簡介：目的VPS24VACUOLARPROTEINSTING24是轉(zhuǎn)運必需內(nèi)吞體分選復(fù)合物ENDOSOMALSTINGCOMPLEXREQUIREDFTRANSPT，ESCRT中ESCRTⅢ復(fù)合物的重要組成部分。ESCRTS的主要功能包括，介導(dǎo)泛素化的內(nèi)吞體膜蛋白分選，形成多泡體MULTIVESICULARBODY，MVBS，并轉(zhuǎn)運入溶酶體進行降解，從而調(diào)控受體信號通路。它也能夠調(diào)控胞質(zhì)分裂、病毒包裝、出芽及自噬等。ESCRTS由四類具有不同生物學(xué)功能的蛋白復(fù)合物構(gòu)成，即ESCRTS0，Ⅰ，Ⅱ，和Ⅲ，它們通過精密的分工協(xié)作識別并分選泛素化膜受體1。ESCRTⅢ是一種動態(tài)多聚體，主要由四種核心亞基構(gòu)成，即VPS20，SNF7，VPS24和VPS22。在MVBS形成過程中，VPS24與ESCRTS的其他成員共同作用，使囊泡膜內(nèi)化入腔，并實現(xiàn)腔內(nèi)囊泡與內(nèi)體膜的最終分離3，從而介導(dǎo)受體信號通路的調(diào)控。Ⅱ型肺泡上皮細胞（TYPEⅡALVEOLAREPITHELIALCELL，AEⅡ）是末梢肺組織中的重要細胞系，具有合成、分泌表面活性物質(zhì)PS，增殖分化以補充AEⅠ，及參與免疫調(diào)控等功能。體外研究表明，原代分離培養(yǎng)的AEⅡ，其特征分子SPC的表達和板層小體等會隨著時間的推移而逐漸降低，轉(zhuǎn)分化為AEⅠ4，5。而在體內(nèi)，AEⅡ是AEⅠ的祖細胞，隨著肺泡上皮的發(fā)育和分化，SPC的表達升高。由此可知，內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)與維持AEⅡ分泌PS有關(guān)。板層小體是AEⅡ合成分泌儲存PS的主要結(jié)構(gòu)，而多泡體是板層小體的前體6。也有文獻指出，ESCRTS對哺乳動物上皮細胞的極性維持具有重要作用，敲除ESCRTS成員TSG101可使上皮細胞失去極性7。因此，ESCRTS可能在末梢肺組織穩(wěn)態(tài)維持中具有重要作用。MLE12MOUSELUNGEPITHELIAL12細胞是AEⅡ的近似細胞系，以其為研究對象，用以探究AEⅡ在末梢肺組織穩(wěn)態(tài)維持中的重要作用。本課題以探尋VPS24的功能為核心，借助體外重組技術(shù)構(gòu)建表達載體，建立高表達VPS24的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞系，并初步分析高表達VPS24對MLE12細胞生物學(xué)特性的改變。方法1、重組質(zhì)粒的構(gòu)建2、細胞培養(yǎng)3、基因轉(zhuǎn)染及穩(wěn)定篩選4、WESTERNBLOTTING5、碘化丙啶染色6、REALTIMEPCR7、RTPCR8、統(tǒng)計分析結(jié)果1、成功構(gòu)建外源性高表達VPS24的重組質(zhì)粒將小鼠的VPS24全長編碼區(qū)基因克隆入PCDNA31MYCHISB真核表達載體2、成功建立外源性高表達VPS24的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞系將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入MLE12細胞并進行穩(wěn)定篩選及鑒定，得到外源性高表達VPS24的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞系M12V243、外源性高表達VPS24能夠增強ESCRTS行使胞質(zhì)分裂的能力流式細胞技術(shù)檢測細胞周期可知，VPS24的過表達能夠增強ESCRTS行使胞質(zhì)分裂的能力，消解多倍體。4、外源性高表達VPS24顯著降低ECADHERINMRNA表達水平隨機選取的10個M12V24陽性單克隆中，9個單克隆的ECADHERINMRNA表達水平均出現(xiàn)明顯的降低，提示VPS24的過表達可能影響MLE12細胞的分化。