在1～14天表達呈上升趨勢，14～21天呈下降趨勢，14天表達量最高。假手術(shù)組與空白對照組比較表達無明顯規(guī)律性。四氯化碳組、DGAL組及2AAFPH組與空白對照組相比OV6抗體的表達在術(shù)后1天、7天、14天及21天均明顯增高，尤以14天升高最明顯10967±404VS567±153，P＜00515467±802VS567±153，P＜00529267±850VS567±153，P＜005，假手術(shù)組表達無明顯變化267±058VS567±153，P＞005。四氯化碳組、DGAL組及2AAFPH組之間相比，2AAFPH組對OV6抗體的表達明顯增高。⑤EPCAM和PCNA熒光雙標檢測反映卵圓細胞增殖動力四氯化碳組、DGAL組及2AAFPH組卵圓細胞增殖率在術(shù)后1天、7天、14天及21天呈下降趨勢，并在術(shù)后7～14天下降明顯，2AAFPH組在7天時為（828±260）％，在14天則下降至5190±201％，P＜005有統(tǒng)計學(xué)意義。假手術(shù)組與空白對照組比較無明顯差異。⑥免疫組織化學(xué)染色顯示與空白對照組相比，四氯化碳組、DGAL組及2AAFPH組對AFP、CK19及CKIT的表達均增加，且為1～14天呈上升趨勢，14天達高峰值，14～21天呈下降趨勢（AFP、CK19及CKIT四氯化碳組11667±351VS433±231，P＜00510867±651VS267±089P＜00510533±416VS400±100，P＜005DGAL組15533±569VS433±231P＜00514867±603VS267±089P＜00515767±322VS767±208，P＜0052AAFPH組26533±808VS433±231，P＜0052610±1868VS267±089，P＜00523633±651VS400±100P＜005）。假手術(shù)組與空白對照組比較無明顯變化（467±115VS433±231，P＞005300±100VS267±089P＞005367±058VS400±100P＞005）。四氯化碳組、DGAL組及2AAFPH組對AFP的表達存在差異（F值為260421，P＜001）對CK19的表達有差異（F值為144632，P＜005）對CKIT的表達有差異（F值為273875，P＜005），表現(xiàn)為2AAFPH組對AFP、CK19及CKIT的表達高于其余各組。⑦透射電鏡顯示1天、7天、14天及21天卵圓細胞內(nèi)均未發(fā)現(xiàn)自噬體。1天時電鏡下觀察卵圓細胞體積小，胞核與胞漿比值較高，細胞器組成為散在明顯的微絲束和較多的核糖體及少許粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，7天到21天觀察卵圓細胞體積多較1天時大，此時含有較多的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及糖元，也可見少量的張力微絲。⑧WESTERNBLOT檢測結(jié)果顯示四氯化碳組、DGAL組及2AAFPH組大鼠肝臟組織中BECLIN1及LC3Ⅱ蛋白隨時間變化表達水平明顯增加，各組間對BECLIN1蛋白的表達存在差異（F值為7811，P＜005），各組間對LC3Ⅱ蛋白的表達亦存在差異（F值為27592，P＜005）。假手術(shù)組與空白對照組大鼠肝組織BECLIN1及LC3Ⅱ蛋白表達水平與時間變化無明顯變化BECLIN1F值為0413，P＞005LC3ⅡF值為1173，P＞005。⑨TUNEL檢測結(jié)果顯示2AAFPH組凋亡細胞表達在1～14天呈上升趨勢，14～21天凋亡細胞表達呈下降趨勢。結(jié)論不同模型的急性肝損傷肝臟的損傷程度不同，以2AAFPH組為重，四氯化碳組和DGAL組次之。2AAFPH組肝臟的修復(fù)通過肝卵圓細胞的活化來完成。四氯化碳組和DGAL組作為中等程度的肝損傷，其修復(fù)主要通過肝細胞的再生及少量卵圓細胞的活化來完成2AAFPH模型卵圓細胞增殖活化數(shù)量多于其他模型，卵圓細胞增殖的高峰出現(xiàn)于術(shù)后7～14天卵圓細胞增殖動力在卵圓細胞數(shù)達高峰前開始下降不同卵圓細胞處于不同的分化階段，在不同時間卵圓細胞處于不同的分化階段自噬增強可能促進肝損傷的修復(fù)的完成自噬可能抑制肝損傷大鼠肝細胞的凋亡。

