簡介：I愀獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學位論文是我個人在導師指導下進行的研究工作。除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人己經發(fā)表或撰寫過的研究成果。與我一N丁FP的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。本人承擔本聲明的法律責任。糊文作糍蘚婦級隗如7年R月Ⅵ日學位論文版權使用授權聲明本人完全了解第二軍醫(yī)大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，第二軍醫(yī)大學有權保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權第二軍醫(yī)大學可以將學位論文全文或部分內容編入中國學位論文全文數(shù)據庫、中國優(yōu)秀博碩士學位論文全文數(shù)據庫等數(shù)據庫進行檢索?？梢圆捎糜坝　⒖s印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。保密的學位論文在解密后適用本授權書學位論文作者簽名琿晶坂導師簽名易櫛瓠日期少J7年J月即日眺叼年，月≯日

簡介：授予單位代碼授予單位代碼10089學號或申請?zhí)枌W號或申請?zhí)?4077中國圖書分類號中國圖書分類號R39212碩士學碩士學位論文位論文科學學位腫瘤轉移相關基因腫瘤轉移相關基因MTA2在膀胱癌中的表達及對膀胱癌在膀胱癌中的表達及對膀胱癌細胞生物學特性的研究細胞生物學特性的研究學位申請人學位申請人彭克楠彭克楠導師師單保恩單保恩教授教授趙連梅趙連梅助研助研專業(yè)業(yè)免疫學免疫學二級學院院河北醫(yī)科大學河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院第四醫(yī)院2016年3月中國圖書分類號中國圖書分類號R39212中國圖書分類號中國圖書分類號R39212中國圖書分類號中國圖書分類號R39212中國圖書分類號中國圖書分類號R39212中國圖書分類號中國圖書分類號R39212中國圖書分類號中國圖書分類號R39212中國圖書分類號中國圖書分類號R39212中國圖書分類號中國圖書分類號R39212HEBEIMEDICALUNIVERSITYHEBEIMEDICALUNIVERSITY目錄中文摘要1英文摘要3英文縮寫5研究論文腫瘤轉移相關基因MTA2在膀胱癌中的表達以及對膀胱癌細胞生物學特性的研究前言6材料與方法8結果22附圖26附表35討論41結論43參考文獻44綜述腫瘤轉移相關基因MTA2在腫瘤中的研究進展46致謝55個人簡歷56

簡介：舢帥咖ⅢⅧ川洲0㈣Ⅲ川刪Y3333307學校代碼LQ2墨§分類號B223密級公玨UDC蠡§QQ量學號12坌51互隸．初大◆誓博士學位論文重組慢病毒介導的MCM7基因沉默對白血病及肝癌細胞生物學效應的影響研究生姓名一旦亮一．導師姓名陵寶寶申請學位類別醫(yī)堂墟±一級學科名稱直瘞醫(yī)堂二級學科名稱囪型堂答辯委員會主席魅釜生學位授予單位丕直太堂論文答辯日期2Q3Z生§目】Z目學位授予日期評閱人2017年5月20日EFFECTSOFLENTIVIRUSMEDIATEDKNOCKDOWNOFMCM7GENEONHUMANIEUKEMIACEILSANDHEPATOCE¨ULARCARCINOMACEIISADISSERTATIONSUBMITTEDTOSOULHEASTUNIVERSITYBYTIANLIANGSUPEⅣISEDBYCHENBA0一ANSCH00IOFMEDICAISCIENCESOUTHEASTUNIVERSITYMAY2017

簡介：南昌大學碩士學位論文高磷對乳鼠心肌細胞的生物學效應及聚磷菌的除磷作用姓名陳燕申請學位級別碩士專業(yè)營養(yǎng)與食品衛(wèi)生學指導教師曹郁生20110609摘要量、骨橋蛋白OSTEOPONTINOPN含量及表達量情況的影響。高磷對乳鼠心肌細胞有著增殖抑制作用，與對照組相比，0D和第2D時各濃度之間對乳鼠心肌細胞增殖抑制無顯著差異PO05，從第4D起，所有高磷組細胞增殖抑制率均高于對照組PO05。鈣沉積影響結果表明，與對照組相比，三個高磷組鈣沉積量均明顯高于對照組P005，且鈣沉積含量與作用時間及濃度有密切關系。OPN含量及表達量含量結果顯示，與對照組相比，三個高磷組OPN含量及表達量顯著升高PO05，且隨著時間和濃度的增加而明顯增加。3根據C弱P嬲E3活性和DNALADDER方法評價了高磷對乳鼠心肌細胞凋亡的作用。高磷組乳鼠心肌細胞2D后凋亡蛋白酶CASPASE3含量增加，隨著濃度、時間的增加而加增加，CASPASE3含量由對照組1MMOL／L磷的0034PMOL／L上升至9MMOL／L磷的0344PMOL／L。在細胞培養(yǎng)后期，即培養(yǎng)6D后發(fā)現(xiàn)，高磷組6MMOL／L，9MMOL／L培養(yǎng)的乳鼠心肌細胞產生凋亡片段。4從污水中分離到一株高效聚磷茵J12，經生理生化以及16SRDNA鑒定為節(jié)桿菌屬的一個種ARTHROBACTERSP，以初始磷濃度為20MG／L的合成廢水，考查了溫度，PH值，接種量，以及微量元素對J12菌除磷特性的影響。結果表明當培養(yǎng)溫度32℃，PH7，接種量LO％，種齡為16H，添加一定微量元素時，培養(yǎng)10H后，合成廢水中總磷由20MG／L降至O1MG／L，污水中磷的去除率達到995％。關鍵詞高磷；乳鼠心肌細胞；骨橋蛋白；鈣沉積；凋亡；聚磷菌除磷作用

