簡介：研究目的本文采用智能材料壓電陶瓷裝置，通過檢測MC3T3E1成骨樣細(xì)胞增殖活性、細(xì)胞分化特異基因表達(dá)探討三維培養(yǎng)條件下細(xì)胞對不同力學(xué)強(qiáng)度的生物學(xué)響應(yīng)。材料與方法1采用冷凍干燥制備不同質(zhì)量比殼聚糖羥基磷灰石脫鈣骨基質(zhì)CHITOSANHYDROXYAPATITEDEMINERALIZEDBONEMATRIX，CSHADBM復(fù)合支架材料。掃描電鏡SCANNINGELECTRONMICROSCOPY，SEM觀察其形貌，MICROCT分析支架的微結(jié)構(gòu)，材料試驗(yàn)機(jī)測試不同質(zhì)量比CSHADBM復(fù)合材料的壓縮彈性模量和壓縮強(qiáng)度。采用體外培養(yǎng)細(xì)胞的方法，將成骨前體細(xì)胞MC3T3E1直接接種到CSHADBM三維支架材料上，共培養(yǎng)1、3、5、7D，采用MTS方法繪制細(xì)胞增殖曲線，SEM、組織化學(xué)染色觀察細(xì)胞形態(tài)。選擇后期實(shí)驗(yàn)用材料及最佳加載時(shí)間。2采用有限元FINITEELEMENT，F(xiàn)E分析方法計(jì)算三維THREEDIMENSIONAL，3D支架內(nèi)部單個(gè)細(xì)胞所受到的作用力大小及相關(guān)力學(xué)參數(shù)，根據(jù)此數(shù)據(jù)來優(yōu)化工程化骨組織體外構(gòu)建的力學(xué)刺激條件，采用智能材料壓電陶瓷對細(xì)胞支架材料復(fù)合物進(jìn)行力學(xué)加載。3根據(jù)CSHADBM復(fù)合支架材料生物相容性研究結(jié)果和實(shí)驗(yàn)室前期結(jié)果，將加載條件設(shè)定為每次1H，1次D，連續(xù)6D，頻率為1HZ，工作應(yīng)變?yōu)?ΜΕ、1200ΜΕ、2800ΜΕ、7000ΜΕ，用MTS檢測細(xì)胞增殖情況，采用RTPCR方法測定特異基因骨形態(tài)發(fā)生蛋白2BONEMPHOGEICPROTEIN2，BMP2、RUNX2或稱核心結(jié)合因子CEBINDINGFACTAL，CBFA1、堿性磷酸酶ALKALINEPHOSPHATASE，ALP、Ⅰ型膠原COLLAGENTYPEⅠ，COLⅠ及骨鈣素OSTEOCALCIN，OCN的基因表達(dá)情況，采用WESTERNBLOT方法測定BMP2、RUNX2的蛋白表達(dá)情況。研究結(jié)果1通過冷凍干燥法制備出具有良好相互連通孔隙結(jié)構(gòu)100ΜM的3D材料。CSHADBM復(fù)合材料具有連通的多孔結(jié)構(gòu)，孔隙率為48％65％，材料的平均壓縮模量和最終壓縮強(qiáng)度分別為36KPA和1124KPA。在DBM一定的情況下，隨著HA量的增加，體積分?jǐn)?shù)VOLUMEFRACTION增加，支架孔壁厚度TRABECULARTHICKNESS，TBTH和支架孔隙間隙TRABECULARSEPARATION增加，但支架表面積體積比BONESURFACEVOLUMERATIO，BSBV減少，總的孔隙率TOTALPOSITY降低。2參照生理載荷范圍，根據(jù)有限元計(jì)算的支架材料內(nèi)部應(yīng)變分布，確定實(shí)驗(yàn)表觀加載應(yīng)變?yōu)?ΜΕ、1200ΜΕ、2800ΜΕ、7000ΜΕ。施加1200ΜΕ表觀加載應(yīng)變時(shí)，內(nèi)部應(yīng)變60％在1000ΜΕ2000ΜΕ之間，但主要集中在1000ΜΕ；施加2800ΜΕ表觀加載應(yīng)變時(shí)，內(nèi)部應(yīng)變60％在1000ΜΕ2000ΜΕ之間，但主要集中在2000ΜΕ；施加7000ΜΕ表觀加載應(yīng)變時(shí)，內(nèi)部應(yīng)變60％大于5000ΜΕ。四組樣品在支架孔壁處存在應(yīng)力集中現(xiàn)象。3細(xì)胞增殖曲線說明7000ΜΕ的壓縮應(yīng)變抑制細(xì)胞增殖。與靜態(tài)培養(yǎng)相比，在1200ΜΕ、2800ΜΕ的壓縮應(yīng)變作用下，細(xì)胞增殖速度快，數(shù)量增多。4RTPCR以及WESTERNBLOT結(jié)果顯示，與靜態(tài)培養(yǎng)組相比，1200ΜΕ、2800ΜΕ壓縮應(yīng)變促進(jìn)了成骨分化特異基因BMP2、RUNX2、ALP、COLⅠ及OCN的表達(dá)，2800ΜΕ壓縮應(yīng)變條件下表達(dá)最強(qiáng)，而7000ΜΕ壓縮應(yīng)變抑制其表達(dá)。研究結(jié)論1六種材料中3WT％HA材料組具有理想的孔隙結(jié)構(gòu)100ΜM。MC3T3E1成骨前體細(xì)胞易在CSHADBM三維支架材料上黏附、增殖，表明該支架材料具有良好的生物相容性。根據(jù)材料結(jié)構(gòu)參數(shù)、力學(xué)特性及細(xì)胞相容性結(jié)果確定質(zhì)量比3315組的支架材料作為后期實(shí)驗(yàn)材料。