下調(diào)miRNA-21的表達對前列腺癌PC-3細胞生物學功能的影響及其機制的研究.pdf

1、目的：
　　探究下調(diào)miR-21的表達對雄激素非依賴型前列腺癌PC-3細胞生物學功能的影響及潛在的分子機制
　　方法：
　　1.檢測不同前列腺癌細胞系中miR-21的表達量
　　通過Real-time PCR檢測雄激素依賴型前列腺癌細胞LNcap和雄激素非依賴型前列腺癌細胞PC-3中miR-21表達量的的差異。
　　2.構(gòu)建低表達miR-21的穩(wěn)定PC-3細胞株
　　通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)，分別將miR-

2、21 inhibitor（低表達miR-21組）和NC（陰性對照組）轉(zhuǎn)染至PC-3細胞中。經(jīng)過一定濃度G418篩選鑒定后，得到低表達miR-21的細胞株。
　　3.在穩(wěn)定低表達miR-21的細胞株中進行細胞生物學功能實驗
　　通過CCK-8法檢測細胞增殖能力、利用流式細胞術(shù)AnnexinⅤ-FITC雙染法檢測細胞凋亡、通過劃痕實驗檢測細胞遷移能力、利用Transwell小室實驗檢測細胞侵襲能力。
　　4.在穩(wěn)定低表達m

3、iR-21的細胞株中進行分子機制的探討
　　通過Real-time PCR技術(shù)及WB技術(shù)分別檢測TIMP3在基因和蛋白水平的變化。
　　結(jié)果：
　　1.Real-time PCR的結(jié)果顯示，PC-3細胞中miR-21的表達量比LNcap細胞高。
　　2.轉(zhuǎn)染miR-21 inhibitor后，PC-3細胞中miR-21的表達水平顯著降低。
　　3.在PC-3細胞中，下調(diào)miR-21的表達后，其增殖、遷移及侵

4、襲能力較對照組顯著下降，凋亡能力較對照組顯著增強。
　　4.miR-21下調(diào)后，其靶基因TIMP3在基因和蛋白水平較對照組顯著升高。
　　結(jié)論：
　　1.雄激素非依賴型前列腺癌細胞比雄激素依賴型前列腺癌細胞miR-21表達量高，提示miR-21可以作為腫瘤進展的分子標志物。
　　2.成功構(gòu)建了低表達miR-21的穩(wěn)定PC-3細胞株。
　　3.在PC-3細胞中下調(diào)miR-21的表達可使得其增殖、遷移和侵襲能力