5、外源性高表達VPS24不能顯著增強BLEOMYCIN誘發(fā)EMT1BLEOMYCIN處理細胞后，在我們觀察的時間段內(nèi)，細胞形態(tài)均發(fā)生一定改變，并未出現(xiàn)明顯的上皮細胞表型變?yōu)殚g質(zhì)細胞表型2REALTIMEPCR檢測可知，細胞并未發(fā)生VIMENTINMRNA表達水平的明顯升高6、TUNICAMYCIN誘發(fā)ERSTRESS體外模型的確立1通過活細胞計數(shù)，確定TUNICAMYCIN誘發(fā)ERSTRESS的最佳濃度為6NGML2通過檢測BIPMRNA表達水平及XBP1剪切情況，確定TUNICAMYCIN誘發(fā)ERSTRESS最佳時間為24小時7、ERSTRESS及VPS24過表達與ERSTRESS聯(lián)合作用均不能誘發(fā)EMT1在正常MLE12細胞培養(yǎng)條件下，經(jīng)TUNICAMYCIN處理后，細胞并未由上皮細胞表型變?yōu)殚g質(zhì)細胞表型2REALTIMEPCR檢測可知，細胞并未發(fā)生VIMENTINMRNA表達水平的明顯升高結(jié)論外源性高表達VPS24能夠增強ESCRTS行使胞質(zhì)分裂的能力，顯著降低MLE12細胞ECADHERIN表達水平在現(xiàn)有條件下，高表達VPS24不能使MLE12細胞對促纖維化試劑BLEOMYCIN更為敏感ERSTRESS與其聯(lián)合作用，不能促進MLE12細胞發(fā)生EMT轉(zhuǎn)化，表明外源性高表達VPS24可能通過下調(diào)ECADHERIN表達水平介導(dǎo)MLE12細胞的分化調(diào)控。

簡介：目的研究ADAMDEC1（解聚素金屬蛋白酶家族癸蛋白1）對人腦膠質(zhì)瘤U87細胞的增殖、黏附、侵襲、遷移和凋亡等細胞生物學(xué)行為的影響。方法1從上海吉凱基因公司提供的三種可能有效的慢病毒（分別攜帶TACCACGAAACCTGAGAACAT、CTGATAAGAAGCTTTGTGTTT、TCCCAGGAATCTTGTGAATTT三個基因片段）中篩選能夠下調(diào)U87細胞ADAMDEC1表達的慢病毒1分別用三種慢病毒感染U87細胞，篩選最適復(fù)感染指數(shù)值MOI，通過觀察GFP熒光的表達情況來判定轉(zhuǎn)染效率2采用REALTIMEPCR法分別檢測三種慢病毒感染后U87細胞ADAMDEC1MRNA的表達情況，并對三種慢病毒感染后U87細胞ADAMDEC1MRNA的表達差異進行分析比較，篩選出能夠下調(diào)U87細胞ADAMDEC1表達的慢病毒2實驗組ADAMDEC1RNAI人腦膠質(zhì)瘤U87細胞通過用篩選出的能夠下調(diào)U87細胞ADAMDEC1表達的慢病毒在最適復(fù)感染指數(shù)的條件下進行感染來下調(diào)ADAMDEC1的表達，對照組CONTROLRNAI用陰性對照慢病毒（攜帶TTCTCCGAACGTGTCACGT基因片段）在最適復(fù)感染指數(shù)的條件下進行感染，采用WESTERNBLOT法檢測穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的U87細胞ADAMDEC1蛋白的定性、定量表達情況，并對轉(zhuǎn)染后U87細胞ADAMDEC1蛋白的表達差異進行分析比較3采用CCK8法檢測兩組細胞增殖及黏附能力的差異，并對差異進行分析比較4采用TRANSWELL法檢測兩組細胞侵襲及遷移能力的差異，并對差異進行分析比較5采用流式細胞技術(shù)檢測兩組細胞凋亡情況的差異，并對差異進行分析比較。實驗數(shù)據(jù)采用SPSS190統(tǒng)計軟件進行分析，計量數(shù)據(jù)以X±S表示，兩組間差異采用T檢驗分析，P＜005為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果1通過觀察GFP熒光的表達情況可得知上海吉凱基因公司提供的攜帶特異性基因片段的慢病毒能夠感染人腦膠質(zhì)瘤U87細胞，且最適復(fù)感染指數(shù)為202REALTIMEPCR結(jié)果顯示攜帶TCCCAGGAATCTTGTGAATTT基因片段的慢病毒感染人腦膠質(zhì)瘤U87細胞后，與對照組相比，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后的U87細胞的ADAMDEC1RNAIMRNA表達水平均明顯降低P＜001，即TCCCAGGAATCTTGTGAATTT基因片段為下調(diào)ADAMDEC1基因表達的有效片段3CCK8檢測結(jié)果顯示攜帶有效基因片段的慢病毒感染人腦膠質(zhì)瘤U87細胞后，與對照組相比，下調(diào)ADAMDEC1表達后的U87細胞的增殖能力下降P＜005，黏附能力明顯受到抑制P＜0014TRANSWELL檢測結(jié)果顯示攜帶有效基因片段的慢病毒感染人腦膠質(zhì)瘤U87細胞后，與對照組相比，下調(diào)ADAMDEC1表達后的U87細胞的侵襲和遷移能力均明顯下降P＜0015流式細胞術(shù)檢測結(jié)果顯示攜帶有效基因片段的慢病毒感染人腦膠質(zhì)瘤U87細胞后，與對照組相比，下調(diào)ADAMDEC1表達能夠促進U87細胞的凋亡P＜001。結(jié)論在體外細胞培養(yǎng)試驗中，下調(diào)ADAMDEC1表達能夠顯著抑制U87細胞的增殖、黏附、侵襲、遷移能力，促進U87細胞的凋亡。