根據(jù)細(xì)胞增殖曲線確定壓縮應(yīng)變時(shí)間為6D。2壓縮應(yīng)變可促進(jìn)成骨，為研究力學(xué)作用增加骨強(qiáng)度提供了一個(gè)分子模型。合適的力學(xué)刺激作用下細(xì)胞的生物學(xué)響應(yīng)表明力學(xué)刺激在促進(jìn)骨折愈合中的重要性。研究結(jié)果還表明超生理力學(xué)刺激抑制細(xì)胞的增殖。3通過有限元分析方法得到了支架材料局部各處的應(yīng)變分布，計(jì)算出細(xì)胞在三維培養(yǎng)條件下受到的主要的力學(xué)作用，確定表觀加載應(yīng)變。合適的力學(xué)刺激1200ΜΕ、2800ΜΕ作用下促進(jìn)細(xì)胞的增殖分化，而超生理力學(xué)刺激7000ΜΕ抑制細(xì)胞增殖。由此說明利用有限元分析方法探索骨組織工程中的微觀力學(xué)環(huán)境是一種較為有效的途徑。

簡介：點(diǎn)擊查看更多CacyBP-SIP過表達(dá)對卵巢子宮內(nèi)膜異位癥在位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞生物學(xué)功能的影響.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：目的1探討SIRNA沉默PCSK6基因?qū)δz原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎CIA成纖維樣滑膜細(xì)胞FLS生物學(xué)行為的影響。2探討外源性PCSK6重組蛋白對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎RA成纖維樣滑膜細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其分子機(jī)制。方法1采用牛Ⅱ型膠原誘導(dǎo)大鼠CIA模型，取膝關(guān)節(jié)滑膜組織原代培養(yǎng)FLS；采用人工合成的大鼠PCSK6特異SIRNA特異性抑制PCSK6在CIAFLS中的表達(dá)，以NEGATIVESIRNA為陰性對照組，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染24H、36H，采用RTQPCR法檢測抑制效率，同時(shí)檢測PCSK6基因沉默后各相關(guān)基因的表達(dá)；采用MTT、TRANSWELL、細(xì)胞劃痕、流式細(xì)胞術(shù)、ELISA等方法檢測干擾PCSK6表達(dá)后對大鼠CIAFLS增殖、侵襲、遷移、細(xì)胞周期和相關(guān)炎性因子分泌的影響。2采用PCSK6重組蛋白誘導(dǎo)RAFLS，采用MTT、TRANSWELL、細(xì)胞劃痕、流式細(xì)胞術(shù)、ELISA等方法檢測PCSK6重組蛋白對RAFLS增殖、侵襲、遷移、細(xì)胞周期和凋亡以及相關(guān)炎性因子分泌的影響；采用RTQPCR法檢測PCSK6重組蛋白刺激后各相關(guān)基因的表達(dá)；采用WESTERNBLOT法檢測PCSK6重組蛋白對基質(zhì)金屬蛋白酶MMP9以及ERK、STAT3、WNT3A、NODAL、MT、NFΚBP65、NFΚBP105P50信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響。采用通路抑制劑PD98059、STATTIC、PDTC分別抑制ERK、STAT3、NFΚBP65通路，與PCSK6重組蛋白共同作用于RAFLS，利用MTT、TRANSWELL、細(xì)胞劃痕、流式細(xì)胞術(shù)、ELISA等方法檢測ERK、STAT3、NFΚBP65通路抑制劑對PCSK6重組蛋白誘導(dǎo)的RAFLS增殖、侵襲、遷移、細(xì)胞周期和凋亡以及相關(guān)炎性因子分泌的影響。結(jié)果1轉(zhuǎn)染特異性SIRNAPCSK6后，干擾組與陰性對照組相比，PCSK6MRNA水平明顯被抑制P結(jié)論1內(nèi)源性PCSK6基因沉默對CIAFLS的生物學(xué)行為具有一定抑制作用，為進(jìn)一步研究CIA發(fā)病機(jī)制奠定基礎(chǔ)。2外源性PCSK6重組蛋白對RAFLS的增殖、遷移、侵襲和炎癥因子分泌等生物學(xué)行為具有一定促進(jìn)作用；PCSK6通過參與ERK、STAT3、NFΚBP65信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路來調(diào)控RAFLS的生物學(xué)行為。PCSK6可以作為研究RA發(fā)病機(jī)制、藥物篩選以及免疫治療的新靶點(diǎn)。

