原花青素體外對前列腺癌PC-3細胞作用的實驗研究.pdf

1、前列腺癌(prostate cancer，PCa)是危害男性健康的一種嚴重疾病，對前列腺癌的治療至今尚無有效手段，傳統(tǒng)的放療、化療及手術不能解決腫瘤的轉(zhuǎn)移及腫瘤由激素依賴性轉(zhuǎn)向非依賴性的問題。原花青素(procyanidins，PC)是一種多酚類化合物，存在于葡萄籽、山楂、松樹皮等天然植物中，有高效的抗氧化、降血壓、抗腫瘤、抑制細菌生長等生物學活性，并以其高效、低毒、高生物利用度的特點倍受關注。原花青素對人口腔癌、皮膚癌、乳腺癌、胰腺癌

2、、肝癌、胃癌、結(jié)腸癌等有一定的預防或治療作用，而對人雄激素非依賴性前列腺癌PC-3細胞的作用至今尚無相關報道。所以本論文進行了如下研究： 1.運用噻唑藍(MTT)比色法測定了原花青素對PC-3細胞生長的抑制作用，結(jié)果顯示100～300 μg／ml花青素與Pc-3細胞作用24～72 h，原花青素顯著抑制Pc-3細胞生長，并呈時間．劑量效應關系。 2．采用倒置顯微鏡觀察、HE染色以及透射電鏡觀察原花青素對PC-3細胞作用

3、引起的形態(tài)學改變。采用不同濃度的原花青素作用PC-3細胞后，倒置顯微鏡下可見細胞變圓，細胞膜透亮，貼壁能力下降，出現(xiàn)漂浮細胞，表明原花青素使細胞分裂減少，細胞生長受抑制。HE染色后光鏡下觀察可見細胞皺縮變圓、變小，出現(xiàn)多核細胞，核質(zhì)比增大，異染色質(zhì)增多。透射電鏡下分析細胞超微結(jié)構(gòu)，經(jīng)原花青素作用的Pc-3細胞可見細胞明顯水腫，胞膜不完整，細胞質(zhì)內(nèi)有大量空泡，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)空泡化，核膜水腫，高劑量原花青素作用后可見質(zhì)膜、核膜破碎，線粒體嵴消失，細

4、胞器外溢。 3．運用流式細胞術，采用PI染色法和Annexin V-FITC／PI雙染法，觀察不同濃度原花青素誘導Pc-3細胞凋亡的作用。PI染色法結(jié)果顯示，原花青素能將PC-3細胞周期阻滯在Go／G1期；Annexin V-FITC／PI雙染果顯示，300μ/m1原花青素作用6h誘發(fā)42.05％PC-3細胞凋亡；300μg／ml原花青素作用24h誘發(fā)44.86％的細胞凋亡；300μg／ml原花青素作用48 h引起94.37％的

5、細胞壞死，表明原花青素具有誘導Pc-3細胞凋亡和壞死的作用。 4．通過羅丹明123染色檢測原花青素對Pc-3細胞線粒體膜電位(△ψm)的影響。100μg/m1原花青素作用24h可以使弱熒光細胞百分率顯著增多，由32.57％N增至84.70％；300μg／m1原花青素作用24 h為87.3％。表明原花青素可降低PC-3細胞線粒體膜電位。 本研究從細胞和亞細胞水平研究了原花青素對前列腺癌PC-3細胞的作用。通過細胞生長實