簡介：ATHESISDISSERTATIONSUBMITTEDTOZHENGZHOUUNIVERSITYFORTHEDEGREEOFDOCTORSILENCINGOFFGFR4COULDINFLUENCETHEBIOLOGICALFUNCTIONOFGASTRICCANCERCELLSANDITSTHERAPEUTICVALUEBYXIAORUILIUSUPERVISORPROFQUANCHENGKANDIGESTIVESYSTEMDEPARTMENTTHEFIRSTAFFILIATEDHOSPITALOFZHENGZHOUUNIVERSITYSEPTEMBER2015摘要成纖維細胞生長因子受體4基因沉默對胃癌生物學(xué)功能影響的研究及其臨床意義摘要胃癌是全世界最常見的惡性腫瘤之一，在亞洲尤其是在我國的發(fā)病率甚高。在我國，早期胃癌的發(fā)現(xiàn)率約為20％，遠低于韓國和日本等其他亞洲國家。胃癌的發(fā)現(xiàn)常在癌癥晚期或者因轉(zhuǎn)移性胃癌而被發(fā)現(xiàn)。在我國胃癌多為進展期，并且預(yù)后比較差，常需要通過手術(shù)治療為主、放化療等為輔的綜合治療。目前，胃癌的輔助化療、姑息化療的方案很多，如順鉑氟尿嘧啶、氟尿嘧啶奧沙利鉑、DCF、ECF等，其中以氟尿嘧啶為基礎(chǔ)化療藥物。由于胃癌發(fā)病機制的復(fù)雜性和不確定性，目前胃癌治療的生存時間并不理想，無論是美國的NCCN指南還是歐洲腫瘤醫(yī)學(xué)協(xié)會ESMO均沒有治療胃癌的標(biāo)準(zhǔn)方案。盡管近年來靶向藥物在胃癌研究領(lǐng)域非常熱門，但是由于胃癌的發(fā)生發(fā)展一個是具有多因素、多階段和多種基因共同參與的過程，其發(fā)病機制并不清楚；目前除了赫塞丁外，多數(shù)藥物如貝伐珠單抗、愛必妥等藥物在胃癌研究中并未取得突破。所以尋找新的靶基因，闡明胃癌的發(fā)生發(fā)展機制對有效治療胃癌有著重要的作用。由近年來靶向藥物的相關(guān)研究可以看出，EGFR、VEGF等相關(guān)信號通路藥物在肺癌、乳腺癌等一些惡性腫瘤治療中取得了突破性進展，但是這些研究對胃癌治療并無作用。因此尋求新的治療靶點是胃癌治療的一大任務(wù)。近年來，對于FGFRFIBROBLASTGROWTHFACTORRECPTOR的研究日益增多，成纖維細胞生長因子受體FGFRS是免疫球蛋白基因超家族成員，分布在多種細胞膜上，其中以FGFR4多肽性位點GLY388ARG研究最多。FGFR4基因編碼的蛋白是一類跨膜酪氨酸激酶受體，為分布在多種細胞上的膜蛋白。它對細胞的增殖、分化、創(chuàng)傷修復(fù)、血管生成、肌肉形成以及生長發(fā)育等都起著極其重要的作用。有研究發(fā)現(xiàn)，該種蛋白在多種腫瘤中均有表達異常，如胰腺癌、乳腺癌等，因此FGFR家族在惡性腫瘤診治方面有著廣闊的應(yīng)用前景。但迄今為止，F(xiàn)GFR4在胃癌中的研究很少，并且研究不夠深入。一些報道顯示BGJ398與FGFR家族有很好的親和力和選擇性，并且BGJ398

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簡介：分類號分類號學(xué)號學(xué)號D201278054學(xué)校代碼學(xué)校代碼10487密級密級博士學(xué)位論文博士學(xué)位論文HBV誘導(dǎo)誘導(dǎo)IL23、IP10表達對肝癌細胞生物表達對肝癌細胞生物學(xué)行為的影響及其機制研究學(xué)行為的影響及其機制研究學(xué)位申請人學(xué)位申請人蔣晴蔣晴學(xué)科專業(yè)學(xué)科專業(yè)免疫學(xué)免疫學(xué)指導(dǎo)教師指導(dǎo)教師沈關(guān)心教授雷萍副教授沈關(guān)心教授雷萍副教授答辯日期答辯日期2015年5月√獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是我個人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除文中已標(biāo)明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。