簡介：摘要II摘要目的目的1、檢測OLFML2A基因在肝癌細(xì)胞株中的表達(dá)；2、構(gòu)建OLFML2A基因的RNAI慢病毒；3、檢測OLFML2ARNAI慢病毒感染肝癌BEL7404細(xì)胞后，細(xì)胞的增殖、細(xì)胞周期及凋亡的變化，初步明確OLFML2A基因?qū)Ω伟┘?xì)胞生物學(xué)行為的影響。方法方法1、構(gòu)建OLFML2A基因RNAI慢病毒；2、采用熒光顯微鏡觀察GFP綠色熒光來確定感染效率，通過RTQPCR及WESTERNBOLT等分析感染慢病毒后OLFML2A基因表達(dá)的變化；3、對數(shù)生長期的BEL7404細(xì)胞株分為兩組慢病毒空載體組和慢病毒組，分別感染慢病毒空載體和慢病毒，CELIGO法檢測肝癌BEL7404細(xì)胞的生長速度；MTT法檢測細(xì)胞倍增速率；FACS法檢測細(xì)胞增殖周期和凋亡的變化。結(jié)果結(jié)果1、成功構(gòu)建OLFML2A基因的RNAI慢病毒。2、人肝癌BEL7404細(xì)胞株成功被OLFML2A基因RNAI慢病毒感染，顯微鏡下綠色熒光，其感染效率達(dá)80；感染后OLFML2A基因MRNA水平顯著下降（P0006，P005），蛋白水平OLFML2A基因的表達(dá)明顯減少（P001），其敲減效率為686。3、BEL7404細(xì)胞感染慢病毒后相比慢病毒空載體組，慢病毒組的BEL7404細(xì)胞生長速率持續(xù)受到抑制P0001P＜005）；于細(xì)胞感染后第5天，慢病毒組G1期的細(xì)胞減少P＜005），處于S期的細(xì)胞數(shù)量無顯著變化，G2M期細(xì)胞顯著增多P＜005）；細(xì)胞感染后第3天，慢病毒組發(fā)生凋亡的細(xì)胞數(shù)量顯著增加P＜005）；MTT法檢測細(xì)胞增殖慢病毒組細(xì)胞增殖倍數(shù)明顯減小P＜005），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論結(jié)論OLFML2A基因RNAI慢病毒顯著抑制OLFML2A基因的表達(dá)，抑制人肝癌BEL7404細(xì)胞增殖，促進(jìn)其凋亡，影響其細(xì)胞周期。

簡介：目的海洋褐藻中的褐藻多糖硫酸酯具有抗凝血、抗炎癥、抗腫瘤等多重生物活性，其潛在生物功效日益受到人們的高度重視，也成為近年海洋藥物研究的熱點(diǎn)之一。本實(shí)驗(yàn)將進(jìn)一步探討褐藻多糖硫酸酯對小鼠肝癌細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移行為的影響及對正常小鼠免疫細(xì)胞的影響，并探討其抗腫瘤作用的機(jī)理。方法1采用乙醇重沉淀法進(jìn)一步提純褐藻多糖硫酸酯；采用硫酸苯酚法檢測所提樣品中的糖含量，采用DODGSON法測定硫酸基含量。2采用MTT法檢測褐藻多糖硫酸酯對HCAF肝癌細(xì)胞體外生長的影響；淋巴結(jié)體外粘附實(shí)驗(yàn)、穿膜實(shí)驗(yàn)、侵襲實(shí)驗(yàn)檢測褐藻多糖硫酸酯對小鼠肝癌細(xì)胞粘附、遷移行為的影響。3采用明膠酶譜、ELISA等方法檢測褐藻多糖硫酸酯對肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白表達(dá)水平的影響，RTPCR的方法檢測褐藻多糖硫酸酯對轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白MRNA表達(dá)水平的影響。4采用MTT法檢測褐藻多糖硫酸酯對正常小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖的影響；巨噬細(xì)胞吞噬中性紅實(shí)驗(yàn)檢測褐藻多糖硫酸酯對脾巨噬細(xì)胞吞噬活性的影響；ELISA法檢測褐藻多糖硫酸酯對脾細(xì)胞細(xì)胞因子分泌水平的影響。結(jié)果1得到褐藻多糖硫酸酯，測得其總糖含量為42％，硫酸基含量為12。2褐藻多糖硫酸酯對HCAF肝癌細(xì)胞體外生長有抑制作用，但抑制作用不明顯，褐藻多糖硫酸酯對肝癌細(xì)胞的粘附、遷移能力有明顯的抑制作用。3ELISA、明膠酶譜、WESTERNBLOT、RTPCR結(jié)果顯示，褐藻多糖硫酸酯可以下調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶MMP2的蛋白和MRNA的表達(dá)。4褐藻多糖硫酸酯對脾淋巴細(xì)胞增殖、MΦ吞噬活性及細(xì)胞因子IL6、IL10、IL12、IL18和TNFΑ的分泌均有均有促進(jìn)作用。結(jié)論褐藻多糖硫酸酯具有抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)的的活性。其抗腫瘤機(jī)理可能即通過提高機(jī)體細(xì)胞與分子免疫應(yīng)答水平，調(diào)節(jié)細(xì)胞因子分泌；又可通過直接作用于腫瘤細(xì)胞，下調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶MMP2的表達(dá)，抑制腫瘤轉(zhuǎn)移實(shí)現(xiàn)的。