簡介：納米材料具有獨特的物理和化學(xué)性質(zhì)，如大的比表面積、高的催化活性和生物相容性，已被廣泛地用于催化、能源、生物和分析等領(lǐng)域。隨著傳統(tǒng)的物理和化學(xué)制備納米材料方法的發(fā)展，近年來采用生物方法制備和組裝納米結(jié)構(gòu)材料的研究引起了廣泛的關(guān)注。生物合成的納米材料因富集大量生物活性分子被賦予獨特的物理化學(xué)特性、生物活性以及良好的分散性和穩(wěn)定性，使其在生物化學(xué)等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。目前，已有多種生物包括細菌、放線菌、真菌以及一些高等植物用于合成金、銀、硫化鎘、硫化鋅以及磁性氧化鐵等納米材料。與此同時，實現(xiàn)納米材料尺寸、形貌生物可控合成也成為納米生物合成新技術(shù)前沿研究領(lǐng)域之一。在本研究小組已有的納米生物技術(shù)研究工作基礎(chǔ)上，本論文瞄準這一前沿研究方向，開展了納米材料生物可控合成技術(shù)的研究。以4株真菌包括青霉PENICILLIUMSP、出芽短梗霉AUREOBASIDIUMPULLULAN、鐮刀菌FUSARIUMSP及尖孢鐮刀霉FUSARIUMOXYSPUM和尖葉擬船蘚植物DOLICHOMITRIOPSISDIVERSIFMIS為生物材料，研究了不同真菌合成AU納米顆粒的生化合成機制；發(fā)展了細胞內(nèi)調(diào)控合成不同尺寸AU納米顆粒新方法；探索了DDIVERSIFMIS植物細胞外調(diào)控合成不同形貌AU納米材料的規(guī)律；并進一步考察了富集不同生物活性分子AU納米顆粒的細胞生物學(xué)效應(yīng)，以及對腫瘤細胞毒性作用機制。以期為生物調(diào)控合成納米材料基礎(chǔ)性研究和進一步應(yīng)用提供有益的探索。本論文研究工作具體包括以下幾方面1不同真菌合成AU納米顆粒生化合成機制研究利用環(huán)境分離的APULLULANS、FUSARIUMSP及FOXYSPUM3株真菌發(fā)展了真菌細胞內(nèi)合成AU納米材料的生物方法，并對其合成的生化合成機制進行了比較分析。將APULLULANS、FUSARIUMSP和FOXYSPUM細胞與氯金酸共孵育，3株真菌均可細胞內(nèi)合成AU納米顆粒；生化成分分析及FTIR光譜表征發(fā)現(xiàn)，A。PULLULANS細胞以還原糖為生物活性分子介導(dǎo)細胞內(nèi)AU納米顆粒合成，而FUSARIUMSP及FOXYSPUM以蛋白質(zhì)為生物活性分子介導(dǎo)細胞內(nèi)AU納米顆粒組裝進一步SDSPAGE蛋白質(zhì)電泳分析表明，F(xiàn)USARIUMSP細胞內(nèi)分子量為100KDA，25KDA和19KDA的蛋白質(zhì)參與AU納米顆粒合成，而FOXYSPUM細胞內(nèi)分子量為25KDA和19KDA蛋白質(zhì)參與AU納米顆粒合成，APULLULANS合成的AU納米顆粒不存在蛋白質(zhì)。研究結(jié)果將揭示3株真菌細胞不同的生物活性分子介導(dǎo)了AU納米材料的合成。通過采用LCMSMS法對蛋白質(zhì)分子進行鑒定，結(jié)果表明FUSARIUMSP參與合成的AU納米顆粒的3個蛋白質(zhì)分別為脂膜ATP酶PLASMAMEMBRANEATPASE、3葡聚糖結(jié)合蛋白3GLUCANBINDINGPROTEIN及3磷酸甘油脫氫酶GLYCERALDEHYDE3PHOSPHATEDEHYDROGENASE，這些蛋白均為細胞能量代謝相關(guān)蛋白。細胞超薄切片表征發(fā)現(xiàn)，細胞內(nèi)合成的AU納米顆粒均存在真菌細胞液泡中。時間動力學(xué)TEM結(jié)果表明，還原糖易于合成球形、單分散性AU納米顆粒，蛋白質(zhì)易于介導(dǎo)AU納米顆粒聚合體的組裝。2基于溫度調(diào)控真菌細胞內(nèi)合成不同尺寸AU納米顆粒研究以溫度為調(diào)控因子，利用環(huán)境分離的真菌PENICILLIUMSP發(fā)展了一種細胞內(nèi)調(diào)控合成尺寸可控的AU納米顆粒新方法。將真菌PENICILLIUMSP細胞與氯金酸共培育后，可在細胞內(nèi)合成球形的、單分散性的AU納米顆粒，粒徑分布1835NM。合成動力學(xué)TEM表征發(fā)現(xiàn)，細胞吸收反應(yīng)溶液AUCL4，在細胞內(nèi)首先被還原形成AU核，再組裝成AU納米顆粒。生物組分分析結(jié)果表明，PENICILLIUMSP細胞內(nèi)還原糖為活性組分介導(dǎo)細胞內(nèi)AU納米顆粒的合成。