對本文的研究做出貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名日期2015年5月日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)華中科技大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密□，在______年解密后適用本授權(quán)書。本論文屬于不保密□。（請在以上方框內(nèi)打“√”）學(xué)位論文作者簽名指導(dǎo)教師簽名日期2015年5月日日期2015年5月日

簡介：點擊查看更多綿羊胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層細胞中enJSRV囊膜蛋白的細胞生物學(xué)作用.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：目的研制不同分子量聚富馬酸酯氧化石墨烯水凝膠，明確其組成對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞增殖及向成骨細胞分化的作用規(guī)律。方法低聚乙二醇富馬酸酯通過氧化還原基團引發(fā)系統(tǒng)產(chǎn)生交聯(lián)，制備出4種分子量的低聚乙二醇富馬酸酯水凝膠，對水凝膠的成膠時間以及溶脹和降解性能進行檢測。將骨髓間充質(zhì)干細胞種植到4種分子量的水凝膠中，實驗分為4組，均在成骨培養(yǎng)液中誘導(dǎo)13周，通過組織學(xué)染色（蘇木精伊紅染色和茜素紅染色）和免疫熒光染色檢測水凝膠材料對骨髓間充質(zhì)干細胞形態(tài)的影響以及成骨分化的效果。通過物理共混方式將氧化石墨烯摻雜在低聚乙二醇富馬酸酯中，制備低聚乙二醇富馬酸酯氧化石墨烯復(fù)合水凝膠，并對其理化性能進行評價。后將骨髓間充質(zhì)干細胞包裹其中共培養(yǎng)，成骨誘導(dǎo)3、7、14和21D后，經(jīng)蘇木精伊紅染色、VONKOSSA染色以及茜素紅染色和免疫熒光染色檢測復(fù)合水凝膠對骨髓間充質(zhì)干細胞形態(tài)的影響以及成骨分化的效果。結(jié)果隨著水凝膠分子量的增加，成膠時間變短，凝膠的溶脹度明顯增加，且隨著時間的推移，水凝膠分子量越大，降解速率越快，即水凝膠的降解速率與分子量成正比。毒性實驗結(jié)果表明低聚乙二醇富馬酸酯水凝膠具有良好的生物相容性。對不同分子量的水凝膠支架材料包裹細胞進行組織學(xué)與免疫熒光染色，得出結(jié)果，細胞經(jīng)誘導(dǎo)后，在具有適當(dāng)溶脹與降解特性的分子量3K和10K水凝膠中所形成的礦化結(jié)節(jié)數(shù)量顯著多于在其它兩種分子量中的結(jié)節(jié)數(shù)，說明有利于細胞的增殖與分化。通過對包裹有細胞的低聚乙二醇富馬酸酯氧化石墨烯復(fù)合水凝膠在不同時間點（3、7、14和21D）進行組織學(xué)染色及免疫熒光染色，發(fā)現(xiàn)細胞在復(fù)合水凝膠內(nèi)良好地生長和增殖，隨著成骨誘導(dǎo)時間的延長，礦化結(jié)節(jié)以及成骨基因表達量逐漸升高，且相比于單純低聚乙二醇富馬酸酯水凝膠，低聚乙二醇富馬酸酯氧化石墨烯復(fù)合水凝膠組更能促進骨髓問充質(zhì)干細胞向成骨細胞分化。結(jié)論低聚乙二醇富馬酸酯水凝膠對骨髓間充質(zhì)干細胞具有良好的生物相容性，且3K與10K的水凝膠對細胞的成骨分化有一定的良性調(diào)節(jié)作用低聚乙二醇富馬酸酯氧化石墨烯復(fù)合水凝膠促進細胞增殖，并誘導(dǎo)其向成骨分化，是良好的骨組織工程支架材料，在骨組織工程中具有潛在的應(yīng)用前景。

簡介：第一部分入骨髓間充質(zhì)干細胞體外擴增后的生物學(xué)特性及聯(lián)合造血干細胞移植治療血液病的研究目的體外擴增源于人骨髓的間充質(zhì)干細胞MSCS，鑒定其生物學(xué)特性，及探討其聯(lián)合造血干細胞移植治療血液病的可行性和安全性。方法體外擴增來自16例健康供者及4例經(jīng)過化療的惡性血液病患者的骨髓單個核細胞。擴增后的細胞經(jīng)免疫表型檢測、成骨和成脂肪誘導(dǎo)、染色體分析、衰老相關(guān)性Β半乳糖苷酶染色和與混合淋巴細胞共培養(yǎng)，進一步鑒定其是否為臨床所需的MSCS。體外擴增后的MSCS聯(lián)合造血干細胞共移植治療血液病患者自體移植5例、HLA全相合異基因移植15例、HLA半相合親緣供者非去T細胞移植2例，觀察輸注反應(yīng)和移植后臨床特征。