簡介：目的探索小鼠甲狀腺來源間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性，比較其與骨實(shí)質(zhì)來源間充質(zhì)干細(xì)胞是否具有差異，為臨床研究自身免疫性甲狀腺炎的發(fā)病機(jī)制提供理論與實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法1、采用組織貼壁培養(yǎng)法，體外無菌分離并培養(yǎng)C57BL6小鼠甲狀腺來源間充質(zhì)干細(xì)胞（THYROIDDERIVEDMESENCHYMALSTEMCELLS，TMSCS），以小鼠骨實(shí)質(zhì)來源間充質(zhì)干細(xì)胞（BONEESSENCEDERIVEDMESENCHYMALSTEMCELLSBMSCS）作對照，通過倒置顯微鏡觀察貼壁細(xì)胞形態(tài)，然后利用不同誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)貼壁細(xì)胞向成脂肪、成骨分化，油紅O染色檢測成脂分化能力，堿性磷酸酶及VONKOSSA染色檢測成骨分化能力，QPCR檢測相關(guān)成脂肪和成骨關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)。進(jìn)一步，采用CCK8法檢測貼壁細(xì)胞生長曲線，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表型和細(xì)胞周期。2、在獲得小鼠甲狀腺來源MSCS的基礎(chǔ)上，采用淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)（LYMPHOCYTETRANSFMATIONTEST，LTT和混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)（MIXEDLYMPHOCYTEREACTION，MLR檢測MSCS對T細(xì)胞增殖的免疫抑制功能。進(jìn)一步，將甲狀腺來源MSCS與DC共培養(yǎng)，倒置顯微鏡下觀察DC形態(tài)改變，流式細(xì)胞術(shù)檢測DC表面抗原的表達(dá)，QPCR法在MRNA水平檢測促炎因子IFNΓ、TNFΑ和IL12的表達(dá)水平。3、建立異體鼠尾皮瓣移植模型，檢測甲狀腺來源MSCS體內(nèi)免疫調(diào)節(jié)及修復(fù)受損組織的能力。將小鼠甲狀腺來源MSCS通過尾靜脈輸注模型小鼠體內(nèi)，每日觀察移植皮瓣炎癥反應(yīng)程度和愈合情況，第7天行病理學(xué)檢測移植皮瓣組織淋巴細(xì)胞浸潤程度。結(jié)果1、從小鼠甲狀腺和骨實(shí)質(zhì)組織中均可培養(yǎng)出貼壁生長的成纖維樣的細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測相關(guān)細(xì)胞表型，兩種細(xì)胞均陽性表達(dá)CD29、CD140、CD105和SCA1，而不表達(dá)CD34、CD45、CD31、CD11B和MHCII。進(jìn)一步，將細(xì)胞向脂肪和骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化，結(jié)果顯示，細(xì)胞可被誘導(dǎo)成脂肪，油紅染色可見有大量脂滴出現(xiàn)，QPCR檢測可見脂肪分化關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子CEBPΑ和PPARΓ的表達(dá)；成骨誘導(dǎo)分化后，堿性磷酸酶染色可見堿性磷酸酶活性增高，VONKOSSA染色可見鈣化骨結(jié)節(jié)形成，QPCR檢測可見成骨關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子RUNX2和OSTEOCALCIN的表達(dá)，說明成功獲得小鼠甲狀腺來源MSCS。利用CCK8法檢測甲狀腺來源MSCS的生長特性，結(jié)果顯示，細(xì)胞呈S型曲線生長，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期，可見80％以上細(xì)胞分布在G0G1期提示獲得的貼壁細(xì)胞符合干細(xì)胞的生長特性。2、在獲得TMSCS的基礎(chǔ)上，針對MSCS獨(dú)特的免疫調(diào)節(jié)功能進(jìn)行LLT和MLR檢測。LTT檢測TMSCS對CONA刺激的T淋巴細(xì)胞增殖能力的影響，結(jié)果表明，TMSCS可有效抑制CONA刺激的T淋巴細(xì)胞增殖能力，且隨著TMSCS量的增加，其抑制作用顯著增強(qiáng)P＜005；利用異體淋巴細(xì)胞刺激的MLR實(shí)驗(yàn)也得到相同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，即MSCS抑制異體淋巴細(xì)胞抗原刺激的T細(xì)胞增殖能力隨著MSCS數(shù)量的增加，其抑制作用顯著增強(qiáng)P＜05。