通過控制合成反應(yīng)溫度，在4℃條件下，PENICILLIUMSP細胞可細胞內(nèi)合成410NM粒徑的AU納米顆粒。在28℃則合成2037NM粒徑顆粒，在不恒定的溫度條件下，PENICILLIUMSP細胞則合成多分散性的AU納米顆粒。TEM結(jié)果表明，純化的AU納米顆粒也表現(xiàn)為球形、單分散性等相似的特征。FTIR光譜表征表明，純化的AU納米顆粒存在1405CM1多糖羰基伸縮振動。研究結(jié)果揭示通過控制反應(yīng)溫度條件，可實現(xiàn)真菌細胞內(nèi)對納米顆粒的尺寸控制。3基于PH調(diào)控植物細胞外合成不同形貌AU納米顆粒研究利用尖葉擬船蘚DDIVERSIFMIS植物體為生物材料，以PH為調(diào)控因子，發(fā)展了一種細胞外生物調(diào)控合成AU納米顆粒的新方法。將氯金酸鈉與過夜浸泡于不同PH溶液的蘚植物體混合液共孵育后，在PH36條件下，蘚植物體可合成球形、三角形、立方體等形貌的AU納米顆粒。生物組分分析發(fā)現(xiàn)，蘚植物蛋白質(zhì)為活性分子介導(dǎo)AU納米顆粒合成。PAGE分析表明，該蛋白質(zhì)分子量為71KDA、等電點PI49。圓二色譜CIRCULARDICHROISM，CD表征發(fā)現(xiàn)，在不同的PH溶液中該蛋白質(zhì)的二級構(gòu)象可以被誘導(dǎo)而改變。在PH3溶液中其二級結(jié)構(gòu)為無規(guī)則卷曲；PH4溶液中其二級結(jié)構(gòu)為中間過渡類型；PH5溶液中其二級結(jié)構(gòu)為Α螺旋；而在PH6條件下其二級結(jié)構(gòu)為無規(guī)則卷曲，并伴隨三級的改變。進一步的重組裝實驗結(jié)果揭示，該蘚植物蛋白在AU納米顆粒合成過程起著模板作用，并控制不同形貌AU納米顆粒的組裝。在PH3溶液中具有無規(guī)則卷曲二級結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)，可組裝三角形和球形兩種形貌AU納米顆粒，多分散性特征。PH4溶液中具有中間過渡類型二級結(jié)構(gòu)的蘚蛋白質(zhì)，可組裝球形AU納米顆粒，單分散性好。PH5溶液中具有Α螺旋二級結(jié)構(gòu)的蘚蛋白質(zhì)，可組裝立方體形形貌的AU納米顆粒。在PH6條件下具有無規(guī)則卷曲二級結(jié)構(gòu)，并伴隨三級改變的蛋白質(zhì)，組裝的AU納米顆粒為多分散性的球形。研究結(jié)果揭示通過控制合成PH條件，可實現(xiàn)以蛋白質(zhì)為活性分子的生物調(diào)控合成不同形貌納米顆粒。4不同真菌合成的AU納米顆粒細胞生物學(xué)效應(yīng)研究利用PENICILLIUMSP、FUSARIUMSP和FOXYSPUM真菌調(diào)控合成了不同生物分子組成的球形AU納米顆粒，研究了3種AU納米顆粒引起的肝癌細胞株BEL7404細胞生物學(xué)形態(tài)變化，細胞粘附性改變，以及對細胞活性影響等一系列細胞生物學(xué)效應(yīng)。實驗結(jié)果揭示，不同生物分子組成納米顆粒引起的細胞生物學(xué)效應(yīng)差異很大。PENICILLIUMSP細胞合成具有還原糖組成的AU納米顆粒對供試細胞BEL7404有較強的毒性，IC50為51ΜG。而FUSARIUMSP和FOXYSPUM細胞合成的具有蛋白質(zhì)組成的AU納米顆粒對供試細胞BEL7404無毒性，具有較好的生物相容性?？梢姡蒙锖铣刹煌M成的AU納米顆粒有望發(fā)展為納米載體或者潛在納米藥物應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域。5基于蘚植物合成的蛋白質(zhì)AU納米顆粒細胞毒性機制研究利用植物尖葉擬船蘚DDIVERSIFMIS合成了具有蛋白質(zhì)組成的球形AU納米顆粒，研究了蛋白質(zhì)AU納米顆粒與肝癌細胞株BEL7404及肝正常細胞株L02孵育后引起的細胞生物學(xué)效應(yīng)和細胞毒性及機制。實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，蘚合成具有蛋白質(zhì)組成的AU納米顆粒對細胞的毒性作用具有一定的選擇性，對肝癌細胞株BEL7404具有較強的毒性作用，且具有濃度依賴性。但對肝正常細胞株L02毒性較小于肝癌細胞株。進一步將蛋白質(zhì)AU納米顆粒與MCF7及HELA等腫瘤細胞共孵育，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該顆粒對這2種腫瘤細胞均較強的毒性作用。利用流式細胞術(shù)分析該納米顆粒的選擇性作用機制表明，蛋白質(zhì)AU納米顆粒對細胞毒性作用源于蘚蛋白質(zhì)，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)AU納米顆粒的蛋白質(zhì)解離后，其AU溶液對細胞沒有毒性。該實驗結(jié)果將為蘚植物合成的蛋白質(zhì)納米顆粒發(fā)展為用于腫瘤治療的納米組合藥物提供實驗參考。