結(jié)果①從256士51ML骨髓來自16例正常供者樣本中成功擴增得約182士038106KG受者體重MSCS，均體外培養(yǎng)3～4代。其免疫表型為CD73、CD90、CD105陽性，CD34、CD45，CD38、CD10、CD20、CD33、HLADR陰性，純度達95％以上；具有成骨和成脂肪分化能力，可抑制MLRS中的淋巴細胞增殖，染色體核型正常，衰老相關(guān)性Β半乳糖苷酶染色絕大多數(shù)細胞呈陰性、少數(shù)呈弱陽性。②從4例化療后的惡性血液病患者3例NHL，1例ANLL骨髓中分離培養(yǎng)獲得的MSCS經(jīng)擴增3～4代后獲得MSCS為193士057106KG。其各項生物學(xué)特征與正常供者骨髓來源的MSCS一致。③5例進行自體外周血干細胞移植的惡性血液病患者無論是輸注自體的MSCS4例還是異體的MSCS1例，MSCS來自健康供者，無輸注不良反應(yīng)。且患者均造血重建迅速，無嚴重并發(fā)癥，已隨訪45～70月。④12例HLA全相合同胞供者移植患者輸注來源于同一供者骨髓的MSCS無輸注不良反應(yīng)所有患者造血重建成功，移植后一月均呈100％供者型造血。2例1667％出現(xiàn)Ⅱ～Ⅳ度AGVHD，2例1667％出現(xiàn)廣泛性CGVHD。4例出現(xiàn)CMV感染，均治愈。有7例已隨訪29～57月，5例死亡。⑤3例HLA半相合親緣供者非去T細胞移植患者輸注來源于同一供者骨髓的MSCS無輸注不良反應(yīng)所有患者造血重建成功，移植后一月均呈100％供者型造血。2例因預(yù)防或治療疾病復(fù)發(fā)予DLI后才發(fā)生Ⅳ度AGVHD和廣泛型CGVHD。另1例僅發(fā)生Ⅰ度急性GVHD和局限性慢性GVHD。2例現(xiàn)已分別隨訪了53月和43月，1例死亡。結(jié)論體外擴增人骨髓中貼壁生長的細胞3～4代后經(jīng)免疫分型檢測和兩系分化誘導(dǎo)符合MSCS，且足夠數(shù)量、純度高、核型正常、幾乎沒有老化，可應(yīng)用于臨床。在3種造血干細胞移植模式中，給患者輸注體外擴增的BMMSCS，均是安全可行的要明確BMMSCS輸注對于移植后造血重建、免疫重建、GVHD的影響，還需要更大樣本量和將患者分組統(tǒng)計分析。第二部分真性紅細胞增多癥骨髓間充質(zhì)干細胞的分離培養(yǎng)及其功能特性的研究目的分離、培養(yǎng)真性紅細胞增多癥PV患者骨髓間充質(zhì)干細胞MSCS，并對MSCS的功能、特性進行研究。方法采集9例初診PV患者和6例正常個體的骨髓，應(yīng)用密度梯度離心法結(jié)合貼壁培養(yǎng)法獲取MSCS，并傳代、擴增。擴增至第3代培養(yǎng)細胞，瑞氏染色觀察細胞形態(tài)，隔天消化細胞計數(shù)繪制細胞生長曲線，電鏡檢測MSCS的超微結(jié)構(gòu)，流式細胞術(shù)檢測MSCS免疫表型和細胞周期，通過油紅O染色、VONKOSSA染色檢測MSCS向脂肪、骨的分化，常規(guī)核型分析檢測MSCS染色體，等位基因特異性聚合酶鏈反應(yīng)ASPCR檢測其JAK2V617F點突變，RTPCR檢測其造血因子在MRNA水平的表達。結(jié)果PV和正常個體來源的MSCS均呈成纖維樣貼壁生長，細胞倍增時間約為43H，流式細胞術(shù)檢測大部分細胞處于靜止期90％，只有少部分細胞處于分裂期10％。MSCS表達CD73、CD90，而CD34、CD45、CD133、HLADR均為陰性。MSCS在相應(yīng)的誘導(dǎo)條件下可以向骨、脂肪分化。PV來源的MSCS染色體檢測均為正常核型，其JAK2V617F點突變均為陰性。PV患者的MSCS表達Β2ΜG、SCF、FLT3配體、TPO、LIF、IL6、IL11；不表達GMCSF、GCSF、IL3，與正常人的一致。結(jié)論該細胞群體表現(xiàn)為正常人MSCS的生物學(xué)特性。第三部分大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞體外培養(yǎng)過程中老化的研究目的MSCS因其多向分化潛能和免疫調(diào)節(jié)功能在再生醫(yī)學(xué)和臨床移植中被廣泛研究，需要在體外大量擴增已有人關(guān)注到人MSCS在體外擴增的過程中會漸漸老化。關(guān)于大鼠MSCS在體外擴增過程中老化過程的研究未見報道。我們將大鼠骨髓MSCS在體外擴增、傳代，觀察有無老化現(xiàn)象。方法全骨髓培養(yǎng)法接種大鼠骨髓細胞，貼壁培養(yǎng)獲得骨髓間充質(zhì)干細胞，成骨和成脂肪培養(yǎng)鑒定。