3、DC作為抗原遞呈細(xì)胞，在免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用，同時(shí)MSCS對DC功能也具有重要的調(diào)節(jié)作用。為此，我們在體外利用MSCS與DC共培養(yǎng)體系，觀察甲狀腺來源MSCS對DC功能的影響，結(jié)果顯示，與甲狀腺來源MSCS共培養(yǎng)的DC，其形態(tài)表現(xiàn)為細(xì)胞樹狀突起少而短；流式細(xì)胞儀檢測DC細(xì)胞表面抗原表達(dá)，可見CD11C、CD80、CD86和MHCII表達(dá)量均顯著下降；QPCR檢測相關(guān)促炎因子IFNΓ、TNFΑ和IL12MRNA的表達(dá)亦顯著下降P＜005。4、利用小鼠尾部皮瓣移植模型檢測甲狀腺來源MSCS的體內(nèi)免疫調(diào)節(jié)功能和組織修復(fù)能力，結(jié)果表明，TMSCS與BMSCS相似，具有修復(fù)鼠尾皮瓣損傷的能力，皮瓣損傷愈合較對照組快。病理切片結(jié)果顯示，TMSC治療小鼠皮瓣組淋巴細(xì)胞浸潤程度較對照組低，提示TMSCS可有效促進(jìn)皮瓣損傷愈合，減輕炎癥反應(yīng)。結(jié)論1、成功分離獲得小鼠甲狀腺來源MSCS，其細(xì)胞形態(tài)、免疫表型、誘導(dǎo)分化能力和細(xì)胞增殖特性均與骨實(shí)質(zhì)來源MSCS相似。2、通過體外LTT和MLR實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，小鼠TMSCS具有免疫調(diào)節(jié)能力，在體外可抑制CONA和異種抗原刺激的T淋巴細(xì)胞的增殖，且具有明顯的劑量依賴性。同時(shí)，TMSCS對抗原遞呈細(xì)胞DC的免疫功能也具有調(diào)節(jié)作用，可顯著抑制DC的成熟。3、體內(nèi)異體鼠尾皮瓣移植模型實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，TMSCS可抑制移植術(shù)后產(chǎn)生的異體免疫排斥反應(yīng)，誘導(dǎo)免疫耐受，對受損組織具有較強(qiáng)的修復(fù)能力，可以有效減輕炎癥反應(yīng)及淋巴細(xì)胞浸潤程度。上述研究結(jié)果表明，小鼠甲狀腺來源MSCS具有與骨實(shí)質(zhì)來源MSCS相似的生物學(xué)特性，為今后深入探討自身免疫性甲狀腺炎的發(fā)病機(jī)制提供可靠的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

簡介：21博士學(xué)位論文博士學(xué)位論文MARVELD1影響肺癌細(xì)胞基本生物學(xué)特征的分子機(jī)制THEEFFECTOFMARVELD1ONMOLECULARMECHANISMOFBASICBIOLOGYACTERISTICSINLUNGCARCINOMA姚媛菲姚媛菲哈爾濱工業(yè)大學(xué)哈爾濱工業(yè)大學(xué)2015年12月23CLASSIFIEDINDEXQ71UDC57721DISSERTATIONFTHEDOCTDEGREEINENGINEERINGTHEEFFECTOFMARVELD1ONMOLECULARMECHANISMOFBASICBIOLOGYACTERISTICSINLUNGCARCINOMACIDATEYAOYUANFEISUPERVISPROFLIYUACADEMICDEGREEAPPLIEDFDOCTOFENGINEERINGSPECIALTYBIOMEDICALENGINEERINGAFFILIATIONSCHOOLOFLIFESCIENCETECHONOGYDATEOFDEFENCEDECEMBER2015DEGREECONFERRINGINSTITUTIONHARBININSTITUTEOFTECHNOLOGY

簡介：目的研究少突膠質(zhì)細(xì)胞譜系基因髓鞘堿性蛋白GENESOFTHEOLIGODENDROCYTELINEAGEMYELINBASICPROTEIN，GOLLIMBP對T細(xì)胞胞內(nèi)CA2及凋亡、增殖能力的影響，初步嘗試建立口腔扁平苔蘚ALLICHENPLANUS，OLP動(dòng)物模型，從而為進(jìn)一步研究OLP等免疫相關(guān)性疾病的病因及發(fā)病機(jī)制打下基礎(chǔ)。