簡介：ATHESISSUBMITTEDTOZHENGZHOUUNIVERSITYFORTHEDEGREEOFMASTERTHEEXPRESSIONOFTHROMBOSPONDIN1INLUNGADENOCARCINOMAANDTHEEFFECTOFITSREGULATIONONTHEBIOLOGICALBEHAVIOROFLUNGADENOCARCINOMACELLSPHDCANDIDATEGAOXIANZHENGSUPERVISORPROF．ZHANGMINGZHIDEPARTMENTOFONCOLOGYTHEFIRSTAFFILIATEDHOSPITALOFZHENGZHOUUNIVERSTIYMARCH2017¨7一㈣6一眥0一叫7一蚴3一洲3一㈣3一MY摘要THBSL在肺腺癌中的表達及其調節(jié)對肺腺癌細胞生物學行為的影響博士研究生高獻爭導師張明智教授鄭州大學第一附屬醫(yī)院腫瘤科河南鄭州450052摘要肺癌是全球范圍內發(fā)病率和死亡率處于首要地位的的惡性腫瘤，2012年公布的統(tǒng)計數(shù)據顯示，全球大約每年有180萬新增肺癌病例，占腫瘤發(fā)生總人數(shù)的近13％，它是男性中最常見的癌癥，在女性中位居第二。肺癌具有進展快、侵襲力高及死亡率高等特點，已經成為死亡人數(shù)最多的癌癥類型。肺癌主要分為小細胞癌SMALLCELLCAD_CER，SCLC和非小細胞癌NONSMALLCELLCANCER，NSCLC，其中后者約占所有肺癌類型的80％。NSCLC貝J主要包括了腺癌、鱗癌、大細胞癌等多種類型，腺癌則是主要類型。目前外科手術切除癌組織是早期非小細胞肺癌的首選治療方法，但多數(shù)患者確診時己處于晚期或進展期，因此只有不到50％的患者能夠進行手術治療。多數(shù)患者則要依賴于化療、放化療和分子靶向治療等綜合治療。尤其是分子靶向治療的應用與研究已經成為現(xiàn)階段醫(yī)學界的一個方向，越來越多的研究集中在各種肺癌的分子研究中。在過去10年中，由于一些新藥物和基于不同組織學亞型和驅動突變的個體化治療方法的引入，使得部分肺癌患者的生存質量和總生存期大大改善。針對表皮生長因子受體基因EPIDERMALGROWTHFACTORRECEPTOR，EGFR和間變性淋巴瘤激酶基因ANAPLASTICLYMPHOMAKINASE，ALK等的基因靶向治療改變YNSCLC的診斷與治療。但部分患者不存在上述基因相關的改變，盡管經過努力并積極進行治療，預后仍然很差。因此，更多的分子驅動基因仍有待研究。血小板凝血酶蛋自家族THROMBOSPONDIN，THBS是最初發(fā)現(xiàn)于血小板中的糖蛋白，但也可以由許多正常和轉化的細胞合成和分泌。THBSL

簡介：分類號R73963學號2014110970重慶醫(yī)科大學碩士學位論文（學術學位）（學術學位）論文題目干擾干擾胰島素樣生長因子結合蛋白相關蛋胰島素樣生長因子結合蛋白相關蛋白1的表達對鼻的表達對鼻咽癌細胞生物學行為的影響咽癌細胞生物學行為的影響作者姓名羅玉杰羅玉杰一級學科名稱臨床醫(yī)學臨床醫(yī)學二級學科名稱耳鼻咽喉科學方向耳鼻咽喉科學方向論文答辯年月20172017年5月指導教師姓名（職稱、單位名稱）江洪江洪教授教授重慶醫(yī)科大學附屬永川醫(yī)院重慶醫(yī)科大學附屬永川醫(yī)院目錄英漢縮略語名詞對照英漢縮略語名詞對照1中文中文摘要摘要3英文摘要英文摘要5干擾胰島素樣生長因子結合蛋白相關蛋干擾胰島素樣生長因子結合蛋白相關蛋白1的表達對鼻咽癌細胞生物學行為的影的表達對鼻咽癌細胞生物學行為的影響7前言前言71材料與方法材料與方法82結果17173討論討論2222全文總結全文總結2424參考文獻參考文獻2525文獻綜述文獻綜述2727參考文獻參考文獻3434致謝致謝4040攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術論文攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術論文4141