在傳代過程中，對每代細胞進行測定。瑞氏染色觀察其形態(tài)，掃描電鏡測定其超微結(jié)構(gòu)，CCK8試劑測定其生長曲線，成骨培養(yǎng)及VOSKOSSA染色，成脂肪培養(yǎng)及油紅O染色，以及衰老相關(guān)性Β半乳糖苷酶染色和P16INK4A基因定量測定。結(jié)果大鼠骨髓單個核細胞經(jīng)貼壁培養(yǎng)獲得的細胞呈梭型或多角型，有成脂肪和成骨分化能力。細胞瑞氏染色示細胞在傳代后漸趨肥大，相差顯微鏡顯示細胞傳代后漸趨扁平。超微結(jié)構(gòu)顯示2代細胞有20％有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度擴張和少量線粒體髓鞘樣變；4代細胞均呈線粒體髓鞘樣變和空泡化。細胞在6代以前增殖旺盛，6代以后生長變緩，8～9代以后細胞幾乎不見生長細胞衰老相關(guān)性Β半乳糖苷酶染色陽性率和P16INK4A基因表達量隨細胞傳代逐漸增加。成脂肪培養(yǎng)顯示細胞自6代以后成脂肪能力減弱。成骨培養(yǎng)顯示細胞自6代以后成骨能力減弱，且成骨培養(yǎng)中的脂肪化現(xiàn)象增多。結(jié)論大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞在體外培養(yǎng)的過程中逐漸老化，增殖能力和分化能力減弱，形態(tài)漸趨扁平肥大在應(yīng)用體外擴增后MSCS進行研究時需考慮細胞老化的狀態(tài)。髓間充質(zhì)干細胞

簡介：分類號R7357學(xué)校代碼10601密級公開編號Y1302126碩士學(xué)位論文PEDPEAPEDPEA1515基因在胰腺癌中的表達及其對胰腺癌基因在胰腺癌中的表達及其對胰腺癌細胞生物學(xué)行為的影響細胞生物學(xué)行為的影響學(xué)科專業(yè)學(xué)科專業(yè)外科學(xué)外科學(xué)肝膽胰方向肝膽胰方向研究方向研究方向胰腺腫瘤胰腺腫瘤研究生姓名研究生姓名黃琦黃琦學(xué)號學(xué)號Y1302126Y1302126學(xué)位類型學(xué)位類型科學(xué)學(xué)位科學(xué)學(xué)位導(dǎo)師姓名導(dǎo)師姓名楊景紅楊景紅二O一六年五月1目錄PEDPEA15基因在胰腺癌中的表達及其對胰腺癌細胞生物學(xué)行為的影響3中文摘要3ABSTRACT5英漢縮略詞對照表8前言10正文121材料與方法1211實驗儀器1212實驗材料1313實驗試劑1314試劑的配制142實驗方法1521胰腺癌細胞的培養(yǎng)1522免疫組織化學(xué)1723逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)1824實時定量聚合酶鏈反應(yīng)2225蛋白印跡實驗2326MTT檢測2627劃痕實驗2728TRANSWELL實驗2929統(tǒng)計學(xué)分析313實驗結(jié)果32

簡介：授予單位代碼10089學(xué)號或申請?zhí)?0142004中國圖書分類號R6569學(xué)術(shù)學(xué)位學(xué)術(shù)學(xué)位MICRNA4903P在結(jié)腸癌組織中的表達與臨床意義及在結(jié)腸癌組織中的表達與臨床意義及其對結(jié)腸癌細胞生物學(xué)行為的影響其對結(jié)腸癌細胞生物學(xué)行為的影響研究生程成導(dǎo)師鄭寶軍教授專業(yè)外科學(xué)二級學(xué)院唐山工人醫(yī)院研究生程成導(dǎo)師鄭寶軍教授專業(yè)外科學(xué)二級學(xué)院唐山工人醫(yī)院2017年3月碩士學(xué)位論文HEBEIMEDICALUNIVERSITY目錄目錄中文摘要1英文摘要4英文縮寫8研究論文MICRNA4903P在結(jié)腸癌組織中的表達與臨床意義及其對結(jié)腸癌細胞生物學(xué)行為的影響前言11材料與方法12結(jié)果22附圖25附表29討論30結(jié)論33參考文獻33綜述結(jié)腸癌MIRNA的部分研究及其相關(guān)腫瘤抑制通路的調(diào)節(jié)37致謝48個人簡歷50

簡介：原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨立進行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本文的研究作出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。論文作者簽名應(yīng)鱉日期沙Z護。玎關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解山東大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)山東大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定論文作者簽名虹導(dǎo)師簽名選日期沙，Z擴。酉