方法GOLLIMBP過表達(dá)慢病毒載體感染JURKAT細(xì)胞，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCRQUANTITATIVEREALTIMEPCR，QPCR和免疫蛋白印記技術(shù)WESTERNBLOT，WB分析GOLLIMBPMRNA及蛋白表達(dá)情況CCK8法和ANNEXINⅤFITC7AAD雙熒光染色分別檢測JURKAT細(xì)胞增殖能力、凋亡能力采用鈣離子熒光探針FLUO3檢測JURKAT細(xì)胞內(nèi)CA2濃度變化GOLLIMBP過表達(dá)慢病毒載體注射于敘利亞金黃地鼠頰囊黏膜下，HE染色觀察敘利亞金黃地鼠口腔黏膜組織結(jié)構(gòu)改變免疫組化法觀察敘利亞金黃地鼠口腔黏膜組織中增殖細(xì)胞核抗原PROLIFERATINGCELLNUCLEARANTIGEN，PCNA的表達(dá)TUNEL法觀察敘利亞金黃地鼠口腔黏膜組織細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果GOLLIMBP過表達(dá)慢病毒載體成功感染JURKAT細(xì)胞，感染后JURKAT細(xì)胞GOLLIMBPMRNA及蛋白表達(dá)升高GOLLIMBPOE組JURKAT細(xì)胞增殖能力顯著下降P＜001，凋亡能力也明顯下降P＜001GOLLIMBPOE組鈣離子內(nèi)流顯著減小P＜001GOLLIMBP未能誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物口腔黏膜產(chǎn)生肉眼可見的OLP病損變化HE染色未見OLP特征性組織學(xué)結(jié)構(gòu)改變7天實(shí)驗(yàn)組上皮層細(xì)胞凋亡率與對照組無明顯差異P＞005，14天實(shí)驗(yàn)組上皮層細(xì)胞凋亡率低于對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜0057天及14天實(shí)驗(yàn)組上皮層細(xì)胞增殖率低于對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005。結(jié)論GOLLIMBP過表達(dá)可抑制JURKAT細(xì)胞增殖、凋亡能力和抑制CA2內(nèi)流，且能夠調(diào)控?cái)⒗麃喗瘘S地鼠頰囊黏膜上皮細(xì)胞增殖和凋亡，但未能成功建立OLP動(dòng)物模型。

簡介：授予單位代碼10089學(xué)號或申請?zhí)?0142003中國圖書分類號R73534學(xué)術(shù)學(xué)術(shù)學(xué)位學(xué)位DNMT3A在結(jié)直腸癌組織中的在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)表達(dá)及其及其對HCT116細(xì)胞株細(xì)胞株生物生物學(xué)功能的影響學(xué)功能的影響研究生唐宇杰唐宇杰導(dǎo)師師張學(xué)明張學(xué)明教授教授專業(yè)業(yè)外科學(xué)外科學(xué)二級學(xué)院二級學(xué)院唐山工人醫(yī)院唐山工人醫(yī)院2017年3月碩士學(xué)位論文HEBEIMEDICALUNIVERSITY目錄中文摘要1英文摘要3英文縮寫6研究論文DNMT3A在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及其對HCT116細(xì)胞株生物學(xué)功能的影響前言7材料與方法7結(jié)果16附圖18附表21討論23結(jié)論26參考文獻(xiàn)27綜述結(jié)直腸癌的表觀遺傳學(xué)31致謝57個(gè)人簡歷58

簡介：JJIIIIIIIIIIIIIIIIIIⅢY3336124分類號R71174密級公開單位代碼10422‘學(xué)號2014120095O_●、J、塞夠嘻矽_孫。夕≮JBSHANDONGUNIVERSITY博士學(xué)位論文DISSERTATIONFORDOCTORALDEGREE’專業(yè)學(xué)僮論文題目I科羅索酸誘導(dǎo)富頸瘸綱髓瀾亡的釜黼學(xué)撬制研究THESTUDYOFAPOPTOSISBINOG，IICAL’M蛐A一N。ISMOFCOR，OSOLIE。?！啊甇。，ACIDTOCERVI髓LCAREINOMACELLS、作者姓’名培養(yǎng)單位專業(yè)名蠼旦赫4習(xí)、●一‘一Ⅺ，、徐永黼山東寒擎臨床醫(yī)嚳賦群二二坦趣肇～。二。師4Z卅TEL赫蛾7。?；述蔍墨A。；2叢J墨K二合作導(dǎo)師2Q喜7年“23日原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。論文作者簽名至盤襤日期70F7一F|弓關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解山東大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，一允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)山東大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定論文作者簽名三塑茸導(dǎo)師簽名幽日期皇型鄉(xiāng)

