丙戊酸長(zhǎng)期給藥抑制前列腺癌PC-3細(xì)胞生長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、一、丙戊酸抑制前列腺癌PC-3細(xì)胞體外增殖的實(shí)驗(yàn)研究。 目的：探討不同濃度丙戊酸(Valproicacid，VPA)長(zhǎng)期給藥對(duì)前列腺癌PC-3細(xì)胞體外增殖以及細(xì)胞周期的影響。 方法：前列腺癌細(xì)胞系PC-3細(xì)胞在含有不同濃度VPA(.、1.0、4．0、8．0mM)培養(yǎng)基中培養(yǎng)96小時(shí)(短期)和2周(長(zhǎng)期)，應(yīng)用四甲基偶氮唑藍(lán)比色分析(MTT)法測(cè)定吸光度A繪制生長(zhǎng)曲線觀察VPA對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制，應(yīng)用流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)不同濃

2、度VPA對(duì)前列腺癌PC-3細(xì)胞周期的影響。采用SPSS12.O軟件，各項(xiàng)計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，應(yīng)用單因素方差分析，P<0.05為差異有顯著性意義。 結(jié)果： (1)短時(shí)間給藥(96h)各濃度VPA與對(duì)照組相比，A值與對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。(2)1.0mM VPA組對(duì)前列腺癌PC-3細(xì)胞的吸光度A值，與對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。4.0mM、8．OmM VPA對(duì)前列腺癌均有不同程度的抑制作用，且隨

3、著藥物濃度的增高，細(xì)胞的抑制率明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，并且呈現(xiàn)出劑量一時(shí)間依賴性關(guān)系。 (3)通過(guò)采用流式細(xì)胞儀技術(shù)DNA倍體檢測(cè)顯示VPA主要是將前列腺癌PC-3細(xì)胞阻滯于G<,1>/G<,0>期(P<0.01)。 結(jié)論：丙戊酸短時(shí)間給藥無(wú)論低濃度還是高濃度下均不能抑制PC-3細(xì)胞的增。v PA干預(yù)具有抑制前列腺癌PC-3細(xì)胞增殖的作用，該作用呈時(shí)間一劑量依賴性關(guān)系；其抑制PC一3細(xì)胞的最佳濃度為4.0mM

4、，最佳作用時(shí)間為超過(guò)10日；VPA能夠使前列腺癌PC-3細(xì)胞停滯于G<,1>/G<,0>期。二、丙戊酸長(zhǎng)期給藥抑制前列腺癌PC-3細(xì)胞裸鼠移植瘤的實(shí)驗(yàn)研究 目的：觀察vPA長(zhǎng)期給藥對(duì)雄激素非依賴性前列腺癌PC-3細(xì)胞裸鼠移植瘤生長(zhǎng)抑制作用，觀察VPA對(duì)PC-3細(xì)胞增殖凋亡的影響，探討VPA的抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用機(jī)制。 方法：培養(yǎng)前列腺癌PC1-3細(xì)胞，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞移植于4～6周齡的裸鼠皮下，隨機(jī)分為對(duì)照和治療組，治

5、療組給予含0.4﹪VPA飲用水，而對(duì)照組給與純的飲用水。每隔2天測(cè)量腫瘤體積一次，熒光偏振免疫法每周檢測(cè)VPA血藥濃度_次，每2周檢測(cè)裸鼠肝功、血常規(guī)一次。給藥4周，脫頸處死所有裸鼠。取裸鼠移植瘤組織，免疫組化檢測(cè)乙酰化組蛋白3(Ac-H3)、p2lWAFl/CIPl、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascuIar endothelialgrowth factor，VEGF)和Ki67表達(dá)，應(yīng)用Leica QWin彩色圖像分析系統(tǒng)作陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)和圖

6、像的定量分析。Western blot檢測(cè)Ac-H3和p21WAFl/CIPl、VEGF蛋白的表達(dá)，以β-actin的表達(dá)作為對(duì)照，計(jì)算治療組和對(duì)照組的相對(duì)光密度，相對(duì)光密度：目的帶強(qiáng)度/β-actin強(qiáng)度。進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。Tumnel法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的凋亡。RT-PCR檢測(cè)VPA對(duì)VEGF表達(dá)的影響。腫瘤體積以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(M±SD)表示，腫瘤抑制率﹪=(1-治療組瘤平均體積/對(duì)照組瘤平均體積)×100﹪。采用SPSS12.0軟件單因

7、素方差分析和t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析處理。P<0.05為差異有顯著性意義。 結(jié)果：結(jié)果表明用藥1周后治療組與對(duì)照組體積存在明顯差異，對(duì)照組腫瘤體積大于治療組，腫瘤生長(zhǎng)抑制率為77.27﹪。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中及實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)檢測(cè)血常規(guī)、肝功能均未發(fā)現(xiàn)異常，VPA血藥濃度21.46±14.25mg/L。免疫組化檢測(cè)發(fā)現(xiàn)治療組AC-H3、p2lWAFl/CIPl表達(dá)強(qiáng)于對(duì)照組，而治療組Ki67表達(dá)弱于對(duì)照組。Western b10t檢測(cè)結(jié)果治療組Ae

8、-H3表達(dá)顯著增加，Ac-H3/β-actin光密度的比值從0.11±0.10增加到0.84±0.11，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。治療組p21wAFl/CIPl表達(dá)明顯強(qiáng)于對(duì)照組，p21WAF1/CIP1/β-actin的光密度比值從0.05±0.0056增加到0.78±0.13，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。治療組VEGF表達(dá)顯著降低，VEGF/β-actin的光密度比值從1.60±0.25降低到0.10±0.08，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

9、義(P<0.01)。RT-PCR結(jié)果表明VEGF在治療組表達(dá)明顯低于治療組，差異存在顯著性(P<0.01)。TuImel法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)治療組平均每個(gè)視野中凋亡細(xì)胞數(shù)高于對(duì)照組，差異有顯著性(P<0.01)。 結(jié)論：(1)VPA長(zhǎng)期給能夠藥抑制PC-3細(xì)胞移植瘤生長(zhǎng)；(2)VPA使Ki67的表達(dá)降低，誘導(dǎo)細(xì)胞分化，抑制腫瘤細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，從而使腫瘤增殖率降低，抑制腫瘤的生長(zhǎng)；(3)VPA長(zhǎng)期給藥具有明顯的脫乙酰化酶抑制活性，上