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簡介：糖蜜是制糖工業(yè)的副產(chǎn)物，具有生產(chǎn)集中，產(chǎn)量大等特點。目前糖蜜主要用來發(fā)酵生產(chǎn)酒精。本研究主要是對糖蜜酒精酵母細胞固定化進行多尺度的優(yōu)化篩選發(fā)酵性能優(yōu)良的固定化酵母菌選擇優(yōu)良的固定化載體優(yōu)化載體固定化成型工藝對固定化酵母發(fā)酵條件進行優(yōu)化。主要研究結(jié)果如下1通過比較六株釀酒酵母菌篩選出最適合用于糖蜜酒精發(fā)酵的固定化酵母菌株以淀粉酵母A為對照菌株，對由AS21190馴化篩選得到的A8、A43、A61、B2、D4五株酵母菌進行菌落形態(tài)特征比較、發(fā)酵性能等方面比較，結(jié)果表明糖蜜酒精酵母菌A43、A61、D4三株酵母菌具有典型的酵母菌落形態(tài)，發(fā)酵性能強，發(fā)酵糖蜜酒精含量高，殘?zhí)橇康?，尤其是糖蜜酒精酵母A43表現(xiàn)出很強的發(fā)酵能力，酒精含量高達到1118％VV，殘?zhí)橇康蜑?13GL且優(yōu)于對照用淀粉酒精酵母A，綜上實驗結(jié)果選擇糖蜜酒精酵母A43為最佳固定化酵母源。2經(jīng)過對海藻酸鈣、聚乙烯醇、聚乙烯醇海藻酸鈣三種固定化載體從機械強度、傳質(zhì)性能、發(fā)酵性能等方面的比較，得出聚乙烯醇海藻酸鈣固定化載體機械強度高，優(yōu)良的傳質(zhì)性能，發(fā)酵性能強，且價廉易得，具有很好的工業(yè)化應(yīng)用前景。比較不同的處理方法和成型工藝手段對復(fù)合材料固定化酵母的影響，通過單因素和正交試驗優(yōu)化制備復(fù)合材料聚乙烯醇海藻酸鈣固定化載體的工藝條件聚乙烯醇濃度9％WV、海藻酸鈉濃度10％WV，制備成顆粒狀的固定化酵母。從實際工業(yè)化生產(chǎn)和糖蜜酒精連續(xù)化發(fā)酵工藝兩方面方面考慮，決定采取反復(fù)冷凍解凍的固定化方法制備成蜂窩煤狀的固定化酵母。按照最優(yōu)工藝制備的復(fù)合材料聚乙烯醇海藻酸鈣固定化糖蜜酒精酵母的機械強度為3752GMM2，傳質(zhì)系數(shù)為01935，酒精含量1218％。3選取發(fā)酵初始糖蜜的錘度、發(fā)酵PH值、發(fā)酵溫度、固定化酵母接種量四個影響因素，通過單因素實驗選用表L1645進行正交實驗優(yōu)化固定化酵母的發(fā)酵條件，確定以聚乙烯醇海藻酸鈣固定化糖蜜酒精酵母發(fā)酵糖蜜酒精的最優(yōu)發(fā)酵條件發(fā)酵初始糖蜜的錘度32°BX、發(fā)酵溫度34℃、固定化酵母接種量4％WV、發(fā)酵PH值35。其中發(fā)酵初始糖蜜的錘度對發(fā)酵的影響最為顯著，發(fā)酵液的PH值對發(fā)酵的影響效果不顯著。

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簡介：中圖分類號UDC】S26‘90學(xué)校代碼10055密級公開尚越大法博士學(xué)位論文納米氧化鋅對海馬神經(jīng)元電生理特性的影響及對PCI2細胞生物學(xué)效應(yīng)的機制研究INFLUENCESOFNANOPARTICLEZINCOXIDEINTHEELECTROPHYSIOLOGICALPROPERTIESOFHIPPOCAMPALNEURONSANDTHEMECHANISMOFTHEBIOLOGICALEFFECTSONPC12CELLS評閱人南開大學(xué)研究生院二。一O年五月南開大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行研究工作所取得的研究成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本學(xué)位論文的研究成果不包含任何他人創(chuàng)作的、已公開發(fā)表或者沒有公開發(fā)表的作品的內(nèi)容。