簡介：樹突狀細(xì)胞DENDRITICCELLS，DCS是目前所知的機(jī)體內(nèi)功能最強(qiáng)的專職性APC，能夠有效地?cái)z取、加工及提呈抗原，通過其表面B7、MHCⅡ和ICAM1等分子的表達(dá)，刺激CD4T細(xì)胞的活化增殖，促進(jìn)IL2的分泌，在雙信號刺激下，最終活化CD8T細(xì)胞，產(chǎn)生免疫應(yīng)答效應(yīng)。臍血中富含的CD34造血祖細(xì)胞與骨髓和外周血相比，數(shù)量更多，具有更強(qiáng)的增殖潛能，是DCS的理想來源。體外，不同細(xì)胞因子聯(lián)合可誘導(dǎo)CD34造血祖細(xì)胞分化為DCS，在腫瘤免疫、移植免疫和抗感染免疫等方面發(fā)揮效應(yīng)。臍血CD34造血祖細(xì)胞來源的DCS分化發(fā)育和成熟經(jīng)歷了一系列復(fù)雜而精細(xì)的調(diào)節(jié)過程，探討DCS分化發(fā)育、成熟過程的調(diào)節(jié)因素及其生物學(xué)功能，將有助于開展以DCS為佐劑的生物治療。本研究優(yōu)化了體外擴(kuò)增、誘導(dǎo)CD34造血祖細(xì)胞產(chǎn)生DCS的方案，首次系統(tǒng)分析臍血CD34造血祖細(xì)胞來源DCS分化成熟過程中共刺激分子的表達(dá)及其相互作用，比較CD40、TNFΑ和41BBL三條信號途徑對DCS分化成熟和生物學(xué)功能的影響，探討臍血貼壁細(xì)胞來源DCS相關(guān)抗原和共刺激分子的表達(dá)及其生物學(xué)功能，以期擴(kuò)大DCS的來源，通過干預(yù)CD40CD40L、41BB41BBL、PD1PDL1PDL2等幾對重要的共刺激分子來調(diào)節(jié)臍血衍生的DCS生物學(xué)功能，為腫瘤免疫和移植免疫的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。第一部分臍血CD34造血祖細(xì)胞體外誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞的優(yōu)化方案第二部分臍血CD34造血祖細(xì)胞來源樹突狀細(xì)胞的生物學(xué)特性第三部分臍血貼壁細(xì)胞來源的樹突狀細(xì)胞共刺激分子表達(dá)及其

簡介：點(diǎn)擊查看更多腸易激綜合征大鼠模型結(jié)腸樹突狀細(xì)胞生物學(xué)行為體外研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：目的探討MIR150在早期內(nèi)皮祖細(xì)胞及晚期內(nèi)皮祖細(xì)胞的表達(dá)含量；探討MIR150對EPCS的分化、血管形成等生物學(xué)作用；探討MIR150是否通過調(diào)控靶基因CMYB來調(diào)控EPCS的分化。方法1密度梯度離心法獲取人外周血來源的單個(gè)核細(xì)胞（PBMCS），借助差速貼壁法和EPCS專用培養(yǎng)基定向誘導(dǎo)培養(yǎng)EPCS并培養(yǎng)1428天，光學(xué)顯微鏡下觀察EPCS的細(xì)胞形態(tài)變化，應(yīng)用流式細(xì)胞儀、乙酰低密度脂蛋白、與荊豆凝集素吞噬實(shí)驗(yàn)鑒定細(xì)胞表型，實(shí)時(shí)定量PCR測定MIR150在早期內(nèi)皮祖細(xì)胞及晚期內(nèi)皮祖細(xì)胞中的表達(dá)含量；2MIR150的模擬物和抑制物分別轉(zhuǎn)染EEPCS和LEPCS，檢測MIR150對EEPCS和LEPCS的分化、增殖、成血管能力的影響；3探查MIR150的可能靶基因CMYB，PCR技術(shù)檢測MRNA的表達(dá)；WESTERNBLOT檢測靶蛋白的表達(dá)變化。結(jié)果1密度梯度離心法獲得人外周血來源MNCS經(jīng)體外培養(yǎng)后，表達(dá)相應(yīng)的內(nèi)皮細(xì)胞特異抗原，包括CD31、CD133、VWF、VEGFR2，能夠吞噬DILACLDL與UEA1結(jié)合，具有增殖和成血管能力，細(xì)胞純度較高；2使用MIR150模擬物和抑制物轉(zhuǎn)染EPCS48小時(shí)后，證實(shí)MIR150能夠調(diào)控EEPCS和LEPCS的表面特異性抗原的表達(dá)水平，上調(diào)MIR150可以促進(jìn)EEPCS的分化；下調(diào)MIR150可以降低LEPCS的成血管及增殖能力；3MIR150表達(dá)上調(diào)后EPCS中CMYB蛋白合成減少（P結(jié)論MIR150在EEPCS和LEPCS表達(dá)含量不同；調(diào)控MIR150表達(dá)能夠影響EPCS的增殖、分化、成血管能力，CMYB可能是MIR150的靶基因。