簡介：光生物調節(jié)PBM通過光線影響內源光感受器的活性，激活線粒體逆行信號傳導途徑改變細胞增殖和代謝。低水平激光LLL）是用于光生物調節(jié)的常見光源。光譜中這個區(qū)域中的光可以穿透組織且不具有致癌性質。低水平激光LLL已作為非侵入性物理治療應用于臨床，例如骨質疏松癥，通過改變骨髓間充質干細胞的狀態(tài)來發(fā)揮作用。由于光療法廣泛用于醫(yī)學，干細胞療法和光療法的組合似乎是一個更加明智的選擇。LLL對人脂肪間充質干細胞HADSCS的效應機制仍有待研究。一種可能的機制是線粒體呼吸鏈中的細胞色素C氧化酶參與光子吸收。微陣列技術發(fā)現(xiàn)輻照后涉及能量產生和細胞抗氧化保護途徑的基因表達顯著上調。在本文的第一部分，評估了LLL對細胞活力，遷移，抗凋亡能力的影響以及探討了相關機制。使用MTS測量細胞增殖，并通過流式細胞術FLOWCYTOMETRYFCM檢測細胞周期。通過TEM、FCM、QRTPCR和免疫熒光評價LLL對線粒體生物發(fā)生（分裂和融合）和功能ATP，ROS，NO的影響。使用TRANSWELL、免疫熒光、ELISA和WESTERNBLOT評估細胞遷移和細胞骨架改變（肌動蛋白和微管蛋白）。使用流式細胞術、免疫熒光和WESTERNBLOT評估細胞凋亡。研究了低水平激光LLLLLL照射1小時后繼續(xù)培養(yǎng)6小時或24小時后MSCS上述各項指標的變化。作用機制包括增殖速率增加介導的S期比例上調通過融合（MFN1，MFN2和OPA1）和分裂（FIS1，DRP1和MTP18）相關蛋白介導的線粒體生物發(fā)生，以及NRF1，TFAM，PGC1A表達上調和細胞內ROS和NO濃度變化介導的線粒體功能改變通過ERK12和FAK途徑以及生長因子如HGF和PDGF的上調引起細胞遷移加速通過增加BCL2和降低BAX蛋白表達量，或者LLL處理的MSC與5氟尿嘧啶誘導凋亡的MSC之間形成隧道納米管TNT來抵抗凋亡。MSCS在動物模型和臨床上獲得了良好治療效果，對于MSCS和基于它的產品在再生醫(yī)學中的應用將會被持續(xù)探討。MSCS促進組織救援治療的機制包括1涉及到蛋白多肽以及激素分泌的旁分泌作用2通過隧道納米管或者微囊泡轉移線粒體3通過外泌體EXOSOMES轉移RNA等分子。MSC被募集到應激或炎癥部位以實現(xiàn)其修復功能。MSCS的免疫調節(jié)不是自發(fā)的，需要“授權”或激活來發(fā)揮其免疫抑制作用。MSCS表面表達TOLL樣受體TLR，TLR信號傳導參與MSCS的許可。MSC表面表達的TLR3和TLR4可分別被雙鏈RNA如POLYI∶C和脂多糖LPS所激活?；罨疶LR4信號后MSCS會釋放增強炎癥反應的細胞因子（IL6，IL8和TGFB等）從而極化成MSC1型促炎細胞，MSC1型細胞能活化T細胞相反，激活TLR3信號后，MSCS會產生抑制炎癥反應的細胞因子（IDO，PGE2，IL4和IL1RA）極化成MSC2抑炎細胞，MSC2型細胞具有抑制淋巴細胞增殖的能力。在本文的第二部分，探討了LLL對TLR4誘導因子LPS介導的MSCS炎癥反應的抑制作用。通過ELISA試劑盒和QRTPCR評價炎性因子表達和分泌，用CMH2DCFDA和DAFFM試劑盒測量細胞內ROS和NO含量變化，發(fā)現(xiàn)LLL降低LPS誘導MSC中IL1Β，IL6，IL8，ROS和NO的分泌。免疫熒光檢測NFΚB在LLL照射的MSC中核易位相對于LPS誘導組顯著下降。WESTERNBLOT分析表明，LLL通過調節(jié)P65和IΚBΑ的磷酸化抑制NFΚB的活化。將純化的外周血單核細胞PBMC通過植物凝集素PHA刺激后與3種方式處理的MSCS共培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，LLL處理后的MSC顯著降低淋巴細胞激活標記CD25和CD69在PHA刺激的淋巴細胞上的表達。綜上所述，使用1116JCM2劑量的LLL促進MSCS的增殖，遷移和抗凋亡能力以及加強其抑炎作用。LLL可以作為MSC在移植前預處理手段，以達到基于干細胞治療的安全和長期功效。

簡介：分類號R7379UDC密級重慶醫(yī)科大學碩士學位論文論文題目RNAI沉默沉默GRP94表達對乳腺癌表達對乳腺癌MCF7細胞生物學特細胞生物學特性的影響及機制的研究性的影響及機制的研究作者姓名樊建軍樊建軍申請學位級別碩士學科、專業(yè)名稱生物化學與分子生物學生物化學與分子生物學論文答辯年月2015年5月2015年4月指導教師姓名（職稱、單位名稱）宋方洲宋方洲教授教授重慶醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院重慶醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文1英文英文縮略語名詞對照縮略語名詞對照英文縮寫英文縮寫英文全稱英文全稱中文全稱中文全稱CCK8CELLCOUNTINGKIT8細胞計數(shù)試劑盒DEPCDIETHYLPYROCARBONATE二乙基焦磷酰胺ERKEXTRACELLULARREGULATEDPROTEINKINASES細胞外調節(jié)蛋白激酶GRP94GLUCOSEREGULATEDPROTEIN葡萄糖調節(jié)蛋白94HHOUR時HSP90HEATSHOCKPROTEIN90熱休克蛋白90IHCIMMUNOHISTOCHEMISTRY免疫組織化學KBKILOBASEPAIR千堿基對MCF7MICHIGANCANCERFOUNDATION–7乳腺癌細胞系7MGMILLIGRAM微克MINMINUTE分MLMICROLITER微升MRNAMESSENGERRIBONUCLEICACID信使核糖核酸PCRPOLYMERASECHAINREACTION聚合酶鏈反應QRTPCRQUANTIFICATIONALREALTIMEPOLYMERASECHAINREACTION實時熒光定量聚合酶鏈式反應RNAIRNAINTERFERENCERNA干擾RPMREVOLUTIONSPERMINUTE每分鐘轉速SDSSODIUMDODECYLSULPHATE十二烷基硫酸鈉SIRNASMALLINTERFERINGRNA小干擾RNATEMEDTETRAMETHYLETHYLENEDIAMIN四甲基乙二胺TGFΒTRANSFMINGGROWTHFACTBETA轉化生長因子ΒΜGMICROGRAM微克UPRUNFOLDEDPROTEINRESPONSE未折疊蛋白反應