對本論文所涉及的研究工作做出貢獻的其他個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名趙量霞2010年6月3日非公開學(xué)位論文標注說明根據(jù)南丌大學(xué)有關(guān)規(guī)定，非公開學(xué)位論文須經(jīng)指導(dǎo)教師同意、作者本人申請和相關(guān)部門批準方能標注。未經(jīng)批準的均為公丌學(xué)位論文，公開學(xué)位論文本說明為空白。論文題目申請密級口限制≤2年口秘密≤10年口機密≤20年保密期限20年月日至20年月日審批表編號批準日期20年月同限制★2年最長2年，可少丁2年秘密★10年最長5年，可少于5年機密★20年最長10年，可少于10年

簡介：納米材料因在光催化、電化學(xué)、生物醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域都有著廣泛的應(yīng)用前景，成為當(dāng)今社會人們研究探索的熱點問題。納米硒因具有較高的生物活性、抗氧化性和低毒性被應(yīng)用于機體新陳代謝和生物醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域，并取得了很好的臨床結(jié)果；硫則是在光催化方面有很大的優(yōu)勢。硫元素因與硒元素同主族，也應(yīng)該存在著很好的生物活性。論文應(yīng)用水熱法與歧化法分別合成單質(zhì)納米SE、S。利用X射線衍射和元素能譜對產(chǎn)物的組成進行分析。利用掃描電鏡和透射電鏡對樣品的形貌進行研究。利用熱重與紅外光譜等手段對其穩(wěn)定性能進行分析。通過研究單質(zhì)納米SE、S在體外對細胞活性的影響，推測可能的反應(yīng)機理。此論文主要研究成果總結(jié)如下（1）納米SE的制備和抗腫瘤活性研究采用水熱法制備納米SE，以牛血清白蛋白做表面活性劑，通過改變反應(yīng)時間來調(diào)控納米SE顆粒的粒徑大小。取納米硒在體外作用于乳腺癌與肝癌細胞，結(jié)果顯示，納米SE對肝癌細胞的抑制作用隨著濃度的增加和時間延長而增強，對乳腺癌細胞影響不大。（2）單質(zhì)S的制備和抗腫瘤活性研究在酸性條件下，以硫代硫酸鈉為硫源，利用表面活性劑的添加與否控制合成單質(zhì)S。由X射線衍射圖中衍射峰的變化，可得知兩組樣品為兩種形態(tài)，即結(jié)晶狀態(tài)與無定形狀態(tài)。取無定形單質(zhì)硫在體外作用于肝癌細胞與正常細胞，結(jié)果顯示，單質(zhì)硫?qū)Ω伟┘毎囊种谱饔秒S著濃度的增加和時間延長而增強，對正常細胞影響不明顯。

簡介：目的探討人體瘢痕疙瘩KELOIDKD中是否存在多能間充質(zhì)干細胞MSCS并對其進行分離培養(yǎng)及初步研究其生物學(xué)特性。方法采用兩步酶消化法從人的瘢痕疙瘩中分離培養(yǎng)瘢痕疙瘩來源間充質(zhì)干細胞KELOIDDERIVEDMESENCHYMALSTEMCELLKMSCS觀察其貼壁、增殖等生物學(xué)特性應(yīng)用流式細胞技術(shù)FCM檢測培養(yǎng)細胞的表面標志CD29、CD34、CD44、CD45及CD90的表達以及檢測細胞周期通過免疫細胞化學(xué)法檢測該細胞CK19、OCT4、波形蛋白的表達情況逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)REALTIMEPOLYMERASECHAINREACTIONRTPCR檢測細胞OCT4MRNA的表達情況實驗同時對該細胞進行成骨細胞、成軟骨細胞以及成脂細胞多向誘導(dǎo)分化能力鑒定。結(jié)果從人的瘢痕疙瘩中分離出間充質(zhì)樣干細胞原代細胞形態(tài)多為長梭形或多角形呈放射狀集落樣生長體外培養(yǎng)連續(xù)傳代后形態(tài)較為均一排列不規(guī)則以梭形為主細胞生長曲線顯示細胞開始12天生長較慢從第三天左右細胞生長增快到第8天左右生長進入平臺期細胞周期顯示細胞群中有6518±396％的細胞處于G0G1期S期的細胞占692±182％G2M的細胞占2790±219％流式細胞儀檢測細胞表型分析表明該細胞均高表達CD29、CD44、CD90等間充質(zhì)干細胞表面標志、不表達CD34、CD45等造血干細胞表面標志且原代及P3代細胞無明顯變化RTPCR法檢測多能干細胞標志物OCT4表達呈陽性免疫細胞化學(xué)法檢測間充質(zhì)細胞標志物波形蛋白、多能干細胞標志物OCT4呈陽性表達、上皮細胞標志物CK19呈陰性表達多向誘導(dǎo)分化實驗顯示該細胞可以向成骨細胞、軟骨細胞和成脂細胞分化具有多向分化潛能。結(jié)論人體瘢痕疙瘩內(nèi)存在間充質(zhì)樣干細胞這種干細胞可能在瘢痕疙瘩發(fā)生中發(fā)揮重要作用。