簡介：論文題目王遇堡巡△2量數(shù)麥達盟煎到腿疸里￡蘭細胞生物堂功篚鰒髭墮拯甚扭劍的研塞答辯委員會主席工查明塾握答辯委員會成員奎住塾握蟲圭發(fā)教援陳瞳明教援論文答辯日期2Q墨生5月魚目溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文英文縮略詞表

簡介：分類號單位代L碼10092密級學(xué)號20121270慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾膦堪因?qū)Ω伟㏒MMC7721細胞生物學(xué)行為的影響單位專業(yè)研究生姓名導(dǎo)師姓名及職稱研究起止EL期提交EL期河北北方學(xué)院外科學(xué)王繼濤孫百軍教艘2013．22015．22們5．5目錄中文摘要?????????????????????????1英文摘要?????????????????????????3英文縮寫?????????????????????????6研究論文慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾RRSL基因?qū)Ω伟㏒MMC．7721細胞生物學(xué)行為的影響前言????????????????????????????7日Ⅱ百????????????????????????????????一’7材料與方法??????????????????????8結(jié)果????????????????????????．21附圖????????????????????????23附表?????????????????????????．26討論????????????????????????????．27結(jié)論????????????????????????33參考文獻??????????????????????．．34綜述核糖體蛋白及其調(diào)控蛋白與腫瘤關(guān)系的研究進展????40致謝???????????????????????????50個人簡歷????????????????????????．．51

簡介：點擊查看更多不同血清微環(huán)境培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的生物學(xué)特性及體外標(biāo)記.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：第一部分目的檢測病毒性肝炎后肝硬化組織中是否存在納米細菌，并對可能存在的納米細菌進行分離、鑒定及培養(yǎng)。方法手術(shù)中獲取的12例病毒性肝炎后肝硬化組織及12例正常肝組織標(biāo)本，分別切取部分存于4％中性甲醛溶液中作石蠟包埋切片，以免疫組化法作納米細菌檢測。其余液氮速凍后存于70℃冰箱，留作納米細菌的分離，納米細菌單克隆抗體間接免疫熒光法和電鏡檢測進行鑒定。對分離的納米細菌進行培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中檢測電解質(zhì)及葡萄糖濃度的變化。結(jié)果12例病毒性肝炎后肝硬化組織中10例納米細菌檢測陽性，2例陰性，12例正常肝組織中1例納米細菌檢測陽性，11例陰性，肝硬化組織中納米細菌感染率高于正常肝組織P005，而CA2、P3濃度進行性下降，每周檢測結(jié)果比較存在顯著性差異P005，其余各濃度組之間比較仍存在顯著性差異P005。不同濃度納米細菌作用于正常肝細胞時的LDH值差異有統(tǒng)計學(xué)意義F712064，P001，不同時間點的LDH值差異有統(tǒng)計學(xué)意義F432120P001。納米細菌濃度與作用時間之間存在交互效應(yīng)F217308P001。與正常肝細胞組相比較，除OD0001組納米細菌與其差異無統(tǒng)計學(xué)意義P0835外，其余各組之間兩兩比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義P005。隨著納米細菌濃度的逐步提高，各時間點LDH從細胞內(nèi)釋放的量逐漸升高，并與0小時比較存在顯著性差異P005。