簡介：探討代謝性疾病進展過程中趨化因子對MSCS的作用及機制，可以加深我們對代謝性疾病的認識。阿司匹林可以改善機體的炎癥環(huán)境，因此明確炎癥環(huán)境的改善對MSCS生物學特性的影響，將為深入了解代謝性疾病的發(fā)病機理提供新思路，為臨床診療工作提供新的理論依據。研究目的1明確高熱量攝入對大鼠骨髓來源MSCSBMSCS生物學特性的影響2探討趨化因子CINC3對BMSCS生物學特性的影響及其調控機制3明確阿司匹林對高熱量攝入誘導的炎癥環(huán)境的改善及BMSCS生物學特性的作用研究方法1不同飲食模式喂養(yǎng)的SPRAGUEDAWLEYSD大鼠模型的建立與鑒定6周齡的SD大鼠隨機分為三組，正常飲食組NMALDIET，ND大鼠飼喂基礎飼料，高熱量飲食組（HIGHFATDIET，HFD）大鼠飼喂定制的高熱量飼料（基礎飼料60％，添加10％蔗糖、20％豬油、10％蛋黃粉），重建飲食組2GC大鼠首先飼喂高熱量飼料2個月后，改喂基礎飼料，在喂養(yǎng)的不同時間點監(jiān)測大鼠體重、體長及血清總膽固醇、空腹血糖、胰島素耐量等生理生化指標，同時切取大鼠肝臟、脂肪及骨組織進行組織病理學觀察。2高熱量攝入對大鼠BMSCS生物學特性的影響采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法獲取大鼠BMSCS，倒置顯微鏡下觀察不同飲食模式喂養(yǎng)的大鼠BMSCS的細胞形態(tài)通過MTS法檢測各組細胞的增殖能力并通過MUSE細胞狀態(tài)分析儀對各組細胞的周期及凋亡水平進行檢測利用TRANSWELL法檢測BMSCS的遷移能力選用P3代大鼠BMSCS，分別向成脂成骨方向進行誘導分化，通過組化染色及REALTIMEPCR檢測成脂成骨分化標志基因的表達，明確高熱量攝入對BMSCS定向分化能力的影響通過SAΒGAL染色對不同飲食模式喂養(yǎng)的各組大鼠BMSCS老化程度進行評價，利用MITOSOXTM熒光染色檢測活細胞線粒體超氧化物含量，流式分析法檢測BMSCS過氧亞硝酸鹽含量，并利用REALTIMEPCR檢測BMSCS端粒酶逆轉錄酶TERT、組蛋白去乙?；窼IRT1的表達水平，探討高熱量攝入導致BMSCS老化程度增加的機制。3高熱量攝入誘導的趨化因子CINC3對BMSCS生物學特性的作用不同飲食模式飼喂6個月大鼠，空腹12小時后，大鼠尾靜脈取血并分離血清，采用細胞因子抗體芯片RAYBIORRATCYTOKINEANTIBODYARRAYGSERIES2檢測大鼠血清中相關細胞因子含量，分析高熱量攝入對大鼠血清細胞因子的影響。為探討高熱量攝入誘導的CINC3對BMSCS生物學特性的作用，在BMSCS體外培養(yǎng)基中添加CINC3，研究方法同前，檢測BMSCS的增殖能力、細胞周期及凋亡、遷移能力、并對其老化及機制進行探討。在體外誘導培養(yǎng)基中添加CINC3，不同時間點通過組化染色及REALTIMEPCR檢測成臘成骨分化標志基因的表達，明確高熱量攝入誘導的CINC3的增加對BMSCS定向分化能力的影響。4高熱量攝入誘導的趨化因子CINC3對BMSCS遷移及分化能力的作用機制BMSCS體外培養(yǎng)過程中加入不同濃度的CINC3進行刺激，通過WESTERNBLOT和GLISA的方法檢測相關蛋白ELMO1及ACTIVERAC1的表達并通過功能性封閉抗體ANTICINC3ANTIBODY進一步驗證高熱量攝入誘導的CINC3對ELMO1及ACTIVERAC1的活化通過MTS法檢測ACTIVERAC1的抑制劑NSC23766對BMSCS增殖能力的影響，并利用組化染色和REALTIMEPCR檢測成脂分化標志基因的表達，明確CINC3抑制BMSCS成脂分化的作用機制最后通過SIRNA敲減實驗，敲低BMSCS中ELMO1的表達，探討CINC3影響B(tài)MSCS遷移能力的作用機制。5阿司匹林對改善高熱量攝入誘導的炎癥環(huán)境及BMSCS生物學特性的作用研究6周齡的SD大鼠隨機分為四組ND組大鼠飼喂基礎飼料，HFD組大鼠飼喂定制的高熱量飼料2GC組大鼠首先飼喂高熱量飼料2個月后，改喂基礎飼料重建飲食合并阿司匹林治療組2GCASPIRIN在飼喂高熱量飼料2個月后，改喂基礎飼料的同時添加阿司匹林進行抗炎治療。在喂養(yǎng)的不同時間點監(jiān)測大鼠生理生化指標，并切取大鼠部分組織器官進行組織病理學觀察。采用蛋白質芯片檢測上述四組大鼠飼喂6個月血清中細胞因子水平的變化并對各組大鼠BMSCS的生物學特性進行檢測，研究方法同前，探討阿司匹林對高熱量攝入誘導的炎癥環(huán)境的改善及對BMSCS生物學特性的影響。