簡介：背景和目的隨著納米技術(shù)日新月異的進步，各種各樣的納米產(chǎn)品充斥著人們的生產(chǎn)生活。但對于納米粒子如何侵入機體細胞，如何移行分布，代謝排出，及其產(chǎn)生的生物醫(yī)學(xué)效應(yīng)等問題仍存在爭議。本實驗采用目前研究較廣泛的ACNP、SWCNT、QDS納米粒子，體外研究其對HELA細胞的影響，探討侵入細胞的方式及作用機制。體內(nèi)研究其在小鼠體內(nèi)的移行分布，組織損傷，探討體內(nèi)的排泄方式，為進一步研究納米粒子的生物安全性及臨床前研究提供依據(jù)。方法MTT法、LDH法及AFM觀察評價ACNP、SWCNT、QDS對HELA細胞的毒性；胞吞抑制劑和4℃下低溫孵育處理細胞后TEM觀察ACNP、SWCNT、QDS跨膜方式及對HELA細胞超微結(jié)構(gòu)的影響；FCM檢測細胞的凋亡；SCGE檢測三種納米粒子對HELA細胞遺傳物質(zhì)的損傷；通過尾部靜脈注射，組織切片研究納米粒子在小鼠體內(nèi)的移形分布及對組織的損傷情況，TEM觀察其可能的排泄器官。結(jié)果ACNP、SWCNT、QDS有一定的細胞毒性并與時間和劑量成正相關(guān)。細胞形態(tài)觀察顯示，ACNP、SWCNT均能引起HELA細胞體積縮小，細胞貼壁能力下降，游離細胞增多等現(xiàn)象。AFM結(jié)果顯示，ACNP吸附在細胞膜表面，看不清完整的細胞形態(tài)；SWCNT引起細胞皺縮、分泌的黏附物減少；QDS引起細胞高度變低，且細胞膜表面有很多不規(guī)則凹陷。ACNP、SWCNT、QDS均能誘導(dǎo)HELA細胞凋亡及DNA損傷。不同方式處理細胞后TEM觀察發(fā)現(xiàn)，ACNP能通過細胞膜進入細胞質(zhì)進而進入細胞核，引起細胞表面微絨毛消失，線粒體腫脹，細胞核皺縮等現(xiàn)象；尺度較短的SWCNT進入細胞能引起細胞核固縮，空泡增多等現(xiàn)象，經(jīng)不同方式處理細胞后未發(fā)現(xiàn)有SWCNT進入細胞內(nèi)部；QDS結(jié)合在細胞膜上，不能進入細胞內(nèi)部，但也能引起細胞線粒體腫脹，細胞質(zhì)內(nèi)的空泡增多等現(xiàn)象。體內(nèi)試驗結(jié)果顯示，三種納米粒子在肝、脾、肺中分布較多并造成肝實質(zhì)細胞變性，細胞間距變大；肺泡處細胞充血；而對心、脾、腦、空腸、回腸、結(jié)腸等組織結(jié)構(gòu)沒有產(chǎn)生明顯改變組織TEM觀察發(fā)現(xiàn)ACNP可通腎小球濾過，在空腸、回腸、結(jié)腸杯狀細胞及絨毛結(jié)構(gòu)中均發(fā)現(xiàn)較多的ACNP且對細胞結(jié)構(gòu)沒有造成明顯影響；SWCNT能機械性的插入細胞內(nèi)的細胞器引起細胞不同程度的損傷，除在結(jié)腸中發(fā)現(xiàn)少量的SWCNT外，其他器官未發(fā)現(xiàn)有明顯的SWCNT存在。QDS組中發(fā)現(xiàn)除對小鼠的肺造成出血性損傷外在腎臟中也有較多分布，但對腎臟沒有造成明顯的損傷。結(jié)論ACNP、SWCNT、QDS均可抑制HELA細胞的增值、誘導(dǎo)細胞凋亡及產(chǎn)生DNA損傷。其機制可能為，損傷核DNA，破壞細胞膜使膜通透性改變進而造成細胞壞死。ACNP可通過胞吞機制之外的方式進入細胞質(zhì)，進而進入細胞核；尺寸較小的SWCNT可通過能量依賴的胞吞作用進行跨膜轉(zhuǎn)運。QDS結(jié)合在細胞膜上不受胞吞抑制劑和低溫孵育的影響，也不能進入細胞內(nèi)。三種納米粒子在KM小鼠體內(nèi)代謝、分布不同，損傷程度也不一樣。ACNP主要通過腎臟排泄，也可通過空腸、回腸、結(jié)腸等組織排出體外；SWCNT由于縱橫比大、較難排出體外；QDS可能通過腎臟而被清除體外。