簡介：分類號R7255密級單位代碼10422博士學(xué)位論文DISSERTATIONFORDOCTORALDEGREE論文題目白血病來源LSCS和CD耵淋巴細(xì)胞對BMMSCS生物學(xué)特性的影響及其機(jī)制研究THEROLEANDMECHANISM0FLEUKEBIADERLVEDLSOSANDCD4TCELLSINB10LOGYBEHAVL0骼0FBMMSCS作者培養(yǎng)專業(yè)指導(dǎo)合作姓名單位名稱教師導(dǎo)師于臻醫(yī)學(xué)院兒科學(xué)血液鞠秀麗教授2016年4月29日∞曬～番一學(xué)力一≯樂；LD聲N，∥姒山東大學(xué)博士學(xué)位論文目錄中文摘要1英文摘要7符號說明13前言15第一部分白血病干細(xì)胞對BMMSC生物學(xué)特性的影響及其機(jī)制研究20材料和方法20結(jié)果30討論一32第二部分AML患者CD4T淋巴細(xì)胞對BMMSC形態(tài)特征和增殖的影響及其機(jī)制研究39材料和方法39結(jié)果45討論。47結(jié)論54附圖表55參考文獻(xiàn)66綜述80致謝91攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄～92附英文論文93

簡介：目的探討沉默EN2對人腎小管上皮細(xì)胞（HK2細(xì)胞株）生物學(xué)行為的影響。方法利用慢病毒載體介導(dǎo)沉默人腎小管上皮細(xì)胞HK2細(xì)胞株EN2基因的表達(dá)，轉(zhuǎn)染并篩選穩(wěn)定低表達(dá)EN2基因的人腎小管上皮細(xì)胞HK2細(xì)胞株，以LVSHEN2為實(shí)驗(yàn)組、LVSHCON為空載組、CONTROL為空白對照組。RTQPCR和WESTERNBLOT分別檢測EN2MRNA和蛋白的表達(dá)水平，MTT檢測HK2細(xì)胞增殖能力，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期和凋亡，TRANSWELL實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞侵襲能力，細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞遷移能力。結(jié)果設(shè)計(jì)與EN2互補(bǔ)的DNA序列，合成SHRNAEN2并克隆到慢病毒載體，同時(shí)設(shè)計(jì)非特異性SHRNA生成的載體作為陰性對照。轉(zhuǎn)染HK2細(xì)胞后，篩選獲得穩(wěn)定低表達(dá)EN2基因的HK2細(xì)胞株。RTQPCR分析顯示EN2MRNA在LVSHCON組2ΔΔCT107±007CONTROL組2ΔΔCT1±014中的表達(dá)分別是LVSHEN2組2ΔΔCT058±002的19倍和17倍。WESTERNBLOT檢測各組灰度值LVSHEN2組257665。LVSHCON組161926，CONTROL組147885。提示轉(zhuǎn)染成功。MTT法分析結(jié)果采用單因素方差分析顯示三組細(xì)胞OD值差別（F478。P001）有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與兩對照組細(xì)胞比較，LVSHEN2組細(xì)胞OD值升高，提示抑制EN2蛋白可促進(jìn)人腎小管上皮細(xì)胞HK2細(xì)胞的增殖活性。流式細(xì)胞儀檢測顯示LVSHEN2組相對于兩對照組，細(xì)胞凋亡率下降。LVSHEN2實(shí)驗(yàn)組、LVSHCON空載組、CONTROL空白對照組HK2細(xì)胞凋亡比例分別為979％，2498和249。與兩對照組細(xì)胞比較，LVSHEN2組細(xì)胞早期凋亡率和晚期凋亡率均下降，提示抑制EN2基因表達(dá)可減少HK2細(xì)胞凋亡。細(xì)胞穿膜實(shí)驗(yàn)顯示LVSHEN2實(shí)驗(yàn)組、LVSHCON空載組、CONTROL空白對照組HK2細(xì)胞穿膜細(xì)胞數(shù)分別為185±562，05±112和05±076，單因素方差分析顯示LVSHEN2實(shí)驗(yàn)組穿膜細(xì)胞數(shù)與兩對照組之間不同（F1935。P000），說明下調(diào)EN2蛋白可提高人腎小管上皮細(xì)胞HK2的侵襲能力。細(xì)胞劃痕試驗(yàn)各組0H，6H，12H和24H劃痕寬度采用單因素方差分析，結(jié)果顯示各組細(xì)胞遷移能力差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P005）。結(jié)論下調(diào)HK2細(xì)胞株EN2基因的表達(dá)促進(jìn)HK2細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞凋亡、提高細(xì)胞侵襲能力對細(xì)胞遷移能力無明顯影響。