研究結果1不同飲食模式喂養(yǎng)的SD大鼠模型的建立與鑒定HFD組大鼠隨喂養(yǎng)時間的延長，體型增大，體重和LEES指數(shù)增加，血清總膽固醇、空腹血糖含量升高，且組織胰島素敏感性降低2GC組大鼠在改變飲食后，血清總膽固醇迅速恢復正常，胰島素耐量在改變飲食后4個月2G4C恢復正常。HFD組大鼠喂養(yǎng)6個月6MG肝臟、脂肪及骨組織存在明顯的病理學改變，肝臟組織表現(xiàn)明顯的脂肪變現(xiàn)象，腹腔大網膜處的脂肪組織細胞橫截面直徑增加，骨組織中破骨細胞數(shù)目增多重建飲食組2G4C大鼠的組織器官病理學與正常飲食組6MC無明顯差異。2高熱量攝入對大鼠BMSCS生物學特性的影響與6MC組BMSCS相比，6MG組大鼠BMSCS體外增殖能力降低，G0G1期細胞比例增加，凋亡無明顯變化2G4C組大鼠BMSCS增殖能力、細胞周期及凋亡水平無明顯差異。而6MG組和2G4C組大鼠BMSCS體外遷移能力增加，成脂、成骨分化能力降低BMSCS老化現(xiàn)象明顯，線粒體中超氧化物、過氧亞硝酸鹽含量增加，端粒酶催化亞基TERT、組蛋白去乙酰化酶SIRT1表達水平降低。3高熱量攝入誘導的趨化因子CINC3對BMSCS生物學特性的作用細胞因子蛋白質芯片檢測結果顯示，6MG組大鼠血清中趨化因子CINC3、CX3CL1、LIX的水平比6MC組高出20％以上2G4C組大鼠血清中CINC3、LIX仍舊高于6MC組。ELISA結果進一步證實，2G4C組大鼠血清中CINC3含量高于6MC組，且差異具有統(tǒng)計學意義。體外添加CINC3對BMSCS的增殖無顯著作用，但可促進BMSCS的遷移和老化，并下調BMSCS成脂分化相關基因CEBPΑ和PPARΓ的表達，抑制BMSCS成脂分化。4高熱量攝入誘導的趨化因子CINC3對BMSCS遷移及分化能力的作用機制體外添加CINC3，BMSCS中趨化因子信號轉導通路相關蛋白ELMO1及ACTIVERAC1的表達增加，ANTICINC3中和抗體可特異性抑制CINC3誘導的BMSCS中ELMO1和ACTIVERAC1的活化體外添加ACTIVERAC1的抑制劑NSC23766不影響B(tài)MSCS的增殖，但可在一定程度上逆轉ACTIVERAC1的激活對BMSCS成脂分化的抑制敲減ELMO1后BMSCS遷移能力降低。5阿司匹林對改善高熱量攝入誘導的炎癥環(huán)境及BMSCS生物學特性的作用研究2GCASPIRIN組大鼠的體重、LEES指數(shù)及空腹血糖一直維持在較穩(wěn)定水平，其血清中總膽固醇在改喂正常飲食并抗炎治療后1個月恢復正常胰島素耐量在改喂正常飲食并抗炎治療后3個月恢復正常2G4CASPIRIN組大鼠血清中絕大部分細胞因子恢復正常，CICN3、IL1Α水平仍高于6MC組2G4CASPIRIN組大鼠BMSCS成脂分化能力及老化程度雖未恢復正常，但較2G4C組有所改善。研究結論1本研究構建了高熱量飲食及重建飲食SD大鼠動物模型，發(fā)現(xiàn)大鼠重建飲食4個月2G4C后生理生化指標恢復正常，但其BMSCS與正常飲食組6MCBMSCS相比，老化現(xiàn)象仍然明顯，遷移能力增加，成脂、成骨定向分化能力降低。同時，蛋白質芯片及ELISA對大鼠血清中細胞因子的檢測發(fā)現(xiàn)，2G4C組大鼠趨化因子CINC3水平亦未恢復正常，提示高熱量攝入誘導大鼠血清CICN3的升高可能與BMSCS生物學特性的變化有關。2體外添加CINC3對BMSCS的增殖無顯著作用，但可促進BMSCS的遷移和老化，并抑制BMSCS成脂分化。進一步證實CINC3與BMSCS生物學特性的相關性。3體外添加CINC3可促進CHEMOKINE信號通路中ELMO1及ACTIVERAC1的活化，而ANTICINC3中和抗體抑制其激活敲減ELMO1降低BMSCS的遷移能力體外添加ACTIVERAC1的抑制劑NSC23766可在一定程度逆轉ACTIVERAC1的激活對BMSCS成脂分化的抑制。說明CHEMOKINE信號通路中ELMO1和ACTIVERAC1參與調控BMSCS的遷移及分化。4重建飲食同時添加阿司匹林治療組2G4CASPIRIN大鼠血清中絕大多數(shù)細胞因子均可恢復到正常水平，雖然趨化因子CINC3未完全恢復正常，但其BMSCS老化程度及成脂分化能力均較2G4C組有所改善，說明阿司匹林可在一定程度上改善高熱量攝入誘導的炎癥環(huán)境及其對BMSCS生物學特性的影響。

簡介：碩士學位論文論文題目SPATA5L1基因在KB細胞上皮間質轉化中的生物學意義研究生姓名樊辰指導教師姓名許玉杰專業(yè)名稱放射醫(yī)學研究方向分子核醫(yī)學基礎論文提交日期2015年4月II

