ADAMDEC1對(duì)人腦膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf

1、目的：研究ADAMDEC1（解聚素金屬蛋白酶家族癸蛋白1）對(duì)人腦膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞的增殖、黏附、侵襲、遷移和凋亡等細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。
　　方法：1.從上海吉?jiǎng)P基因公司提供的三種可能有效的慢病毒（分別攜帶TACCACGAAACCTGAGAACAT、CTGATAAGAAGCTTTGTGTTT、TCCCAGGAATCTTGTGAATTT三個(gè)基因片段）中篩選能夠下調(diào)U87細(xì)胞ADAMDEC1表達(dá)的慢病毒：(1)分別用三種慢病毒感染U87

2、細(xì)胞，篩選最適復(fù)感染指數(shù)值(MOI)，通過(guò)觀(guān)察GFP熒光的表達(dá)情況來(lái)判定轉(zhuǎn)染效率;(2)采用Real-time PC R法分別檢測(cè)三種慢病毒感染后U87細(xì)胞ADAMDEC1mRNA的表達(dá)情況，并對(duì)三種慢病毒感染后U87細(xì)胞ADAMDEC1mRNA的表達(dá)差異進(jìn)行分析比較，篩選出能夠下調(diào)U87細(xì)胞ADAMDEC1表達(dá)的慢病毒;2.實(shí)驗(yàn)組(ADAMDEC1-RNAi)人腦膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞通過(guò)用篩選出的能夠下調(diào)U87細(xì)胞ADAMDEC1表達(dá)的慢

3、病毒在最適復(fù)感染指數(shù)的條件下進(jìn)行感染來(lái)下調(diào)ADAMDEC1的表達(dá)，對(duì)照組(CONTROL-RNAi)用陰性對(duì)照慢病毒（攜帶TTCTCCGAACGTGTCACGT基因片段）在最適復(fù)感染指數(shù)的條件下進(jìn)行感染，采用Western blot法檢測(cè)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的U87細(xì)胞ADAMDEC1蛋白的定性、定量表達(dá)情況，并對(duì)轉(zhuǎn)染后U87細(xì)胞ADAMDEC1蛋白的表達(dá)差異進(jìn)行分析比較;3.采用CCK-8法檢測(cè)兩組細(xì)胞增殖及黏附能力的差異，并對(duì)差異進(jìn)行分析比較;

4、4.采用Transwell法檢測(cè)兩組細(xì)胞侵襲及遷移能力的差異，并對(duì)差異進(jìn)行分析比較;5.采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)兩組細(xì)胞凋亡情況的差異，并對(duì)差異進(jìn)行分析比較。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量數(shù)據(jù)以(x)±s表示，兩組間差異采用t檢驗(yàn)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：1.通過(guò)觀(guān)察GFP熒光的表達(dá)情況可得知：上海吉?jiǎng)P基因公司提供的攜帶特異性基因片段的慢病毒能夠感染人腦膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞，且最適復(fù)感染指數(shù)為2

5、0;2.Real-time PCR結(jié)果顯示：攜帶TCC CAGGAATCTTGTGAATTT基因片段的慢病毒感染人腦膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞后，與對(duì)照組相比，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后的U87細(xì)胞的ADAMDEC1-RNAi mRNA表達(dá)水平均明顯降低(P＜0.01)，即TCCCAGGAATCTTGTGAATTT基因片段為下調(diào)ADAMDEC1基因表達(dá)的有效片段;3.CCK-8檢測(cè)結(jié)果顯示：攜帶有效基因片段的慢病毒感染人腦膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞后，與對(duì)照組相比，下調(diào)A

6、DAMDEC1表達(dá)后的U87細(xì)胞的增殖能力下降(P＜0.05)，黏附能力明顯受到抑制(P＜0.01);4.Transwell檢測(cè)結(jié)果顯示：攜帶有效基因片段的慢病毒感染人腦膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞后，與對(duì)照組相比，下調(diào)ADAMDEC1表達(dá)后的U87細(xì)胞的侵襲和遷移能力均明顯下降(P＜0.01);5.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示：攜帶有效基因片段的慢病毒感染人腦膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞后，與對(duì)照組相比，下調(diào)ADAMDEC1表達(dá)能夠促進(jìn)U87細(xì)胞的凋亡(P＜0.0