NO檢測不同濃度納米細菌作用于人正常肝細胞時，除OD0001組與正常肝細胞對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義外P0206，其余各組與對照組及不同濃度NB組兩兩比較均有統(tǒng)計學(xué)意義P005。不同時間點兩兩比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義P0001。納米細菌濃度與作用時間之間有交互作用F625454，P0001。結(jié)論納米細菌可以損傷人正常肝細胞，隨著濃度升高及作用時間延長，損傷程度越重，且在作用過程中產(chǎn)生NO，存在著濃度和時間依賴關(guān)系。第三部分納米細菌損傷人正常肝細胞機制的初步探討目的探討納米細菌對人正常肝細胞的損傷機制。方法采用線粒體探針觀察不同濃度納米細菌作用人正常肝細胞時，在不同時間點線粒體通透性孔道的開放情況，并結(jié)合電鏡下線粒體超微結(jié)構(gòu)的改變，三磷酸腺苷檢測和流式細胞儀檢測。結(jié)果1OD0001納米細菌作用于正常肝細胞6小時后，即可以觀察到線粒體瞬時通透性孔道有一定程度的開放，部分線粒體跨膜電位出現(xiàn)下降。隨著作用時間的延長，更多的線粒體瞬時通透性孔道進一步開放，至36小時，鈣黃綠素?zé)晒鈴姸冗M一步減弱，MITOTRACKERCMXROS熒光由于線粒體的崩解，彌散分布于細胞內(nèi)。48小時，整個視野的鈣黃綠素?zé)晒鈴姸让黠@黯淡，MITOTRACKERCMXROS熒光在細胞內(nèi)的分布顯得紊亂，無法分辨線粒體外形。結(jié)合同時間點電鏡圖片可以發(fā)現(xiàn)此時的線粒體出現(xiàn)明顯的嵴丟失及空泡化。至72小時，幾乎無鈣黃綠素?zé)晒?，視野的底色顯示為熒光染料的殘跡，MITOTRACKERCMXROS熒光強度黯淡，分布于細胞質(zhì)內(nèi)散在聚集，線粒體跨膜電位完全消失。整個過程中，細胞核仍然維持完整。OD0246納米細菌作用于正常肝細胞3小時即可觀察到PTP開放，6小時即可以看到鈣黃綠素?zé)晒饷黠@減弱，線粒體跨膜電位已經(jīng)開始出現(xiàn)下降。12小時，鈣黃綠素?zé)晒膺M一步減弱，部分線粒體跨膜電位的降低及消失。14小時，線粒體已經(jīng)破裂，MITOTRACKERCMXROS熒光染料外溢至細胞質(zhì)內(nèi)。16小時，鈣黃綠素?zé)晒饣鞠?，大部分線粒體的跨膜電位消失。24小時，僅僅殘留著鈣黃綠素?zé)晒馊玖霞癕ITOTRACKERCMXROS染料痕跡，已無完整的細胞核及細胞形態(tài)。2OD0001納米細菌作用于正常肝細胞36小時，電鏡下可以看到細胞內(nèi)大部分線粒體已經(jīng)廣泛空泡化，嵴丟失。在OD0246作用正常肝細胞12小時，電鏡下觀察到線粒體變得腫脹，嵴結(jié)構(gòu)紊亂，16小時則觀察到肝細胞線粒體均已經(jīng)空泡化，但是細胞核仍維持完整。3OD0246組納米細菌攻擊正常肝細胞6小時引起凋亡。OD0001組納米細菌作用于正常肝細胞24小時，細胞凋亡。OD0018組納米細菌作用24小時僅僅出現(xiàn)一個較低的凋亡峰。4三磷酸腺苷檢測不同濃度的納米細菌作用人正常肝細胞時RLU值有統(tǒng)計學(xué)意義F7808P0013。正常肝細胞組與OD0001，0018組之間RLU值差異無統(tǒng)計學(xué)意義P0614，0213，而與OD00480137及0246組之間均有統(tǒng)計學(xué)意義P0034，0004，0004。OD0137與0246組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義P0970。不同時間點之間RLU差異有統(tǒng)計學(xué)顯著意義F251181P0001，除05小時與0小時P0144，05小時與1小時之間P0053，6小時與48小時P0080，12小時與24小時之間P0366之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義外，余各時間點兩兩比較RLU值差異均有統(tǒng)計學(xué)意義P005。納米細菌濃度與攻擊時間有交互作用F142551，P0001。結(jié)論1納米細菌對于人正常肝細胞的損傷是通過誘導(dǎo)線粒體瞬時通透性孔道的開放實現(xiàn)的。2納米細菌作用于人正常肝細胞會產(chǎn)生凋亡，隨著納米細菌濃度的升高及作用時間的延長，會從凋亡轉(zhuǎn)為壞死。在此過程中，線粒體瞬時通透性孔道的開放和三磷酸腺苷的消耗決定了細胞最終的命運是凋亡還是壞死。