簡介：目的探討MIR21在大鼠內皮祖細胞衰老過程中的生物學作用；探討MIR21是否通過調控靶基因HMGA2而實現(xiàn)其在EPCS中生物學作用。方法1密度梯度離心法獲取SD大鼠骨髓來源的單核細胞（BMMNCS），借助差速貼壁法和EPCS專用培養(yǎng)基定向誘導培養(yǎng)EPCS并培養(yǎng)1428天，光學顯微鏡下觀察EPCS的細胞形態(tài)變化，CCK8法分析EPCS的增殖情況、繪制生長曲線，應用流式細胞儀、乙酰低密度脂蛋白、與荊豆凝集素吞噬實驗鑒定細胞表型，用MATRIGEL成管試驗檢測成血管能力；2MIR21的模擬物和抑制物轉染P10代EPCS，檢測MIR21對EPCS增殖情況、運動遷移能力、成血管能力的影響，用細胞衰老Β半乳糖苷酶染色檢測MIR21對EPCS衰老的影響；3探查MIR21的可能靶基因HMGA2，PCR技術檢測MRNA的表達；WESTERNBLOT檢測靶蛋白的表達變化。結果1密度梯度離心法獲得SD大鼠MNCS經體外培養(yǎng)后，表達相應的內皮細胞特異抗原，包括CD133、CD34以及VEGFR2，能夠吞噬DILACLDL與UEA1結合，具有增殖和成血管能力，細胞純度較高；2使用MIR21模擬物和抑制物轉染EPCS48小時后，證實MIR21的抑制物能夠促進EPCS的增殖能力（P結論MIR21表達下調能夠抑制EPCS的衰老，并促進EPCS的增殖、遷移、成血管能力，HMGA2可能是MIR21的靶基因。

簡介：背景與目的膿毒癥是嚴重感染、創(chuàng)傷、燒傷、外科大手術患者常見的并發(fā)癥，進一步發(fā)展可導致膿毒癥休克和多器官功能障礙綜合征MODS，是臨床危重患者死亡的最主要原因之一。全球膿毒癥患者總病例數(shù)約為1800萬年，美國患病人數(shù)為75萬年，歐洲為135萬年。全世界死亡人數(shù)超過14萬天，美國215萬年，并成為美國非心臟ICU死亡的主因。目前對膿毒癥的認識及治療措施有所改進，但膿毒癥的病死率仍然居高不下，已成為現(xiàn)代危重病醫(yī)學面臨的突出難題。根本原因源于膿毒癥的根本發(fā)病環(huán)節(jié)及作用機制尚未充分闡明，故而缺乏早期有效的預防與治療措施。失控的全身炎癥反應是膿毒癥預后不良的重要原因之一。固有免疫細胞是炎癥反應的重要參與者，其異?；罨蓪е率Э匮装Y反應的發(fā)生。感染相關的噬血細胞綜合征IAHS及重癥急性呼吸道綜合征SARS、重癥H1N1等高致死性流行病毒感染性疾病，其病理生理特點亦為失控的全身炎癥反應綜合征。以上疾病存在著固有免疫細胞的異?；罨?，是疾病發(fā)生的重要原因之一，但對于何種原因導致固有免疫細胞的異?；罨枰M一步研究。近年的研究顯示了固有免疫細胞與適應性免疫細胞在炎癥反應中相互作用的復雜性。我們的前期研究顯示T細胞缺陷裸鼠感染呼吸道合胞病毒RSV后，炎癥反應重于野生型小鼠，提示T細胞可能抑制炎癥反應發(fā)生。KIM的研究顯示炎癥早期，淋巴細胞可抑制固有免疫細胞活化。由此，我們推測，膿毒癥，IAHS及SARS等的發(fā)生可能與機體體內淋巴細胞不同程度功能缺陷導致固有免疫細胞異?；罨嚓P。若能對淋巴細胞缺陷動物膿毒癥中固有免疫細胞活化及功能特征進行研究，也許能為以上疾病的發(fā)病環(huán)節(jié)及作用機制研究提供新的思路。內毒素在革蘭陰性細菌感染所致膿毒癥的發(fā)病機制中扮演重要作用，甚至細菌血培養(yǎng)陰性時，也存在內毒素血癥，提示內毒素血癥可是膿毒血癥的單獨致病因素。內毒素具有極廣泛而又復雜的生物學效應，膿毒癥病理過程中出現(xiàn)的失控炎癥反應、免疫機能紊亂、高代謝狀態(tài)及多臟器功能損害均可由內毒素直接或間接觸發(fā)。淋巴細胞缺陷的重癥聯(lián)合免疫缺陷SCID小鼠革蘭陰性細菌感染模型的病理性免疫反應炎癥反應取決于細菌的持續(xù)繁殖擴散和宿主的免疫反應。這一模型給研究單一免疫反應帶來困難。為避免此類情況的發(fā)生，我們擬采用脂多糖LPS腹腔注射誘導T、B細胞缺陷重癥聯(lián)合免疫缺陷小鼠內毒素血癥，通過觀察SCID小鼠巨噬細胞生物學特性，從而揭示淋巴細胞缺陷對炎癥反應的影響以及對巨噬細胞活化的調控作用及其作用可能的分子機制，為膿毒癥的防治提供新的方向和理論依據。第一部分、脂多糖誘導的BALBC小鼠與SCID小鼠內毒素血癥炎癥反應的比較目的在LPS誘導的BALBC小鼠和SCID小鼠內毒素血癥模型基礎上，比較兩種小鼠炎癥反應的差異，觀察淋巴細胞缺陷對固有免疫應答及炎癥反應的影響。方法LPS腹腔注射BALBC小鼠和SCID小鼠后，觀察小鼠的一般狀況及存活率。將32只雄性BALBC小鼠和32只雄性SCID小鼠隨機分為正常對照組，LPS注射后3H，6H和12H組。取小鼠的血清，肝臟及肺臟組織；用全自動生化分析儀檢測兩種小鼠血清谷丙轉氨酶ALT、谷草轉氨酶AST及血尿素氮BUN水平；用HE染色，雙盲法評估肝臟，肺臟的炎癥病理損傷；用流式細胞術微球陣列法CBA檢測兩種小鼠血清TNFΑ，IFNΓ，IL10，IL6及MCP1的水平；用ELISA檢測兩種小鼠血清IL12，IL4及IL17的水平及肝組織勻漿TNFΑ及IL10的水平。結果LPS誘導內毒素血癥后，SCID小鼠于12～24H均死亡88，BALBC小鼠僅1只死亡18；LPS注射后12H，SCID小鼠血清ALT、AST均高于BALBC小鼠，兩種小鼠BUN無顯著差異；SCID小鼠肝臟、肺臟病理評分均高于BALBC小鼠LPS注射后，兩種小鼠血清TNFΑ，IFNΓ，IL10，IL6，MCP1及IL4的水平均顯著升高，且SCID小鼠以上細胞因子水平明顯高于BALBC小鼠；LPS注射后3H，SCID小鼠肝組織勻漿TNFΑ水平高于BALBC小鼠，注射后6H，IL10水平高于BALBC小鼠。