簡介：點擊查看更多臍帶間充質(zhì)干細胞生物學(xué)特性及功能研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：隨著納米科技的迅速發(fā)展，多功能納米顆粒為生物成像、納米藥物載體、疾病治療等臨床醫(yī)學(xué)應(yīng)用提供了更加有效的手段。納米顆粒在細胞內(nèi)轉(zhuǎn)運行為對生物安全以及高效納米藥物載體的構(gòu)建非常重要，因此研究納米顆粒穿過各種生物障礙比如細胞膜進入細胞、細胞內(nèi)轉(zhuǎn)運的機制以及納米顆粒的最終歸屬非常關(guān)鍵。但是，現(xiàn)在對納米顆粒從一種細胞器轉(zhuǎn)運到另一種細胞器的過程了解還很欠缺，認識納米顆粒引起的細胞內(nèi)環(huán)境的變化以及納米顆粒轉(zhuǎn)運過程中伴隨著的細胞作用機制仍然是很大的挑戰(zhàn)。我們利用信號肽修飾EUPOMSPAA納米顆粒并研究其在細胞內(nèi)的轉(zhuǎn)運行為，對細胞和納米顆粒之間的相互作用有了新的理解。這種納米顆粒適用于生物成像，而且在基于同步輻射的X射線高分辨成像中也有著很大的應(yīng)用潛力。通過線粒體信號肽的修飾，使納米顆?？梢暂p易的穿過細胞膜，并且成功的靶向到線粒體。而經(jīng)過一段時間后該納米顆粒在溶酶體中出現(xiàn)的幾率顯著增加，因此在不同時間階段納米顆粒在細胞內(nèi)各種細胞器中的分布是動態(tài)變化的。值得注意的是，我們的實驗結(jié)果證實，隨著納米顆粒在線粒體上的積累，會對線粒體產(chǎn)生一定程度的損傷，因此引起了線粒體自噬的發(fā)生。通過對相關(guān)蛋白進行分析以及線粒體膜電位染色，我們得出這種現(xiàn)象是PARKIN蛋白介導(dǎo)的、由納米顆粒引起的線粒體膜電位降低導(dǎo)致的。這種納米顆粒引起的細胞自噬反應(yīng)反過來會影響納米顆粒在細胞內(nèi)的轉(zhuǎn)運及分布，同時為納米顆粒提供了另一種可供選擇的轉(zhuǎn)運途徑。在我們的研究工作中發(fā)現(xiàn)的這類納米顆粒和細胞內(nèi)細胞器相互作用的新現(xiàn)象，包括納米材料的生物學(xué)效應(yīng)以及宿主細胞對納米材料代謝過程的影響變化，有可能為發(fā)展新型納米生物技術(shù)和納米藥物，并最終為人類健康醫(yī)療服務(wù)提供所必要的知識和手段。

簡介：開發(fā)高效低毒的基因轉(zhuǎn)染載體是基因治療領(lǐng)域中的關(guān)鍵技術(shù)問題。近年來，憑借其獨特的理化性質(zhì)，功能化石墨烯在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域引起了人們的廣泛關(guān)注，顯示出良好的應(yīng)用前景。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)，與傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)染試劑相比，聚乙二醇與聚乙烯亞胺共同修飾的氧化石墨烯NGOPEGPEI對質(zhì)粒DNA和SIRNA的轉(zhuǎn)染效率更加理想，然而在高濃度下仍表現(xiàn)出一定的細胞毒性。因此，本課題將系統(tǒng)研究并揭示其細胞毒性機理，以便將其進一步優(yōu)化，并為開發(fā)出理想的基因轉(zhuǎn)染載體提供重要的理論依據(jù)。本研究主要內(nèi)容包括⑴對NGOPEGPEI的細胞毒性進行了研究。MTT實驗結(jié)果顯示，10ΜGML左右的NGOPEGPEI處理可造成多種細胞活性降低。ANNEXINⅤFITCPI雙染實驗表明該材料的細胞毒性是通過細胞壞死途徑產(chǎn)生，而非細胞凋亡途徑。通過比較MTT實驗與ANNEXINⅤFITCPI雙染實驗的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)兩種實驗方法的結(jié)果存在一定差異，結(jié)合其實驗原理，分析得出NGOPEGPEI可能影響了細胞周期。后續(xù)一系列研究表明，NGOPEGPEI引起HELA細胞的S期細胞阻滯現(xiàn)象，且絕大部分死亡細胞處于S期這些細胞因為不能順利完成由S期向G2期的轉(zhuǎn)變，導(dǎo)致細胞壞死。將細胞同步化在G1期后再經(jīng)NGOPEGPEI處理，發(fā)現(xiàn)，NGOPEGPEI處理組的細胞整個細胞周期變長，且進入S期時有顯著的延遲。⑵對NGOPEGPEI引發(fā)S期細胞阻滯的分子機理進行了深入研究。實驗表明，NGOPEGPEI引起了嚴重的DNA損傷，而且引發(fā)S期檢驗點活化所必需的CDC25A高度磷酸化。免疫印跡的結(jié)果表明，NGOPEGPEI處理后的細胞中，CDC25A活化通路中的相關(guān)蛋白質(zhì)，包括ATMATR及其它們對應(yīng)的底物CHK2和CHK1，其磷酸化水平均顯著提高。