Survivin基因?qū)η傲邢侔㏄C-3細(xì)胞MicroRNA表達(dá)的影響.pdf

1、第一部分：
　　 目的:運(yùn)用RNAi技術(shù)抑制前列腺癌PC-3細(xì)胞中survivin的表達(dá),檢測(cè)survivin抑制對(duì)PC-3細(xì)胞的影響。
　　 方法:構(gòu)建負(fù)載survivin短發(fā)夾RNA(shRNA)的重組腺病毒(pGSadcno-surshRNA),體外轉(zhuǎn)染PC-3細(xì)胞。MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性,流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)凋亡率,RT-PCR和western blot分別檢測(cè)survivin mRNA及蛋白表達(dá)。

2、　　 結(jié)果:負(fù)載survivin shRNA重組腺病毒構(gòu)建成功；實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比在不同的時(shí)間點(diǎn)survivin基因的表達(dá)均受到不同程度的抑制,表現(xiàn)為細(xì)胞增殖活性下降,凋亡增加,survivin mRNA及其蛋白表達(dá)降低。至轉(zhuǎn)染96h后survivin基因抑制最明顯,survivin mRNA及其蛋白的表達(dá)強(qiáng)度分別降低了(72.23±1.11)％和(71.75±2.64)％,細(xì)胞凋亡率達(dá)到(14.43±0.57)％,與陰性對(duì)照組及空白

3、對(duì)照組相比差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　 結(jié)論:腺病毒載體介導(dǎo)的survivin shRNA可有效地抑制PC-3細(xì)胞中survivin的表達(dá),RNAi結(jié)合腺病毒載體抑制survivin表達(dá)有望成為雄激素非依賴前列腺癌的基因治療方法之一。
　　 第二部分：
　　 目的:運(yùn)用microRNA芯片檢測(cè)survivin抑制后前列腺癌PC-3細(xì)胞中microRNAs表達(dá)譜的變化,并預(yù)測(cè)survivin與相關(guān)m

4、iRNAs之間的關(guān)系。
　　 方法:利用負(fù)載survivin短發(fā)夾RNA(shRNA)重組腺病毒(pGSadeno-surshRNA),體外轉(zhuǎn)染PC-3細(xì)胞96h后,收集細(xì)胞提取RNA,microRNA芯片檢測(cè)miRNAs表達(dá)譜變化。
　　 結(jié)果:共有650個(gè)miRNAs表達(dá)信號(hào)在雄激素非依賴前列腺癌PC-3細(xì)胞中可以被檢測(cè)到,有9個(gè)miRNAs的表達(dá)信號(hào)水平高于1000；實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組相比有75個(gè)miRNAs表達(dá)具