結論LPS誘導小鼠內毒素血癥后，與野生型BALBC小鼠比較，SCID小鼠分泌過量的炎性及抗炎細胞因子，出現(xiàn)失控的炎癥反應，導致嚴重的臟器損傷，是SCID小鼠死亡的重要原因。固有免疫應答在缺乏淋巴細胞的狀態(tài)下異常增強，可能是發(fā)生危及生命的重癥全身炎癥反應綜合征的重要原因。第二部分、脂多糖誘導的BALBC小鼠與SCID小鼠內毒素血癥腹腔巨噬細胞活化及功能的比較目的在LPS誘導的BALBC小鼠和SCID小鼠內毒素血癥模型基礎上，比較BALBC小鼠及SCID小鼠腹腔巨噬細胞活化及功能的差異。觀察淋巴細胞缺陷對巨噬細胞活化及功能的影響。方法將40只雄性BALBC小鼠和40只雄性SCID小鼠各自隨機分為正常對照組，LPS注射后1H，3H，6H和12H組。取小鼠的腹腔灌洗液，腹腔巨噬細胞和小鼠脾臟NK細胞；用ELISA檢測腹腔灌洗液TNFΑ和IL10的水平；用實時熒光定量PCR檢測腹腔巨噬細胞TNFΑ和IL10MRNA表達；流式細胞術檢測BALBC小鼠及SCID小鼠正常對照組及LPS注射后3H組腹腔巨噬細胞TLR4，MHCⅡ，CD80，CD86及CD40的表達及LPS注射后12H脾臟NK細胞胞內細胞因子IFNΓ水平；雞紅細胞吞噬實驗檢測兩種小鼠正常對照組腹腔巨噬細胞吞噬功能；并提取兩種小鼠正常對照組腹腔巨噬細胞體外LPS刺激培養(yǎng)，測定上清中TNFΑ，IL6，IL10，IL17及IFNΓ的水平。結果LPS注射后1H，SCID小鼠腹腔灌洗液TNFΑ水平高于BALBC小鼠，注射后3H，IL10水平明顯低于BALBC小鼠；正常對照組及LPS注射后3H，6H和12H組，SCID小鼠腹腔巨噬細胞TNFΑMRNA表達高于BALBC小鼠；正常對照組及LPS注射后各時間點，SCID小鼠腹腔巨噬細胞IL10MRNA表達均低于BALBC小鼠。BALBC小鼠腹腔巨噬細胞吞噬百分率及吞噬指數(shù)均高于SCID小鼠腹腔巨噬細胞；LPS注射后，BALBC小鼠腹腔巨噬細胞TLR4，MHCⅡ，CD80，CD86表達均明顯升高，SCID小鼠腹腔巨噬細胞TLR4，MHCⅡ，CD86表達無明顯變化，BALBC小鼠腹腔巨噬細胞CD40及SCID小鼠腹腔巨噬細胞CD80，CD40均明顯下降；SCID小鼠NK細胞胞內IFNΓ平均熒光值高于BALBC小鼠NK細胞。體外實驗LPS刺激20H后，SCID小鼠腹腔巨噬細胞較BALBC小鼠腹腔巨噬細胞分泌更多的TNFΑ，IL6，但IL10的分泌明顯偏少。結論與野生型BALBC小鼠比較，SCID小鼠腹腔巨噬細胞共刺激分子CD80、CD86的表達自發(fā)性增高，吞噬功能明顯下降。經LPS刺激后，腹腔巨噬細胞TLR4和MHCⅡ和CD80、CD86分子表達無增高，但分泌的炎性細胞因子顯著增加，且NK細胞胞內IFN水平增高。以上表現(xiàn)是SCID小鼠內毒素血癥炎癥反應失控的主要特點。第三部分、MKP1在淋巴細胞對巨噬細胞活化調控中的作用目的在LPS誘導的BALBC小鼠和SCID小鼠內毒素血癥模型基礎上，篩選出可能參與淋巴細胞對巨噬細胞活化調控的信號分子。于體外建立單獨腹腔巨噬細胞組及腹腔巨噬細胞PANT細胞混合培養(yǎng)組模型，采用LPS刺激后，明確所篩選出分子的表達及作用。方法將40只雄性BALBC小鼠和40只雄性SCID小鼠各自隨機分為正常對照組，LPS注射后1H，3H，6H和12H組。提取腹腔巨噬細胞；采用實時熒光定量PCR檢測腹腔巨噬細胞SOCS1，SOCS3及MKP1的MRNA表達，免疫熒光檢測腹腔巨噬細胞MKP1蛋白表達。提取BALBC小鼠腹腔巨噬細胞及脾臟PANT細胞建立單獨腹腔巨噬細胞組及腹腔巨噬細胞PANT細胞混合培養(yǎng)組模型；LPS刺激后，提取貼壁腹腔巨噬細胞及細胞培養(yǎng)上清；實時熒光定量PCR檢測MKP1MRNA的表達；WESTERNBLOT檢測腹腔巨噬細胞MKP1蛋白表達水平；用ELISA檢測上清中TNFΑ、IL6及IL10的水平。結果在LPS注射后3H及6H，SCID小鼠腹腔巨噬細胞SOCS1MRNA表達明顯高于BALBC小鼠；在LPS注射后1H及12H，BALBC小鼠SOCS3表達明顯高于SCID小鼠。正常對照組及LPS注射后，BALBC小鼠腹腔巨噬細胞MKP1MRNA的表達均高于SCID小鼠腹腔巨噬細胞。體外實驗，LPS刺激后，腹腔巨噬細胞與PANT細胞共培養(yǎng)細胞中腹腔巨噬細胞MKP1MRNA及蛋白表達高于單獨培養(yǎng)腹腔巨噬細胞；上清中TNFΑ、IL6水平明顯低于單獨培養(yǎng)巨噬細胞，IL10水平無顯著差異。結論內毒素血癥小鼠淋巴細胞并非通過SOCS1和SOCS3信號分子調控巨噬細胞活化。PANT細胞可抑制LPS刺激下巨噬細胞炎性細胞因子釋放。在LPS誘導炎癥反應小鼠模型中淋巴細胞可能通過促進巨噬細胞MKP1表達，抑制其炎性細胞因子的產生。

簡介：碩士學位論文論文題目B7H4在腫瘤細胞內表達的生物學意義研究研究生姓名曾雙指導教師姓名章良專業(yè)名稱微生物與生化藥學研究方向腫瘤免疫分子的研究學號20134226004論文提交日期2016年4月