此外，NGOPEGPEI引發(fā)的S期細胞阻滯及細胞形態(tài)的改變可被CDC25A磷酸化抑制劑AZD7762所抑制。由以上結(jié)果分析可知，NGOPEGPEI進入細胞后，通過某種未知途徑引起DNA損傷，而DNA損傷通過ATMCHK2及ATRCHK1兩條信號通路激活CDC25A，從而激活S期檢驗點，最終引起S期細胞阻滯和細胞周期的延長，嚴重時，造成細胞壞死。⑶揭示了NGOPEGPEI介導(dǎo)的真核細胞壞死的分子機制，為深入探索GO及其衍生物的細胞學(xué)效應(yīng)，尤其是其對真核細胞的細胞周期的影響方面，提供了重要的理論依據(jù)，同時也為GO及其衍生物的改性以成為高效無毒的基因轉(zhuǎn)染載體提供了重要信息，在納米材料的生物學(xué)效應(yīng)及生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用研究等方面有重大理論與實踐意義。

簡介：點擊查看更多不同管徑Ti-TiO2納米管對成纖維細胞和成骨細胞生物學(xué)行為的影響.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：目的觀察碳化二亞胺EDC交聯(lián)改性的脫細胞版納近交系微型豬肌腱的組織形態(tài)變化，檢測其體外降解特性、細胞毒性、免疫原性以及生物力學(xué)性能，探討其作為肌腱移植支架材料的可行性，為異種肌腱移植的進一步研究提供實驗依據(jù)。方法1、將取自版納近交系微型豬的趾伸肌腱按不同處理方法分為新鮮肌腱組FT、深低溫凍存肌腱組DFT、單純脫細胞肌腱組SDT和EDC交聯(lián)的脫細胞肌腱組EAT，通過HE染色光鏡觀察、掃描電鏡觀察，比較各處理組肌腱的組織結(jié)構(gòu)，觀察EDC交聯(lián)對肌腱結(jié)構(gòu)的改變；2、各組肌腱加入含Ⅰ型膠原酶60UGML的PBS降解液中，于開始降解后第1、2、3、4、5、6、7天計算降解率，比較各組肌腱降解率；3、提取各組肌腱浸提液，以浸提液為培養(yǎng)基和人成纖維細胞共培養(yǎng)，于培養(yǎng)后第1、2、3、4、5、6、7D用MTT法檢測細胞活性，評價各組肌腱的細胞毒性；4、以各組肌腱浸提液作為抗原，淋巴細胞增殖實驗評價各組肌腱免疫原性；各組肌腱行大鼠皮下包埋術(shù)，分別于術(shù)后第1、2、3、4周行包埋肌腱HE染色組織學(xué)觀察，比較各組炎癥反應(yīng)；5、檢測各處理組肌腱的拉伸強度、斷裂伸長率和彈性模量，比較生物力學(xué)性能。結(jié)果1、新鮮肌腱和深低溫凍存肌腱組織結(jié)構(gòu)相似，膠原纖維排列整齊、規(guī)則，纖維間肌腱細胞散在排列；單純脫細胞肌腱腱束粗細不一，結(jié)構(gòu)松散，束間空隙、微孔形成，大小不等，束間相連疏松，未見腱細胞，經(jīng)EDC交聯(lián)后腱束表面光滑，腱束間連接緊密，束間形成形態(tài)大小相似的孔隙狀結(jié)構(gòu)；2、降解后第7天新鮮肌腱、深低溫凍存肌腱、單純脫細胞肌腱和EDC交聯(lián)的脫細胞肌腱降解率分別為25560±0948％、25950±0890％、72154±0926％和23550±0890％，新鮮肌腱、深低溫凍存肌腱和EDC交聯(lián)的脫細胞肌腱三組間兩兩比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義P005，而這三組肌腱和單純脫細胞肌腱間相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義P005；4、單純脫細胞肌腱和深低溫凍存肌腱相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義P005，經(jīng)EDC交聯(lián)后單純脫細胞肌腱免疫原性較深低溫凍存肌腱明顯降低P005；5、生物力學(xué)檢測結(jié)果顯示，單純脫細胞肌腱和深低溫凍存肌腱相比，拉伸強度、彈性模量顯著下降，而斷裂應(yīng)變顯著增加P005。結(jié)論1EDC交聯(lián)改性的版納微型豬脫細胞肌腱，微結(jié)構(gòu)更加緊密、腱束排列有序、形成大小形狀相似的孔隙狀結(jié)構(gòu)；2EDC交聯(lián)改性可提高脫細胞肌腱的抗降解能力；3EDC交聯(lián)改性后的肌腱支架材料無明顯細胞毒性；4EDC交聯(lián)改性可降低脫細胞肌腱的免疫原性；5EDC交聯(lián)可提高脫細胞肌腱材料的拉伸強度、彈性模量，降低斷裂伸長率。