簡介：目的利用COL2A1CREERT2IHHFLFL基因工程小鼠所培育的未成熟的小鼠的肋軟骨細胞，使用周期性動態(tài)壓縮應力（FLEXCELL5000施加正弦波、05HZ、5KPA、1HD壓縮應力）的方法探討條件性敲除IHH基因后的軟骨細胞立體培養(yǎng)的力學生物學特性。方法1基因工程小鼠（COL2A1CREERT2IHHFLFL和IHHFLFL）的培育及其基因鑒定。2取剛出生的基因工程小鼠（攜帶IHHFLFL純合基因并且具有COL2A1CREERT2基因）40只。隨機的分為實驗組和對照組，實驗組基因小鼠給予腹腔連續(xù)注射3天TM（TAMOXIFEN），對照組基因小鼠給予腹腔連續(xù)注射3天等量植物油，待第6天時取小鼠肋軟骨，急性消化肋軟骨細胞作為本實驗的細胞來源。3用實時熒光定量PCR技術來檢測IHH基因相對表達量，計算IHH基因的敲除率。4將實驗組與對照組急性消化分離的細胞以2105ML的密度混于15％的海藻酸鈉凝膠中，利用模型制成海藻酸鈉細胞盤。實驗組與對照組各自分為兩組其中一組海藻酸鈉細胞盤用FLEXCELL5000基底加載系統(tǒng)施加動態(tài)壓縮應力正弦波、05HZ、5KPA、1HD7、14、21天；另一組海藻酸鈉細胞盤靜態(tài)培養(yǎng)7、14、21天。5分別在7、14、21天時在倒置顯微鏡下觀察各組軟骨細胞的生長狀況。6通過RTPCR技術測定同一時間點的實驗組和對照組內細胞盤的Ⅱ型膠原、Ⅹ型膠原、蛋白多糖（AGG）、基質金屬蛋白酶13（MMP13）MRNA的相對表達量。7運用半無限體細胞力學模型與微管吸吮技術相結合來測定各組內不同時間點的細胞力學特性。結果1通過RTPCR檢測IHH基因相對表達量發(fā)現(xiàn)實驗組基因小鼠在腹腔注射TM（TAMOXIFEN）后與對照組相比其IHH基因相對表達量降低（P2同一時間點，壓縮刺激可以促進軟骨細胞在海藻酸鈉凝膠中的增殖，倒置顯微鏡觀察細胞盤發(fā)現(xiàn)實驗組、對照組內壓縮細胞盤的細胞密度隨著壓縮刺激天數(shù)的增長而增加，其密度明顯高于同組內靜態(tài)培養(yǎng)組；實驗組基因敲除與對照組未敲除相比敲除IHH后的軟骨細胞盤與未敲除IHH的軟骨細胞盤中的細胞密度相差不明顯。3RTPCR檢測（1）實驗組基因敲除與對照組未敲除立體培養(yǎng)細胞盤相比、壓縮細胞盤相比7天時實驗組的AGG、COLII相對表達量增高P4各組內細胞瞬時模量（E0）、平衡模量（E∞）、表觀黏性（Μ）隨著培養(yǎng)時間的增加而降低，其中實驗組、對照組內壓縮21天的E0、E∞、Μ明顯低于同組內壓縮7、14天（P＜005），7天與14天之間無統(tǒng)計學差異；實驗組與對照組相比較，在同一時間點實驗組立體培養(yǎng)軟骨細胞、動態(tài)壓縮的軟骨細胞的E0、E∞、Μ均大于對照組，其中實驗組內壓縮21天的E0、E∞明顯高于對照組內壓縮21天（P＜005）；實驗組內與對照組內同一時間點的動態(tài)壓縮軟骨細胞的E0、E∞、Μ均大于立體培養(yǎng)軟骨細胞的E0、E∞、Μ，其中實驗組內壓縮7天的軟骨細胞的E0、E∞明顯大于立體培養(yǎng)7天的軟骨細胞的E0、E∞（P＜005）。結論海藻酸鈉立體培養(yǎng)的條件性敲除IHH基因的小鼠肋軟骨細胞在生理性動態(tài)壓縮刺激7天時可以有效的提高COLⅡ和AGG的表達，抑制COLⅩ和MMP13的表達，可以一定程度上改善軟骨細胞的力學性能，然而壓縮天數(shù)越長軟骨細胞所分泌的基質就越少、軟骨細胞力學特性也就隨之減弱。

簡介：目的通過TRANSWELL間接共培養(yǎng)技術研究兔膝關節(jié)軟骨單位對軟骨細胞生物學特性的影響為組織工程技術修復損傷軟骨選取良好種子細胞提供依據。方法用不同消化酶將2月齡新西蘭兔膝關節(jié)軟骨分別消化成軟骨細胞和軟骨單位。按2105個細胞孔濃度接種于TRANSWELL雙層細胞培養(yǎng)板。實驗組軟骨單位接種于上室，軟骨細胞接種于下室；對照組下室接種軟骨細胞，上室未接種。分別在2、4、6、8天提取各組TRANSWELL下室軟骨細胞進行指標檢測。早期凋亡率檢測ANNEXINV和7AAD標記流式細胞儀檢測，TUNEL染色熒光顯微鏡檢測；增殖率檢測PCNA標記流式細胞儀檢測，EDU染色熒光顯微鏡檢測；相關基因相對表達量檢測PCR技術檢測AGG、COLII、MMP13基因相對表達量。結果ANNEXINV和7AAD標記流式細胞儀檢測TRANSWELL下室軟骨細胞早期凋亡率發(fā)現(xiàn)，在實驗早期（第2、4天）實驗組與對照組TRANSWELL下室軟骨細胞早期凋亡率差異不明顯，差別沒有統(tǒng)計學意義（P005）。在實驗第6天、第8天實驗組軟骨細胞早期凋亡率明顯低于對照組（P005）。在實驗第6天、第8天實驗組軟骨細胞增殖率明顯高于對照組（P005）。在實驗后期AGG、COLII基因相對表達量在第6天、第8天時實驗組明顯高于對照組（P結論1軟骨單位作為關節(jié)軟骨的基本功能單位，能夠更長時間有效抵抗或延緩軟骨細胞凋亡、維持軟骨細胞增殖及正向調節(jié)軟骨基質相關物質的基因表達。2軟骨單位有望在組織工程中作為種子細胞用于骨關節(jié)炎關節(jié)軟骨缺損的修復。本實驗課題為國家自然科學基金項目“軟骨單位力學生物學分析及其在關節(jié)軟骨損傷修復中的作用（項目編號31271033）”的子課題。